Isopimpinellin   中文名称: 异茴芹内酯

Leishmania

Isopimpinellin（口服灌胃，35-150 mg/kg）可抑制患有皮肤肿瘤的 SENCAR 小鼠中 DMBA-DNA 加合物和 B[a]P-DNA 加合物的形成[1]。

雌性 SENCAR 小鼠（7-9 周龄）在研究开始前 2 周和研究期间饲喂 AIN-76A 半纯化饲料（Dyets，宾夕法尼亚州伯利恒）[1]。35-150 mg/kg。在局部应用 [3H]B[a]P（200 nmol，1 Ci/mmol）或 [3H]DMBA（10 nmol，10 Ci/mmol）（均溶于 0.2 mL 丙酮）前 24 小时和 2 小时进行灌胃，悬浮于 0.1 mL 玉米油中。

毒性概述
鉴定和用途：异补骨脂素是从蛇床子果实提取物中分离得到的香豆素衍生物。它曾被用作实验性化学预防疗法。人体研究：异补骨脂素抑制小鼠香豆素7-羟化酶（COH）活性，但对人无此作用。动物研究：据报道，异补骨脂素可引起小鼠持续性光刺激反应。然而，经证实仅含有痕量佛手柑内酯（5-甲氧基补骨脂素）和黄毒素（8-甲氧基补骨脂素）的合成异补骨脂素，在鸡皮生物测定系统中未显示光毒性。这些发现与早期研究表明异补骨脂素对鸡皮具有光毒性的结果相矛盾，并支持异补骨脂素不具有光生物活性的结论。其他一些关于异补骨脂素光活性的报道很可能是由于少量高活性补骨脂素（如佛手柑内酯或黄毒素）的污染所致。异补骨脂素在体外和体内均能抑制小鼠香豆素7-羟化酶（COH）的活性。异补骨脂素强烈抑制胰岛素刺激的脂肪生成。它能诱导肝脏谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）的表达，并且是细胞色素P450 1A1/1B1的强效抑制剂。口服异补骨脂素可阻断SENCAR小鼠和小鼠乳腺（L579）中7,12-二甲基苯并[a]蒽诱导的DNA加合物形成和皮肤肿瘤的发生。许多呋喃香豆素的作用机制是基于它们能够与DNA和其他细胞成分（如RNA、蛋白质以及多种膜蛋白，例如磷脂酶A2和C、钙依赖性和cAMP依赖性蛋白激酶和表皮生长因子）形成光加合物。呋喃香豆素可插入DNA碱基对之间，并在紫外线A照射后生成环加合物。 (L579)

