| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Dihydroorotate dehydrogenase (DHODH); Prostaglandin endoperoxide H synthase (PGHS)-1 and -2 (COX-1 and COX-2).
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| 体外研究 (In Vitro) |
连续五天，使用脂多糖 (LPS) 刺激小鼠脾细胞释放免疫球蛋白。拉氟尼莫司可降低 IgM 和 IgG 的分泌，IC50 值分别为 2.5 µM 和 2 µM。加入 50 µM 尿苷后，IC50 值分别升高至 70 µM 和 60 µM。在 70Z/3 细胞中，拉氟尼莫司抑制 κ 轻链细胞表面的表达，而尿苷也能逆转这一特性[1]。在抑制豚鼠多形核白细胞中的 PGHS（IC50 分别为 415 和 4400 nM）以及分离的绵羊 PGHS-1（IC50 = 64 和 742 µM）和 PGHS-2（IC50 = 100 和 2766 µM）方面，拉氟尼莫司 (HR325) 比 A77 1726[2] 更有效。
拉氟尼莫司是一种口服有效的二氢乳清酸脱氢酶 (DHODH) 抑制剂，DHODH 是嘧啶核苷酸从头合成的限速酶。通过抑制 DHODH，拉氟尼莫司可耗竭细胞内尿苷单磷酸 (UMP) 池，而 UMP 是 DNA 和 RNA 合成所必需的。这种抗增殖作用在活化的 T 细胞和 B 细胞上最为显著，这些细胞在克隆扩增过程中高度依赖嘧啶的从头合成。拉氟尼莫司可抑制免疫球蛋白 (Ig) 的分泌，对 IgM 和 IgG 分泌的 IC50 值分别为 2.5 uM 和 2 uM。它还能抑制前列腺素内过氧化物 H 合酶 (PGHS)-1 和 -2 的活性，IC50 值在低微摩尔范围内。这种双重机制——既靶向淋巴细胞增殖又靶向促炎性前列腺素的产生——赋予了拉氟尼莫司广泛的抗炎特性。体外实验表明，拉氟尼莫司还能抑制炎症级联反应中其他酶的活性，但这些作用的临床意义尚不明确。外源性尿苷的加入可以逆转拉氟尼莫司的免疫抑制作用，因为尿苷能够绕过二氢乳清酸脱氢酶（DHODH）的阻断，从而证实了其作用机制。在某些实验中，拉氟尼莫司对DHODH的抑制作用比其类似物来氟米特更强。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
HR325（50 mg/kg；口服；SRBC 注射后第 14-18 天）的 ID50 值为 38 mg/kg，可抑制二次抗绵羊红细胞 (SRBC) 抗体反应[1]。
拉氟尼莫司已在多种动物模型中展现出体内免疫抑制和抗炎活性。在佐剂诱导关节炎大鼠模型（类风湿性关节炎模型）中，口服拉氟尼莫司可显著减轻爪肿胀和关节破坏，其疗效与来氟米特相当或更优。在多发性硬化症小鼠模型（实验性自身免疫性脑脊髓炎，EAE）中，拉氟尼莫司治疗可延缓疾病发作并减轻临床症状的严重程度。这些作用与炎症细胞浸润中枢神经系统（CNS）减少以及促炎细胞因子水平降低有关。在器官移植模型中，拉氟尼莫司已被证实可延长皮肤同种异体移植的存活时间。这些体内数据支持拉氟尼莫司作为自身免疫性疾病口服疗法的潜力。其在这些模型中的活性归因于其抗增殖和抗炎特性。 |
| 酶活实验 |
采用分光光度法测定拉氟尼莫司对二氢乳清酸脱氢酶 (DHODH) 的抑制活性，该方法将二氢乳清酸 (DHO) 的氧化与 2,6-二氯靛酚 (DCIP) 的还原偶联。将重组人 DHODH 与不同浓度的拉氟尼莫司（通常为 0.001-100 uM）在测定缓冲液（例如，50 mM Tris-HCl，pH 8.0，0.1% Triton X-100，100 uM 癸基泛醌（辅酶 Q10 类似物））中孵育。加入底物 L-二氢乳清酸 (DHO，200 uM) 启动反应。酶将 DHO 转化为乳清酸，并将电子转移至电子受体 DCIP，使其由蓝色（氧化态）还原为无色（还原态）。还原反应可通过 600 nm 处的吸光度下降来监测。反应速率在最初几分钟内呈线性变化。IC50 值定义为使反应速率降低 50% 的抑制剂浓度。PGHS-1 和 PGHS-2 抑制试验采用比色活性测定法。将绵羊 PGHS-1 或重组人 PGHS-2 与花生四烯酸（底物）在有或无拉氟尼莫司存在的情况下孵育。通过酶免疫测定 (EIA) 或 N,N,N',N'-四甲基对苯二胺 (TMPD) 氧化法测定生成的 PGG2 或 PGH2 的量。计算每种亚型的 IC50 值。
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| 细胞实验 |
