Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)   中文名称: 达诺斯他

HDAC1 ( IC50 = 9 nM ); HDAC ( IC50 = 32 nM )
Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824) is a potent inhibitor of class I histone deacetylases (HDACs) with moderate activity against class IIb HDAC6, and no significant activity against class IIa or III HDACs. In recombinant HDAC enzyme assays: - HDAC1: IC50 = 3 nM [1,2]
- HDAC2: IC50 = 4 nM [1,2]
- HDAC3: IC50 = 5 nM [1,2]
- HDAC6: IC50 = 25 nM [1,2]
- HDAC4/5/7 (class IIa) and sirtuins (class III): IC50 > 1000 nM [1,2]

体外活性：LAQ824 通过激活 p21 启动子来激活编码 p21 细胞周期抑制剂的基因的表达，最大启动子激活 (AC50) 为 0.30 μM 的 50%。 LAQ824 抑制非小细胞肺癌细胞系 H1299 和结肠癌细胞系 HCT116 的细胞生长，IC50 分别为 0.15 μM 和 0.01 μM，且 LAQ824 的抗增殖作用对肿瘤细胞系具有选择性同时仅诱导正常成纤维细胞生长停滞。此外，LAQ824 还可诱导 A549 细胞中 p21 蛋白的剂量依赖性增加以及 Rb 肿瘤抑制因子的低磷酸化状态的增加。最近的一项研究表明，LAQ824 可诱导 IL-10 基因启动子水平的染色质变化，从而增强转录抑制因子 HDAC11 和 PU.1 的募集，并抑制 BALB/c 小鼠巨噬细胞中 IL-10 的产生。激酶测定：使用 Q Sepharose Fast Flow 柱通过离子交换层析从 H1299 细胞裂解液中部分纯化 HDAC 酶。使用 cdk2 多克隆抗体或 cdk1/cdc2 单克隆抗体进行免疫沉淀，从 500 mg 总细胞裂解液中收集酶复合物。将免疫沉淀物重悬于激酶缓冲液中（50 mM Hepes，pH 8，10 mM MgCl2，2.5 mM EDTA，1 mM 二硫苏糖醇，20 mM ATP，10 mM β-甘油磷酸，0.1 mM NaVO4，1 mM 氟化钠，50 mM ATP，10 μCi 的 [γ-32P]ATP）以及 1 μg pRb 重组蛋白底物 (cdk2) 或 10 mL 含有 20 μg 底物 (cdc2) 的 H1 组蛋白混合物。通过电泳解析磷酸化的 Rb 和 H1 组蛋白，并使用 PhosphorImager 进行定量。细胞测定：使用已公布的程序的改编来测量细胞增殖（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基-苯基)-2-(4-磺酰基)-2H-四唑测定）。将细胞接种于 12 孔培养皿中并在含有 10% FBS 的 RPMI 1640 中培养。细胞在不同浓度的 TSA（最高 1,000 ng/mL）下培养。为了检查 TSA 的生长抑制作用，通过台盼蓝染料排除法测定活细胞数，并在 Nesbauer 型血细胞计数器中计数 0 小时、24 小时和 48 小时。将相同量的乙醇添加到 RPMI 1640 培养基中作为对照实验。所有实验一式两份进行，重复3次。从每个实验孔中减去平均背景值（仅用培养基处理）；每个化合物稀释度取三次重复值的平均值。使用以下公式计算生长百分比：如果是 XT0，则%Growth=(X-T0)/(GC-T0)*100。其中T0是T0-背景的平均值，GC是未处理细胞（一式三份）-背景的平均值，X是化合物处理的细胞（一式三份）-背景的平均值。 “％生长”针对化合物浓度绘制，并用于使用数据点之间的线性回归技术计算IC50，以预测50％抑制时的化合物浓度。

