LETERMOVIR   中文名称: 氯戊米特

Letermovir (formerly known as MK-8828 and AIC-246; trade name: Prevymis) is a new potent anticytomegalovirus drug in clinical development. On 11/8/2017, Letermovir was approved by FDA to prevent infection after bone marrow transplant. Despite modern prevention and treatment strategies, human cytomegalovirus (HCMV) remains a common opportunistic pathogen associated with serious morbidity and mortality in immunocompromised individuals, such as transplant recipients and AIDS patients. All drugs currently licensed for the treatment of HCMV infection target the viral DNA polymerase and are associated with severe toxicity issues and the emergence of drug resistance.

体外活性：莱特莫韦（原名MK-8828和AIC-246；商品名：Prevymis）是一种处于临床开发阶段的新型强效抗巨细胞病毒药物。 2017年11月8日，莱特莫韦被FDA批准用于预防骨髓移植后感染。尽管有现代的预防和治疗策略，人类巨细胞病毒（HCMV）仍然是一种常见的机会性病原体，与免疫功能低下个体（例如移植受者和艾滋病患者）的严重发病率和死亡率相关。目前获得许可用于治疗 HCMV 感染的所有药物均以病毒 DNA 聚合酶为靶标，并与严重的毒性问题和耐药性的出现有关。激酶检测：AIC246具有一致的抗病毒功效，并且AIC246对人巨细胞病毒具有显着的选择性。 AD169 突变株和指定的 rAIC246-1 和 rAIC246-2 对莱特莫韦 (AIC246) 高度耐药，EC50 分别为 5.6 nM、1.24 μM、0.37 μM。 Letermovir 通过涉及病毒基因产物 UL56 的特定抗病毒机制抑制 HCMV 复制。 Letermovir 通过干扰 HCMV 后代 DNA 的正确切割/包装来抑制细胞培养中的 HCMV 复制[2]。就 EC50 而言，莱特莫韦抑制当前金标准 GCV 超过 400 倍（平均值为 4.5 nM 与 2 μM），就 EC90 值而言抑制超过 2,000 倍（平均值为 6.1 nM 与 14.5 μM）[3] 。莱特莫韦与抗 HCMV 药物联合使用会产生附加的抗病毒作用，但莱特莫韦和抗 HIV 药物之间不存在相互作用。细胞测定：简而言之，将 5×103 AD169 感染的 NHDF 细胞/孔接种到 30 个 96 孔微量滴定板的孔中。允许感染在50 nM AIC246 (10×EC50)的暴露下进行，直到在一个或多个化合物处理的孔中出现CPE（表明抗性病毒突破）。未感染和未处理的细胞作为每个板上的对照。在存在 50 nM AIC246 的情况下，通过无细胞上清病毒的传代，培养物达到最大 CPE，从而完成突变病毒扩增。所得AIC246抗性子代病毒突变体通过在AIC246存在下有限稀释进行噬菌斑纯化3次。通过在没有选择压力的情况下连续传代空斑纯化的病毒（8至10次）来测试耐药性的稳定性。

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在斑块减少实验中，莱特莫韦对17种不同的临床HCMV分离株（WT1-WT17）表现出强大的抗病毒活性。其半数有效浓度（EC50）持续处于低纳摩尔范围（0.0008 µM 至 0.0031 µM），比更昔洛韦（GCV）强约1000倍。
莱特莫韦对HCMV实验室株（AD169，EC50 = 0.0051 µM）和一系列由AD169衍生的耐药变异株保持高活性。这些变异株在UL97（病毒激酶）和/或UL54（病毒DNA聚合酶）基因中带有已确认的对GCV和/或西多福韦（CDV）的耐药突变。莱特莫韦对这些耐药病毒的EC50值（0.0016 µM 至 0.0039 µM）与亲本AD169株相当或更低，表明不存在交叉耐药。
莱特莫韦对HCMV表现出显著的选择性。在基于细胞培养的复制实验中，它对其他人类疱疹病毒无显著活性（EC50 >10 µM），包括水痘-带状疱疹病毒（VZV）、1型和2型单纯疱疹病毒（HSV-1, HSV-2）、人类疱疹病毒6型（HHV-6）和爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）。对鼠巨细胞病毒（MCMV）的活性非常低（EC50 = 4.5 µM），对大鼠巨细胞病毒（RCMV）未检测到活性（EC50 >10 µM）。
莱特莫韦对来自其他病毒科的一系列重要人类致病病毒无抑制活性（EC50 >10 µM 至 >32 µM），包括人腺病毒2型（HAdV-2）、乙型肝炎病毒（HBV）、人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）、甲型流感病毒（H1N1）和丙型肝炎病毒（HCV）复制子系统。
平行进行的细胞毒性研究（使用alamarBlue和/或显微镜评估）表明，在抗病毒实验使用的最高药物浓度下（高达32 µM）未见毒性。[1]

使用小鼠异种移植模型，与安慰剂治疗的对照组相比，莱特莫韦（10-100 mg/kg/天，口服）导致移植细胞中 HCMV 滴度呈剂量依赖性降低

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来特莫韦 (AIC246) 在HCMV感染的小鼠异种移植模型中发挥强效的体内疗效。[2]
I期临床试验表明，来特莫韦总体耐受性良好，在人体内表现出高且持久的暴露量，支持每日一次给药。[2]
在IIa期试验及一名感染多重耐药HCMV株导致多器官疾病的患者中显示了概念验证。[2]