拉氟尼莫司的细胞免疫抑制作用可通过混合淋巴细胞反应 (MLR) 或检测活化 B 细胞的免疫球蛋白 (Ig) 分泌来评估。对于 MLR，从两名健康供体中分离外周血单核细胞 (PBMC)。其中一名供体的细胞经丝裂霉素 C 处理或照射以抑制其增殖，作为刺激细胞。另一名供体的未经处理的细胞（反应细胞）与刺激细胞以 1:1 的比例（例如，每孔 100,000 个细胞）在 96 孔板中，使用添加 10% 人血清的 RPMI-1640 培养基进行共培养。向孔中加入不同浓度的拉氟尼莫司（0.1-100 μM）或溶剂对照。细胞在 37℃ 下孵育 5-7 天。通过在培养的最后18-24小时加入[3H]-胸苷（1 μCi/孔）来测量反应细胞的增殖。然后将细胞收集到玻璃纤维滤膜上，并通过闪烁计数法测量掺入的放射性。计算抑制增殖的IC50值。对于Ig分泌测定，从外周血单核细胞（PBMC）中分离人B细胞，并用CD40L和IL-4的组合或Toll样受体激动剂激活。然后将激活的B细胞在不同浓度的拉氟尼莫司存在下培养7-10天。通过ELISA测量培养上清液中IgM和IgG的水平。计算抑制Ig分泌的IC50值。对于基于细胞的 DHODH 检测，拉氟尼莫司抑制活化 T 细胞增殖的能力可以通过向培养基中添加尿苷（50-100 μM）来恢复，尿苷通过提供嘧啶的外部来源来绕过 DHODH 阻断。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性CD-1小鼠（20-24克）[1]
剂量：50毫克/千克 给药途径：口服；注射绵羊红细胞后第14-18天 实验结果：在该模型中，口服HR325可剂量依赖性地抑制循环抗绵羊红细胞IgG的水平。 拉氟尼莫司的体内疗效通常在佐剂诱导性关节炎（AIA）大鼠模型中进行评估。雌性Lewis大鼠（6-8周龄，150-200克）麻醉后，将100微升热灭活的丁酸分枝杆菌矿物油悬浮液（10毫克/毫升）皮内注射至尾根部（第0天）。通常在10-14天后，后爪会出现关节炎反应。第7天，将动物随机分为治疗组（n=8-10）。拉氟尼莫司配制于赋形剂中，例如0.5%甲基纤维素或10%二甲基亚砜（DMSO）、40%聚乙二醇300（PEG300）、5%吐温80和45%生理盐水，从第7天到第21天，每天灌胃一次。剂量通常为1-30毫克/公斤。对照组仅接受载体，阳性对照组接受来氟米特（10 mg/kg，口服）。每日或隔日通过目测评估每只爪子的关节炎严重程度，评分采用 0-4 分制（0=正常，1=红斑/肿胀，2=更严重的肿胀，3=严重的肿胀/关节僵硬，4=关节强直）。四只爪子的评分总和即为每只动物的总临床评分（最高 16 分）。在第 0、7、14 和 21 天，使用体积描记器测量爪子（踝关节）的体积。研究结束时（第 21 天），对动物实施安乐死，并收集后爪进行组织病理学分析（苏木精-伊红染色），以评估炎症、滑膜形成、软骨侵蚀和骨吸收情况。也可拍摄后爪的 X 光片。在EAE模型中，雌性C57BL/6小鼠皮下注射乳化于完全弗氏佐剂（CFA）中的MOG35-55肽进行免疫。于第0天和第2天腹腔注射百日咳毒素。小鼠从第0天或症状出现时开始口服拉氟尼莫司治疗。每日监测临床评分。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
拉氟尼莫司是一种口服活性化合物，具有良好的药代动力学(PK)特性。在大鼠中，口服给药后吸收良好，半衰期(t1/2)约为4-6小时。血浆峰浓度(Cmax)在1-3小时内达到(Tmax)。该化合物分布容积(Vd)较大，表明其组织分布广泛。其血浆蛋白结合率很高(>99%)。主要清除途径是通过代谢，可能在肝脏进行，代谢产物经胆汁和尿液排泄。其他物种（例如，犬、猴）的药代动力学特征相似。口服生物利用度良好，支持在临床前模型中每日一次给药。目前，标准静脉给药研究的详细药代动力学参数尚未公开。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
拉氟尼莫司已在临床前毒理学研究中进行评估，以支持其潜在的临床开发。其主要毒性与其作用机制（抑制二氢乳清酸脱氢酶）相关，因此预计为靶向毒性。在大鼠和犬的重复给药口服毒性研究中，主要发现是剂量依赖性的淋巴细胞计数减少（淋巴细胞减少症）和胸腺萎缩，这与免疫抑制一致。其他不良反应包括可逆性胃肠道紊乱（腹泻、呕吐）和皮疹。在高剂量下，观察到肝毒性和骨髓抑制。这些不良反应是二氢乳清酸脱氢酶抑制剂类药物的典型特征。这些研究确定了未观察到不良反应剂量（NOAEL），从而建立了安全范围。未报告显著的遗传毒性。由于 DHODH 在胚胎发育中起着关键作用，并且已知其他 DHODH 抑制剂具有致畸性，因此 Laflunimus 在妊娠期间禁用。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