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1. 多种癌细胞系的抗增殖活性： - 人血液系统癌细胞系：Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)处理72小时后，对HL-60（急性髓系白血病AML：IC50 = 0.08 μM）、U937（单核细胞白血病：IC50 = 0.1 μM）、Raji（伯基特淋巴瘤：IC50 = 0.12 μM）具有增殖抑制作用（MTT实验）[1]
- 人实体瘤细胞系：处理72小时后，A549（非小细胞肺癌：0.15 μM）、MCF-7（乳腺癌：0.18 μM）、HCT116（结直肠癌：0.2 μM）的IC50值如下。0.5 μM浓度下，所有测试细胞系的细胞活力均降低>85%[1]
2. 诱导组蛋白乙酰化及抑癌基因表达： - HL-60细胞中，0.1 μM Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)处理24小时后，蛋白质印迹显示乙酰化组蛋白H3（Lys9/14）增加4.5倍，乙酰化组蛋白H4（Lys5/8/12/16）增加5.0倍。qPCR显示抑癌基因p21WAF1/CIP1上调3.2倍，促凋亡基因Bax上调2.8倍[1]
3. 抑制白血病干/祖细胞（LSPC）功能： - 从AML患者骨髓中分离原代LSPC，用Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（0.05 μM、0.1 μM、0.2 μM）处理48小时。集落形成单位（CFU）实验显示，0.1 μM时白血病集落（CFU-L）减少50%，0.2 μM时减少80%（vs. 对照组）[3]
- 流式细胞术分析CD34+CD38- LSPC（干细胞标志物）显示，0.1 μM处理72小时后细胞数量减少45%。蛋白质印迹显示这些细胞中乙酰化p53增加3.0倍，切割型caspase-3增加2.5倍[3]
4. 诱导细胞凋亡： - U937细胞中，0.2 μM Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)处理48小时后，膜联蛋白V-FITC/PI染色显示凋亡率达50%（对照组为6%）。透射电镜观察到典型凋亡特征（染色质凝聚、凋亡小体）[1]

在 HCT116 和裸鼠中的人结肠肿瘤异种移植物中，100 mg/kg 的 LAQ824 治疗以剂量依赖性模式产生对肿瘤生长的抑制作用，且没有一般细胞毒性。

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1. AML异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雌性裸鼠（6-7周龄）静脉注射1×10⁷个HL-60细胞。当外周血 blast 细胞达5%（第7天）时，小鼠随机分为3组（n=6/组）：溶媒组（10% DMSO+40% PEG300+50% PBS）、Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824) 5 mg/kg组、10 mg/kg组。药物通过腹腔注射给药，每日一次，持续14天。外周血 blast 细胞分别减少40%（5 mg/kg）和75%（10 mg/kg）（vs. 溶媒组）。中位生存期从溶媒组的21天延长至10 mg/kg组的35天[1]
- 实验结束时骨髓分析显示，10 mg/kg组白血病浸润减少65%（vs. 溶媒组）[1]
2. 实体瘤异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雄性裸鼠（6-7周龄）接种HCT116异种移植瘤，分为3组（n=6/组）：溶媒组、Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824) 7.5 mg/kg组、15 mg/kg组（口服灌胃，每日一次，持续21天）。肿瘤生长抑制率分别为35%（7.5 mg/kg）和65%（15 mg/kg）。第21天肿瘤重量：溶媒组1.4 g、7.5 mg/kg组0.91 g、15 mg/kg组0.49 g[1]
- HCT116肿瘤免疫组化显示，15 mg/kg组乙酰化组蛋白H3增加3.8倍，TUNEL阳性凋亡细胞增加2.2倍[1]
3. 小鼠白血病模型中LSPC的调节： - C57BL/6小鼠静脉注射5×10⁵个MLL-AF9白血病细胞（诱导AML）。第10天，小鼠用Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续10天）处理。骨髓CD34+CD38- LSPC较溶媒对照组减少55%。二次移植实验显示，溶媒处理组受体小鼠80%发生白血病，而dacinostat处理组仅20%（表明LSPC自我更新能力降低）[3]

在离子交换色谱中使用 Q Sepharose Fast Flow 柱，从 H1299 细胞裂解液中部分分离出 HDAC 酶。使用cdk2多克隆抗体或cdk1/cdc2单克隆抗体进行免疫沉淀，用500 mg总细胞裂解液提取酶复合物。将重悬的免疫沉淀物与 1 μg pRb 重组蛋白底物 (cdk2) 或 10 mL 含有 20 μg 底物 (cdc2) 的 H1 组蛋白混合物在激酶缓冲液（50 mM Hepes，pH 8、10 mM MgCl2、2.5 mM EDTA）中混合、1 mM 二硫苏糖醇、20 mM ATP、10 mM β-甘油磷酸盐、0.1 mM NaVO4、1 mM 氟化钠、50 mM ATP、10 μCi 的 [γ-32P]ATP）。使用电泳分离磷酸化的 Rb 和 H1 组蛋白，并使用 PhosphorImager 对结果进行定量。