---

相互作用
我们研究了几种先前发现能有效抑制小鼠肝脏乙氧基试卤灵-O-脱乙基酶 (EROD) 和/或戊氧基试卤灵-O-脱烷基酶 (PROD) 的天然香豆素，考察了它们对小鼠表皮中苯并[a]芘 (B[a]P) 和 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) DNA 加合物形成的影响，以及它们对这些多环芳烃 (PAH) 诱导皮肤肿瘤发生的影响。在给予 B[a]P 起始剂量前 5 分钟局部应用强效肝脏 EROD 抑制剂佛手柑内酯，可在治疗后 24 小时内以剂量依赖的方式显著降低 B[a]P 与 DNA 的总共价结合。 400 nmol 的佛手柑内酯可使苯并[a]芘 (B[a]P) 的共价结合减少 72%。400 nmol 的芫荽苷也显著降低了 B[a]P 的总共价结合，减少了 59%。此外，这两种香豆素均选择性地减少了主要 (+)抗-B[a]P-二醇环氧化物-N2-dGuo 加合物的形成。相反，400 nmol 或 800 nmol 的佛手柑内酯和芫荽苷均未显著降低 DMBA 与表皮 DNA 的共价结合。异欧前胡素和异欧前胡素是肝脏 PROD 活性的更强效抑制剂，在 400 nmol 的剂量下，它们分别显著降低了 DMBA 与表皮 DNA 的总结合 67% 和 52%。这两种香豆素在相似剂量下也能抑制B[a]P-DNA加合物的形成，但抑制程度较弱。400 nmol剂量的异戊二烯酮显著降低了由DMBA的反式和顺式二醇环氧化物衍生的共价DNA加合物的形成。佛手柑内酯是B[a]P诱导肿瘤发生的强效抑制剂，而芫荽苷在这方面的效果较差。异戊二烯酮是DMBA诱导皮肤肿瘤发生的有效抑制剂，并且还能完全抑制该多环芳烃的致癌作用。在高于抑制DMBA的剂量水平下，异戊二烯酮也能抑制B[a]P诱导的肿瘤发生。结果表明，几种天然存在的香豆素具有阻断B[a]P和DMBA等多环芳烃诱导的DNA加合物形成和肿瘤发生的能力。DNA加合物形成和肿瘤发生的减少机制似乎与抑制参与这些烃类代谢活化的P450酶有关。最后，某些香豆素对苯并[a]芘 (B[a]P) 和二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) DNA 加合物形成及肿瘤起始的不同影响，可能有助于解析特定细胞色素 P450 在其代谢活化中的作用。
天然香豆素 (NOCs) 通过阻断细胞色素 P450 (P450) 介导的苯并[a]芘 (B[a]P) 和 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) 的生物活化，抑制小鼠多环芳烃诱导的皮肤肿瘤起始。佛手柑内酯选择性抑制 B[a]P 诱导的肿瘤起始，而异欧前胡素和异欧前胡素则抑制两种致癌物诱导的肿瘤起始。本研究旨在检测 NOCs 在体外抑制人 P450 的能力，并确定在小鼠中具有抗癌作用的 NOCs 是否能够阻断培养的人类细胞中致癌物的生物活化。在初始实验中，我们使用含有 5 μM P450、P450 底物、NADPH 生成系统和 NOC 的孵育体系，以确定每种抑制剂抑制 50% P450 活性的浓度 (IC50)。结果证实，NOC 能够抑制多种人 P450，并且对某些人 P450 亚型具有选择性。在后续实验中，我们研究了佛手柑内酯、异欧前胡素和异欧前胡素对人乳腺癌 MCF-7 细胞系中 DMBA 和 B[a]P DNA 加合物形成的影响。将细胞与这三种不同的 NOC 共同孵育，在 2 至 10 μM 的剂量范围内，DMBA DNA 加合物的形成显著抑制了 29% 至 82%；在 20 至 80 μM 的剂量范围内，B[a]P DNA 加合物的形成显著抑制了 37% 至 80%。 DNA水解产物的高效液相色谱分析表明，DNA加合物的抑制与主要B[a]P和DMBA二醇环氧化物衍生加合物的抑制相对应。虽然佛手柑素在小鼠皮肤模型中不能有效阻断DMBA的生物活化，但在MCF-7细胞中，其效果与异欧前胡素和异欧前胡素相似。这些结果表明，存在于柑橘类水果和其他人类饮食成分中的天然香豆素（NOCs）能够抑制致癌物代谢酶，并阻断MCF-7细胞中B[a]P和DMBA的生物活化。天然香豆素（NOCs）在小鼠皮肤模型中具有抗癌作用。为了表征NOCs对乳腺癌的化学预防潜力，我们首先检测了它们对小鼠乳腺中7,12-二甲基苯并[a]蒽（DMBA）-DNA加合物形成的影响。