| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Alpha/beta-hydrolase domain containing 6 (ABHD6) (IC50 = 0.8 – 1.7 nM, gel-based ABPP; IC50 = 3.9 – 15.1 nM, 2-AG hydrolysis assay)
Diacylglycerol lipase β (DAGLβ) (~50% inhibition at 1 µM). [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在使用定制探针HT-01对Neuro2A细胞膜蛋白质组进行的基于凝胶的竞争性活性蛋白质谱分析中，KT203（化合物20）高效抑制了内源性ABHD6的活性。[1]
在使用过表达重组小鼠ABHD6的HEK293T细胞膜裂解液进行的2-花生四烯酸甘油（2-AG）底物水解实验中，KT203抑制了ABHD6的活性。[1] 使用广谱丝氨酸水解酶探针FP-rhodamine对小鼠脑膜蛋白质组进行的基于凝胶的竞争性ABPP分析显示，在1 µM浓度下，KT203选择性抑制ABHD6，除对DAGLβ有中等程度（约50%）抑制外，未观察到对其他SH的脱靶作用。在10 µM浓度下，观察到对FAAH和DAGLβ的脱靶活性。[1] 在Neuro2A细胞中进行的定量质谱ABPP-SILAC分析显示，用3 nM KT203处理4小时后，其阻断了>90%的ABHD6活性，而对蛋白质组中检测到的其他50多种SH的交叉反应性可忽略不计（抑制<50%）。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
小鼠腹腔注射1 mg/kg剂量的KT2034小时后，通过基于凝胶的竞争性ABPP（使用HT-01探针）检测，其肝脏中的ABHD6活性几乎被完全阻断。在较低剂量（0.5和0.1 mg/kg）下，KT203仍能强力抑制（约80%）肝脏中的ABHD6。[1]
与其在肝脏中的作用相反，在所有测试剂量（0.1、0.5和1 mg/kg，腹腔注射）下，KT203对大脑中的ABHD6活性均无明显抑制，表明其活性具有外周限制性。[1] KT203在体内显示出良好的选择性。在肝脏中，它对多种羧酸酯酶（CES）几乎没有交叉反应性（CES是丝氨酸水解酶抑制剂的常见脱靶靶点）。在使用FP-rhodamine探针进行的脑和肝脏凝胶ABPP分析中，显示出最小的脱靶活性。[1] |
| 酶活实验 |
使用2-AG水解实验测定ABHD6活性。将过表达重组小鼠ABHD6的HEK293T细胞膜裂解液在测定缓冲液（含0.05% Triton X-100的PBS）中稀释。裂解液先与DMSO或化合物在37°C下预孵育30分钟。通过加入2-AG底物（终浓度100 µM）启动反应，并在37°C下孵育30分钟。通过加入含有内标（十五烷酸）的氯仿:甲醇混合物（2:1 v/v）终止反应。涡旋离心后，对有机相进行LC-MS分析，以定量水解产物花生四烯酸的释放量。[1]
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| 细胞实验 |
为测量原位效力，用不同浓度的KT203在无血清培养基中处理Neuro2A细胞4小时（37°C）。然后裂解细胞，制备膜蛋白质组。通过使用HT-01探针（1 µM，30分钟，37°C）标记，对蛋白质组进行基于凝胶的竞争性ABPP分析。经SDS-PAGE和凝胶内荧光扫描后，使用图像分析软件量化剩余的ABHD6活性百分比，以确定IC50值。[1]
为进行细胞水平的蛋白质组范围选择性分析（ABPP-SILAC），Neuro2A细胞在“轻”或“重”SILAC培养基中培养。“重”标记细胞用3 nM KT203处理4小时，而“轻”标记细胞用DMSO处理。收集细胞，裂解，分离膜和可溶性蛋白质组。用FP-生物素（10 µM，2小时）标记蛋白质组以富集丝氨酸水解酶。将轻重蛋白质组按1:1混合，使用亲和素珠捕获生物素化蛋白。在珠上进行胰蛋白酶消化，所得肽段通过LC-MS/MS分析。计算对应于各个丝氨酸水解酶的肽段的重/轻比值，以确定抑制程度。[1] |
| 动物实验 |
为了进行体内疗效和选择性研究，将KT203腹腔注射(ip)给C57Bl/6小鼠。该化合物配制于18:1:1 (v/v/v)的生理盐水/乙醇/PEG40（乙氧基化蓖麻油）溶液中，注射剂量为每克体重10 µL。小鼠接受不同剂量的KT203（0.1、0.5或1 mg/kg）治疗。4小时后，对小鼠进行麻醉并处死。收集脑组织和肝组织，在PBS中匀浆，并进行差速离心以分离膜组分。然后使用HT-01和FP-罗丹明活性探针，通过基于凝胶的竞争性ABPP分析膜蛋白组，以评估ABHD6抑制和整体丝氨酸水解酶选择性。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
KT203（化合物 20）是一种优化的不可逆抑制剂，属于 (2-取代)-哌啶基-1,2,3-三唑脲类化合物，最初是作为 ABHD6 的化学探针开发的。[1]
它的开发是通过构效关系 (SAR) 研究实现的，该研究着重于在三唑联苯基团上引入极性取代基并修饰哌啶取代基。KT203 的特点是哌啶环上有一个 2-苄基，并且在三唑联苯基团远端苯环的 3 位上有一个羧酸取代基。[1] KT203 是一种高效且选择性的 ABHD6 失活剂，预计其通过氨基甲酰化酶活性位点的丝氨酸亲核试剂而不可逆地抑制该酶。 [1] KT203 的一个关键特征是其体内活性仅限于外周。虽然它能有效抑制肝脏中的 ABHD6，但在大脑中的活性却微乎其微，这可能是由于其羧酸基团降低了其在中枢神经系统 (CNS) 中的渗透性。这一特性使其成为与脑渗透性抑制剂 KT182（化合物 9）配对的探针，用于区分动物模型中 ABHD6 的中枢和外周功能。[1] KT203 的开发满足了研究 ABHD6 功能所需的优化工具的需求。ABHD6 是一种丝氨酸水解酶，可水解内源性大麻素 2-花生四烯酸甘油酯 (2-AG)，并可能在神经炎症和神经保护中发挥作用。[1] |
| 分子式 |
C28H26N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
466.531046390533
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| 精确质量 |
466.2
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| CAS号 |
1402612-64-9
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| PubChem CID |
53364510
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| LogP |
5.3
|
| tPSA |
88.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
719
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(C2=CC=C(C3=CN(C(N4CCCCC4CC4=CC=CC=C4)=O)N=N3)C=C2)=CC=CC(C(O)=O)=C1
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| InChi Key |
SSSCOJOXPDDHOO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H26N4O3/c33-27(34)24-10-6-9-23(18-24)21-12-14-22(15-13-21)26-19-32(30-29-26)28(35)31-16-5-4-11-25(31)17-20-7-2-1-3-8-20/h1-3,6-10,12-15,18-19,25H,4-5,11,16-17H2,(H,33,34)
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| 化学名 |
3-[4-[1-(2-benzylpiperidine-1-carbonyl)triazol-4-yl]phenyl]benzoic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~214.35 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1435 mL | 10.7174 mL | 21.4348 mL | |
| 5 mM | 0.4287 mL | 2.1435 mL | 4.2870 mL | |
| 10 mM | 0.2143 mL | 1.0717 mL | 2.1435 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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