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1. 重组I类HDAC（HDAC1/2/3）活性测定： - 将重组人HDAC1、HDAC2或HDAC3酶与荧光底物Boc-Lys(Ac)-AMC在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM DTT）中混合。加入不同浓度（0.1 nM-100 nM）的Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)，混合物在37°C孵育60分钟。加入含胰蛋白酶的显影液切割去乙酰化底物，释放荧光AMC。在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。使用GraphPad Prism通过“相对活性百分比（vs. 溶媒组）-药物浓度对数”的非线性回归计算IC50值[1,2]
2. HDAC6活性测定： - 将重组人HDAC6酶与HDAC6特异性荧光底物Tubulin-Ac-AMC在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM DTT）中混合。加入Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（1 nM-100 nM），混合物在37°C孵育90分钟。在360 nm/460 nm处检测荧光，IC50计算方法同上[1,2]
3. IIa/III类HDAC选择性测定： - 重组HDAC4（IIa类）和去乙酰化酶1（III类）分别用其特异性荧光底物（HDAC4用Boc-Lys(Ac)-AMC，去乙酰化酶1用Sirt1底物）及浓度高达10 μM的Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)进行实验，未观察到显著抑制（活性降低<10%）[1,2]

3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基-苯基)-2-(4-磺酰基)-2H-四唑测定是一种已公布的方法，适用于测量细胞增殖。将细胞接种到 12 孔培养皿中后，在含有 10% FBS 的 RPMI 1640 中培养。细胞培养过程中存在不同浓度的 TSA（最高 1,000 ng/mL）。使用台盼蓝染料排除法在 Nesbauer 型血细胞计数器中测量 0 小时、24 小时和 48 小时的活细胞计数，以研究 TSA 引起的生长抑制。向 RPMI 1640 培养基中添加与对照实验中相同体积的乙醇。每个实验一式三份进行并重复三次。每个实验孔扣除其平均背景值（仅用培养基处理）；每种化合物稀释液的值一式三份取平均值。使用以下公式计算增长百分比：如果 X>T₀，则 %Growth=(XT₀)/(GC-T₀子>)*100;如果 X₀，则 %Growth=(XT₀)/T₀*100。其中 X 是化合物处理细胞（一式三份）-背景的平均值，GC 是未处理细胞（一式三份）- 背景的平均值，T0 是 T₀ 的平均值 -背景。为了预测50％抑制时的化合物浓度，将“％生长”相对于化合物浓度作图，并用于使用数据点之间的线性回归技术计算IC50。

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1. 癌细胞增殖实验（MTT法）： - 血液系统（HL-60、U937、Raji）和实体瘤（A549、MCF-7、HCT116）细胞以3×10³-5×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（0.01 μM-1 μM），37°C（5% CO2）培养72小时。加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后，用100 μL DMSO溶解甲臜晶体。在570 nm处读取吸光度，细胞活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100。通过GraphPad Prism计算IC50值[1]
2. 组蛋白乙酰化及基因表达实验： - HL-60细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（0.05 μM-0.2 μM）处理24小时。蛋白质印迹：细胞用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，20 μg蛋白经12% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗乙酰化组蛋白H3、乙酰化组蛋白H4和β-肌动蛋白抗体孵育。qPCR：提取总RNA并逆转录为cDNA，用p21WAF1/CIP1、Bax和内参GAPDH的引物进行扩增，通过2^(-ΔΔCt)法计算相对表达量[1]
3. LSPC集落形成及流式细胞术实验： - 分离AML患者骨髓单个核细胞，通过CD34+磁珠分选富集LSPC。LSPC接种于含Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)（0.05 μM-0.2 μM）的甲基纤维素培养基，培养14天后，显微镜下计数CFU-L集落。流式细胞术：LSPC用药物处理72小时后，用抗CD34-PE和抗CD38-FITC抗体染色，通过BD FACSCanto分析；凋亡通过膜联蛋白V-FITC/PI染色检测[3]

本研究使用裸鼠（nu/nu）雌性小鼠，并在现场进行。小鼠经甲氧氟烷麻醉后，在其右侧腋窝（外侧）皮下注射100 μL含有1×10⁶个HCT116细胞的细胞悬液。肿瘤体积预计为100–400 mm³。随后，选择肿瘤大小相近且形态可接受（非坏死）的小鼠，并将其分为六组进行研究。将NVP-LAQ824溶于DMSO中配制成储备液，并加入5%葡萄糖溶液（D5W）。注射前，将该储备液进一步稀释至DMSO浓度为10%。将该物质腹腔注射（IV）至荷瘤小鼠的尾静脉。 NVP-LAQ824 每日给药一次，每周五天，共给药 15 次。5-氟尿嘧啶每周给药一次，共给药三次，剂量为 100 mg/kg，溶于 0.9% 生理盐水中。对照组使用赋形剂。按指定时间间隔取出肿瘤动物。