我们假设，那些既能抑制细胞色素P450 1A1/1B1又能诱导肝脏谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）的NOCs，在阻断小鼠乳腺中DMBA-DNA加合物的形成方面最为有效。为了验证这一假设，我们比较了简单的香豆素类化合物（例如香豆素和柠檬素，它们能诱导小鼠肝脏GSTs，但对P450 1A1/1B1的影响很小）和线性呋喃香豆素类化合物（例如异戊二烯酮和异欧前胡素，它们能诱导肝脏GSTs，并且是P450 1A1/1B1的强效抑制剂）。在小鼠接受单次DMBA（50 μg）或多次DMBA（每日20 μg，分别持续3周和6周）给药前，先用NOCs（150 mg/kg体重，灌胃）进行预处理。采用核酸酶 P1 增强的 32P 后标记法定量分析乳腺组织中 DMBA-DNA 加合物的形成。单次给予 DMBA 后，香豆素、柠檬素、异欧前胡素和异欧前胡素分别抑制了 DMBA-DNA 加合物的形成 50%、41%、79% 和 88%。在 DMBA 给药 3 周后，香豆素、柠檬素和异欧前胡素分别抑制了 DMBA-DNA 加合物的形成 36%、60% 和 66%；在 DMBA 给药 6 周后，分别抑制了 0%、49% 和 55%。在一项为期 6 周的剂量反应研究中，研究人员考察了特定 NOC 和 7,8-苯并黄酮（一种强效的 P4501 抑制剂，对 GST 的影响很小），结果显示，柠檬素组 DMBA-DNA 加合物的形成分别被抑制了 0%、43% 和 24%。在异吡啶酮组中，抑制率分别为26%、26%和69%；在7,8-苯并黄酮组中，抑制率分别为80%、96%和97%（剂量分别为35、70和150 mg/kg）。综上所述，这些结果表明，与简单的香豆素相比，线性呋喃香豆素对小鼠乳腺中DMBA-DNA加合物的形成具有更强的抑制作用，并且其主要作用可能是抑制P4501酶。
本研究旨在确定天然呋喃香豆素对7,12-二甲基苯并[a]蒽（DMBA）诱导的皮肤肿瘤发生作用差异的机制基础。雌性SENCAR小鼠在局部涂抹DMBA（10 nmol）5分钟前，分别预先局部涂抹佛手柑内酯、异欧前胡素或异欧前胡素（100-3200 nmol）、7,8-苯并黄酮（7,8-BF，5-40 nmol，一种已知的DMBA小鼠皮肤致癌抑制剂）或丙酮（溶剂对照）。结果显示，异欧前胡素、异欧前胡素和7,8-BF显著抑制了DMBA-DNA加合物的形成，而佛手柑内酯则无此作用。高效液相色谱（HPLC）分析表明，佛手柑内酯优先抑制反式DMBA二醇环氧化物（DMBADE）衍生的DNA加合物的形成，异欧前胡素和异欧前胡素抑制反式和顺式衍生的加合物，而7,8-BF对还原顺式DMBADE-DNA加合物表现出一定的选择性。将分别优先表达P450 1b1和P450 1a1的小鼠胚胎成纤维细胞C3H/10T1/2 (10T1/2) 和小鼠肝癌细胞系1c1c7 (Hepa-1) 与2 μM佛手柑内酯、异欧前胡素、异欧前胡素和7,8-BF以及2 μM DMBA共同孵育。Hepa-1细胞（P450 1a1）主要形成反式DMBADE-DNA加合物。相反，10T1/2细胞（P450 1b1）主要形成顺式DMBADE-DNA加合物。佛手柑内酯抑制DMBA代谢为DMBA-3,4-二醇，并阻断Hepa-1细胞中DNA加合物的形成，但对10T1/2细胞的影响甚微。相反，7,8-BF 完全阻断了 10T1/2 细胞中 DMBA 的代谢和 DNA 加合物的形成，但在 Hepa-1 细胞中几乎没有影响。异欧前胡素和异欧前胡素均抑制了两种细胞系中 DMBA 的生物活化。这些结果表明，佛手柑素是 P450 1a1 的选择性抑制剂，但总体而言，它对小鼠表皮中 DMBA 代谢活化的抑制作用较弱。相反，异欧前胡素、异欧前胡素，尤其是 7,8-BF，它们阻断了小鼠表皮中 DMBA 的代谢活化，似乎对 P450 1b1 的选择性更高。基于我们使用 10T1/2 细胞和 Hepa-1 细胞的研究，P450 1a1 主要负责将 DMBA-3,4-二醇转化为反式-DMBADE，而 P450 1b1 主要负责将 DMBA-3,4-二醇转化为顺式-DMBADE。这些数据表明 P450 1a1 和 1b1 在小鼠表皮中 DMBA 的代谢活化中的作用，并为天然呋喃香豆素（和 7,8-BF）对多环芳烃皮肤致癌作用的不同影响提供了机制解释。