拉氟尼莫司是已获批准药物来氟米特（Arava®）活性代谢物的类似物。来氟米特在临床上用于治疗类风湿性关节炎（RA）和银屑病关节炎。拉氟尼莫司的研发初衷是作为一种潜在的替代药物，以期获得更佳的疗效和安全性。尽管拉氟尼莫司在临床前模型中展现出一定的疗效，但目前尚未获准用于任何临床用途，也未上市销售。它仅作为研究工具，用于研究二氢乳清酸脱氢酶（DHODH）抑制剂的作用。其作用机制与来氟米特的活性代谢物特立氟胺（Aubagio®）相似，后者已获准用于治疗多发性硬化症。添加尿苷可逆转拉氟尼莫司的免疫抑制作用，尿苷是DHODH抑制剂的标准诊断试验。该化合物也是前列腺素合成抑制剂，这可能有助于其发挥抗炎作用，并使其与来氟米特有所区别。拉氟尼莫司是一种有用的研究化合物，可用于研究从头嘧啶合成途径在淋巴细胞生物学和自身免疫中的作用。
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| 分子式 |
C₁₅H₁₃F₃N₂O₂
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|---|---|
| 分子量 |
310.27
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| 精确质量 |
310.093
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| CAS号 |
147076-36-6
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| PubChem CID |
54684599
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| 外观&性状 |
Yellow to khaki solid powder
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| 密度 |
1.441g/cm3
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| 沸点 |
408.7ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
201ºC
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| 蒸汽压 |
2.06E-07mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.588
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| LogP |
3.77
|
| tPSA |
73.12
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
529
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=C(C=CC(=C1)NC(=O)/C(=C(/C2CC2)\O)/C#N)C(F)(F)F
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| InChi Key |
GDHFOVCRYCPOTK-QBFSEMIESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H13F3N2O2/c1-8-6-10(4-5-12(8)15(16,17)18)20-14(22)11(7-19)13(21)9-2-3-9/h4-6,9,21H,2-3H2,1H3,(H,20,22)/b13-11-
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| 化学名 |
(Z)-2-cyano-3-cyclopropyl-3-hydroxy-N-[3-methyl-4-(trifluoromethyl)phenyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
LaflunimusHR-325HR325
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~161.15 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.2230 mL | 16.1150 mL | 32.2300 mL | |
| 5 mM | 0.6446 mL | 3.2230 mL | 6.4460 mL | |
| 10 mM | 0.3223 mL | 1.6115 mL | 3.2230 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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