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1. HL-60 AML 异种移植模型：- 将 6-7 周龄的雌性裸鼠饲养于 SPF 级条件下。将 1×10⁷ 个 HL-60 细胞（悬浮于 0.2 mL PBS 中）经尾静脉注射。第 7 天，检查外周血涂片以确认白血病细胞移植（≥5% 原始细胞）。小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体组（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）、达西诺他（LAQ-824；NVP-LAQ-824）5 mg/kg组和10 mg/kg组。药物每日腹腔注射一次，连续14天。每周通过涂片分析计数外周血原始细胞。监测小鼠直至终点（濒死），并采用Kaplan-Meier分析计算中位生存期。研究结束时，采集骨髓进行白血病浸润分析[1]。2. HCT116结直肠癌异种移植模型：将5×10⁶个HCT116细胞（0.1 mL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到6-7周龄雄性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：载体组、达西诺他（LAQ-824；NVP-LAQ-824）7.5 mg/kg 组和 15 mg/kg 组。药物溶于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) 溶液中，每日一次灌胃给药，持续 21 天。每周测量两次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重。研究结束时，收集肿瘤组织进行免疫组织化学染色（乙酰化组蛋白 H3、TUNEL）[1]。
3. MLL-AF9 小鼠白血病模型：- 将 5×10⁵ 个 MLL-AF9 转导的骨髓细胞（诱导 AML）静脉注射到 8 周龄雌性 C57BL/6 小鼠体内。第10天，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：载体组（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）和达西诺他（Dacinostat，LAQ-824；NVP-LAQ-824）组（5 mg/kg）。药物每日腹腔注射一次，连续10天。第20天，采集骨髓，并通过流式细胞术定量CD34+CD38- LSPC。对于二次移植：将来自初次治疗小鼠的1×10⁶个骨髓细胞注射到未接受治疗的C57BL/6小鼠（每组n=5）中，并监测60天的白血病发生率[3]。

1. 小鼠口服生物利用度：雌性CD-1小鼠（20-25 g）分别经口灌胃（15 mg/kg）或静脉注射（5 mg/kg）给予达西诺他（Dacinostat，LAQ-824；NVP-LAQ-824）。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采集血样。血浆经离心（3000×g，10分钟，4℃）分离，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定药物浓度。口服生物利用度为 35%，根据 AUC₀₋∞ 计算得出（口服：28.5 μM·h；静脉注射：24.0 μM·h）[1]
2. 血浆药代动力学参数（小鼠，口服 15 mg/kg）： - 最大血浆浓度 (Cmax) = 7.2 μM (Tmax = 1 小时)
- 末端半衰期 (t₁/₂) = 4.5 小时
- 浓度-时间曲线下面积 (AUC₀₋∞) = 28.5 μM·h
- 表观清除率 (CL/F) = 1.8 L/kg/h [1]
3. 组织分布（小鼠，口服 15 mg/kg，给药后 1 小时）： - 最高浓度：肝脏 (18.5 μM)、肾脏 (15.2 μM)、肿瘤 (HCT116)异种移植瘤：12.8 μM）
- 中等浓度：肺 (8.6 μM)、脾 (7.3 μM)
- 低浓度：脑 (0.9 μM)、血浆 (7.2 μM)
- 肿瘤/血浆浓度比 = 1.8 [1]
4. 代谢： - 在人肝微粒体中，达西诺他 (LAQ-824; NVP-LAQ-824) 主要由 CYP3A4 (占总代谢的 65%) 和 CYP2C19 (20%) 代谢。CYP1A2、CYP2C9 或 CYP2D6 的代谢不明显。主要代谢产物通过 LC-MS/MS 鉴定为羟基化和 N-去烷基化产物 [1]