[1]. Oral administration of the citrus coumarin, isopimpinellin, blocks DNA adduct formation and skin tumor initiation by 7,12-dimethylbenz[a]anthracene in SENCAR mice. Carcinogenesis. 2002 Oct;23(10):1667-75.

异补骨脂素是补骨脂素类化合物之一。
据报道，芸香、日本当归以及其他有相关数据的生物体中均含有异补骨脂素。
异补骨脂素存在于当归中。异补骨脂素也存在于欧洲防风草（欧防风）的种子中。
异补骨脂素属于呋喃香豆素类化合物。这类化合物是含有与香豆素部分稠合的呋喃环的多环芳香化合物。
另见：明代当归（Angelica keiskei）顶部（部分）。

---

作用机制
细胞色素P450（P450）和谷胱甘肽S-转移酶（GST）是参与致癌物代谢的两大重要酶家族。通常，P450发挥活化或解毒作用，而GST主要作为解毒酶发挥作用。我们此前已证实，口服线性呋喃香豆素类化合物异欧前胡素和欧前胡素能够调节小鼠多种组织中的P450和GST活性。本研究旨在比较更多天然存在的香豆素类化合物（包括简单香豆素以及线性和角型呋喃香豆素）在口服给药后调节小鼠肝脏药物代谢酶活性的能力。我们发现，所有测试的香豆素类化合物（香豆素、柠檬素、橙皮素、白芷素、佛手柑素、欧前胡素和异欧前胡素）均能诱导肝脏GST活性，而线性呋喃香豆素类化合物诱导肝脏P450活性的能力最强，尤其是P450 2B和3A。这两种情况均与相应酶蛋白表达的增加相对应。异生素诱导P4502B10、3A11和2C9的表达通常是由于孕烷X受体（PXR）和/或组成型雄烷受体（CAR）的激活所致。利用孕烷X受体报告系统，我们的研究结果表明，异欧匹啶林通过在转染细胞中募集共激活因子SRC-1，激活了PXR及其人源同源物SXR。在CAR转染实验中，异欧匹啶林拮抗了雄甾烷醇对全长mCAR（Gal4-mCAR配体结合域融合蛋白）的抑制作用，并恢复了共激活因子的结合。口服异欧匹啶林可诱导野生型CAR(+/+)小鼠肝脏中Cyp2b10、Cyp3a11和GSTain mRNA的表达。相反，在CAR(-/-)小鼠中，异欧芹素诱导Cyp2b10 mRNA的表达减弱，表明异欧芹素是通过CAR受体诱导Cyp2b10的。总的来说，目前的数据表明，天然存在的香豆素类化合物基于其化学结构，在诱导多种外源性代谢酶方面具有不同的活性。

---

治疗用途
/探索治疗/ 目的：从中药材中筛选抗肿瘤活性化合物、类药化合物或先导化合物。方法：从中药材中分离得到11种香豆素类化合物，通过测定其对人膀胱癌细胞系EJ生长的抑制率，研究其体外抗肿瘤活性。结果：结果表明，伞形酮、东莨菪酮、去甲基呋喃妥因、异欧芹素、福贝苷、哥伦比亚素、地库辛和甘草香豆素在体外均能抑制人膀胱癌细胞系EJ的生长，且其活性呈浓度-效应关系。福贝苷、哥伦比亚素、地库辛和伞形酮的抑制作用最强，IC50值分别为7.50×10⁻⁷、2.30×10⁻⁶、6.00×10⁻⁶和1.30×10⁻⁶ mol/L。然而，黄毒素、七叶苷和斯芬丁在此实验条件下对人膀胱癌细胞系EJ的生长没有抑制作用。结论：这些研究结果表明，福贝索苷、哥伦比亚苷、七叶苷、地库辛和伞形酮可能对人类膀胱癌有效，或可被视为强效的类药或先导化合物。
/EXPL THER/ 此前研究发现，几种人类日常饮食中常见的天然香豆素类化合物，在体外可抑制苯并[a]芘 (B[a]P) 和 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) 的 P450 介导代谢，阻断小鼠表皮中 DNA 加合物的形成，并且局部应用于小鼠时可抑制 B[a]P 和/或 DMBA 诱导的皮肤肿瘤发生。本研究旨在探讨两种线性呋喃香豆素类化合物（异欧前胡素和异欧前胡素）口服（70 mg/kg，连续四天）后对小鼠不同组织中P450和谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性以及苯并[a]芘（B[a]P）和二甲基苯并[dMBA]（DMBA）DNA加合物形成的影响。口服给药后1小时和24小时，异欧前胡素和异欧前胡素均显著抑制表皮中乙氧基试卤灵O-脱乙基酶（EROD）和戊氧基试卤灵O-脱烷基酶（PROD）的活性。末次口服给药后1小时，异欧前胡素和异欧前胡素对肺和前胃中EROD活性有轻微抑制作用，对肺和前胃中PROD活性有显著抑制作用。末次口服给药24小时后，表皮和肺中EROD和PROD活性仍保持抑制状态。然而，前胃P450活性已恢复至对照水平。有趣的是，异欧前胡素和异欧前胡素处理在1小时抑制了肝脏EROD活性，此时对PROD活性无影响，但在24小时均提高了这两种酶的活性。EROD和PROD活性的升高与肝脏P450含量的升高相一致。与玉米油对照组相比，异欧前胡素和异欧前胡素处理在最后一次口服给药后1小时和24小时均使肝脏胞质GST活性增加了1.6倍。口服异欧前胡素和异欧前胡素还对苯并[a]芘(B[a]P)和二甲基苯并[a]芘(DMBA)引起的DNA加合物形成具有保护作用。异欧前胡素预处理降低了前胃中DMBA引起的DNA加合物的形成。异欧前胡素预处理降低了肝脏(B[a]P)、肺(B[a]P)和乳腺上皮细胞(DMBA)中的DNA加合物水平。这些结果表明，通过饮食补充异香豆素和异欧前胡素可能具有潜在的化学预防作用。
/EXPL THER/ 本研究旨在评估口服柑橘香豆素异欧前胡素对局部应用苯并[a]芘 (B[a]P) 和 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) 诱导的皮肤肿瘤发生的影响。为了评估口服异欧前胡素对 B[a]P 和 DMBA 诱导的皮肤肿瘤发生的影响，首先评估了其对 DNA 加合物形成的影响。雌性 SENCAR 小鼠在局部应用 B[a]P 或 DMBA 前 24 小时和 2 小时分别预先口服玉米油或异欧前胡素（70 mg/kg 体重）。本实验还纳入了另一种柑橘香豆素异香豆素作为对照。口服异欧芹素和异欧芹素分别显著抑制了苯并[a]芘-DNA加合物的形成，抑制率分别为37%和26%。异欧芹素还抑制了二甲基苯并[a]芘-DNA加合物的形成，抑制率达43%。在另一项剂量反应研究中，口服异欧芹素（35、70和150 mg/kg）分别抑制了二甲基苯并[a]芘-DNA加合物的形成，抑制率分别为23%、56%和69%。在肿瘤研究中，小鼠在注射二甲基苯并[a]芘前24小时和2小时分别口服玉米油或异欧芹素进行预处理，两周后开始注射12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA）进行促肿瘤。与玉米油对照组相比，异欧芹素在30、70和150 mg/kg体重剂量下分别显著降低了每只小鼠的平均乳头状瘤数量，降低率分别为49%、73%和78%。口服异欧前胡素显著降低了小鼠乳头状瘤的发生率，最高剂量组（150 mg/kg）也观察到了这一结果。为了进行比较，本研究还评估了局部应用异欧前胡素在较宽剂量范围内对DMBA诱导的肿瘤发生的有效性。作为本研究的一部分，我们评估了口服异欧前胡素和欧前胡素后小鼠的多种全身毒性指标。小鼠连续四天每日一次口服玉米油、异欧前胡素或欧前胡素（35、70和150 mg/kg体重），末次给药后24小时处死小鼠，并对其肝脏、肺脏和肾脏进行组织学评估。此外，我们还检测了尿液肾毒性指标、血液肝肾功能指标以及凝血酶原时间。结果显示，未观察到血液凝固、肾脏或肝脏功能的显著变化。然而，肝脏重量显著增加，并伴有肝细胞胞质空泡化。肺和肾脏未见组织病理学改变。总体而言，这些数据表明，口服异欧前胡素（和欧前胡素）对DMBA诱导的皮肤肿瘤具有化学预防作用。

C13H10O5

246.2155

246.052

482-27-9

68079

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

448.7±45.0 °C at 760 mmHg

150-151ºC

225.1±28.7 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.612

2.31

61.81

0

5

2

18

366

0

DFMAXQKDIGCMTL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C13H10O5/c1-15-10-7-3-4-9(14)18-12(7)13(16-2)11-8(10)5-6-17-11/h3-6H,1-2H3

4,9-dimethoxyfuro[3,2-g]chromen-7-one

Isopimpinellin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 49~50 mg/mL (199.0~203.1 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (10.15 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (10.15 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。