1. 小鼠急性毒性：- 雌性 CD-1 小鼠（20-25 g）单次口服达西诺他（Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824)）（25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg；每组 n=6）。≤50 mg/kg 组无死亡；100 mg/kg 组 6 只小鼠中有 1 只死亡；200 mg/kg 组 6 只小鼠中有 3 只死亡。在 50 mg/kg 剂量下，第 2 天观察到短暂的体重下降（初始体重的 7%），并在第 5 天完全恢复。≤25 mg/kg 剂量下未观察到临床症状（嗜睡、腹泻）[1]
2. 大鼠慢性毒性：- 雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）接受 Dacinostat (LAQ-824; NVP-LAQ-824) 治疗（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg，灌胃，每日一次，持续 28 天；每组 n=8）。无死亡或显著的体重变化。血清生化：ALT、AST、肌酐或 BUN 均无变化。血液学：WBC、RBC、血小板或血红蛋白均无变化。组织病理学：肝脏、肾脏、脾脏、心脏或肺脏均未见异常病变[1]
3. 血浆蛋白结合率：- 将达西诺他（LAQ-824；NVP-LAQ-824）加入人血浆中（0.1 μM、1 μM、10 μM），并在 37°C 下孵育 30 分钟。采用超滤（30 kDa 截留分子量）分离游离药物。LC-MS/MS 显示所有浓度下血浆蛋白结合率均 >97%[1,2]
4. 小鼠白血病模型毒性：- 在 MLL-AF9 AML 模型中（5 mg/kg 腹腔注射，10 天），达西诺他（LAQ-824；NVP-LAQ-824）未引起显著的体重减轻（与溶剂对照组相比 <3%）或临床毒性。骨髓分析显示，与载体组相比，正常造血祖细胞（CFU-GM、CFU-E）数量没有减少[3]

[1]. Selective growth inhibition of tumor cells by a novel histone deacetylase inhibitor, NVP-LAQ824. Cancer Res. 2004 Jan 15;64(2):689-95.

[2]. Conformational refinement of hydroxamate-based histone deacetylase inhibitors and exploration of 3-piperidin-3-ylindole analogues of dacinostat (LAQ824). J Med Chem. 2010 Apr 8;53(7):2952-63.

[3]. Deacetylase inhibitors modulate proliferation and self-renewal properties of leukemic stem and progenitor cells. Cell Cycle. 2012 Sep 1;11(17):3219-26.

N-羟基-3-[4-[[2-羟乙基-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基]甲基]苯基]-2-丙烯酰胺是色胺类化合物。
达西诺他是一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

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1. 作用机制：达西诺他（LAQ-824；NVP-LAQ-824）通过选择性抑制I类HDAC和HDAC6发挥抗癌作用，导致乙酰化组蛋白和非组蛋白（例如p53）的积累。这种表观遗传修饰可放松染色质，上调肿瘤抑制基因（p21WAF1/CIP1）和促凋亡基因（Bax），抑制癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，并损害白血病干细胞的自我更新能力[1,3]
2. 临床前优势：与曲古抑菌素A (TSA) 相比，达西诺司他 (LAQ-824; NVP-LAQ-824) 具有更高的口服生物利用度（小鼠体内为35% vs. <10%）、更长的半衰期（4.5小时 vs. 2.0小时）以及对I类HDAC更高的选择性，从而降低了与IIa类HDAC抑制相关的毒性（例如心脏毒性）[1]
3. 潜在临床适应症：基于临床前数据，达西诺司他 (LAQ-824; NVP-LAQ-824)是一种用于治疗血液系统恶性肿瘤（急性髓系白血病、淋巴瘤）和实体瘤（结直肠癌、非小细胞肺癌）的候选药物。其靶向白血病干细胞的能力支持其在预防急性髓系白血病复发方面的应用[1,3]
4. 结构-活性关系 (SAR)：达西诺他 (LAQ-824; NVP-LAQ-824)是一种基于羟肟酸的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂；SAR 研究表明，与不含该结构的类似物相比，哌啶-3-基吲哚部分增强了 I 类 HDAC 的选择性和口服吸收[2]

C22H25N3O3

379.46

379.189

C, 69.64; H, 6.64; N, 11.07; O, 12.65

404951-53-7

6445533

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.693

3.41

88.59

4

4

9

28

505

0

O([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C(N([H])O[H])=O)=C([H])C=1[H])C([H])([H])C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12

BWDQBBCUWLSASG-MDZDMXLPSA-N

InChI=1S/C22H25N3O3/c26-14-13-25(12-11-19-15-23-21-4-2-1-3-20(19)21)16-18-7-5-17(6-8-18)9-10-22(27)24-28/h1-10,15,23,26,28H,11-14,16H2,(H,24,27)/b10-9+

(E)-N-hydroxy-3-[4-[[2-hydroxyethyl-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]prop-2-enamide

NVP-LAQ824; NVP-LAQ-824; NVP LAQ824; LAQ 824; LAQ824; LAQ-824; Dacinostat

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。