AIC246具有一致的抗病毒功效，并且AIC246对人巨细胞病毒具有显着的选择性。 AD169 突变株和指定的 rAIC246-1 和 rAIC246-2 对莱特莫韦 (AIC246) 高度耐药，EC50 分别为 5.6 nM、1.24 μM、0.37 μM。 Letermovir 通过涉及病毒基因产物 UL56 的特定抗病毒机制抑制 HCMV 复制。 Letermovir 通过干扰 HCMV 后代 DNA 的正确切割/包装来抑制细胞培养中的 HCMV 复制[2]。就 EC50 而言，莱特莫韦抑制当前金标准 GCV 超过 400 倍（平均值为 4.5 nM 与 2 μM），就 EC90 值而言抑制超过 2,000 倍（平均值为 6.1 nM 与 14.5 μM）[3] 。莱特莫韦与抗 HCMV 药物联合使用会产生附加的抗病毒作用，但莱特莫韦和抗 HIV 药物之间不存在相互作用。

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本文引用了莱特莫韦的作用模式，指出其通过靶向病毒terminase复合物干扰DNA多联体成熟。[1]
采用功能性病毒DNA切割实验评估来特莫韦对终止酶活性的影响。用HCMV感染细胞并用药物处理。孵育后，提取总DNA并用限制性内切酶（KpnI）消化。消化后的DNA通过凝胶电泳按大小分离，转移到膜上，并与针对HCMV基因组末端区域的地高辛标记探针进行杂交。约4 kb片段的存在表明终止酶正确切割并成熟为单位长度基因组，而其缺失则表明切割/包装过程被抑制。来特莫韦以浓度依赖的方式抑制~4 kb片段的形成，证实其干扰了终止酶介导的DNA加工过程。[2]

简而言之，将5×103 AD169感染的NHDF细胞/孔接种到30个96孔微量滴定板的孔中。允许感染在50 nM AIC246 (10×EC50)的暴露下进行，直到在一个或多个化合物处理的孔中出现CPE（表明抗性病毒突破）。未感染和未处理的细胞作为每个板上的对照。在存在 50 nM AIC246 的情况下，通过无细胞上清病毒的传代，培养物达到最大 CPE，从而完成突变病毒扩增。所得AIC246抗性子代病毒突变体通过在AIC246存在下有限稀释进行噬菌斑纯化3次。通过在没有选择压力的情况下连续传代空斑纯化的病毒（8至10次）来测试耐药性的稳定性。

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莱特莫韦的主要抗病毒活性使用标准的HCMV斑块减少实验进行评估。简而言之，在化合物系列稀释液存在下，用病毒分离株感染易感细胞单层。孵育一段时间后，对斑块进行显影（例如通过染色）并计数，以确定使斑块形成减少50%的药物浓度（EC50）。
对于一些HCMV变异株和其他病毒，采用了基于细胞病变效应（CPE）的实验或其他特定的基于细胞培养的复制实验。这些方法测量了化合物抑制病毒诱导的细胞死亡或其他病毒特异性复制标志物（例如，来自重组病毒的GFP表达、病毒抗原产生）的能力。
使用细胞活力测定（例如alamarBlue）和显微镜评估平行进行细胞毒性评估，以确保观察到的抗病毒效应并非由一般细胞毒性引起。[1]

10 mL/kg；口服
小鼠

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采用小鼠异种移植模型评估体内抗病毒活性。使用免疫缺陷小鼠。将接种了HCMV（Davis株）的人成纤维细胞的明胶海绵皮下植入小鼠肩胛背区。
来特莫韦 (AIC246)和对照药物缬更昔洛韦 (VGCV) 均配制于含2%二甲基亚砜的0.5%甲基纤维素-99.5%磷酸盐缓冲液中。
移植后4小时开始，小鼠每天经口灌胃给药一次，连续9天。给药量为10 ml/kg。测试的来特莫韦剂量分别为 1、3、10、30 和 100 mg/kg/天。
治疗 9 天后，处死小鼠，取出植入物，并用胶原酶消化以回收人细胞。通过噬斑试验测定细胞悬液中的病毒滴度。[3]

吸收、分布和排泄
在健康受试者中，不与环孢素联用时，来特莫韦的生物利用度为94%；在造血干细胞移植（HSCT）受者中，不与环孢素联用时，生物利用度为35%；在HSCT受者中，与环孢素联用时，生物利用度为85%。来特莫韦的达峰时间（Tmax）为45分钟至2.25小时。达到稳态血药浓度所需时间为9-10天。与食物同服可使Cmax平均增加129.82%（范围为104.35%-161.50%）。未观察到对AUC的显著影响。
来特莫韦通过OATP1B1/3转运蛋白在肝脏中吸收。93%的药物经粪便排泄，其中70%为原药。 <2% 经尿液排出。
平均稳态分布容积为 45.5 升。
健康受试者的平均清除率为 11.25 升/小时。

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代谢/代谢物
来特莫韦主要通过 UGT1A1/1A3 进行少量代谢。

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生物半衰期
每日一次静脉注射 480 毫克来特莫韦后，观察到平均末端半衰期为 12 小时。

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该论文提到，来特莫韦在 I 期临床试验中显示出良好的药代动力学特征，但这项体外研究并未提供具体的 ADME/PK 参数（例如，半衰期、Cmax、AUC、生物利用度）。[1]

肝毒性
在大型预注册临床试验中，造血干细胞移植后，来特莫韦组和安慰剂组分别有18.5%和21.9%的患者出现ALT升高，其中3.5%的患者ALT水平超过正常值上限5倍，而安慰剂组仅为1.6%。ALT升高通常是短暂的、轻微的且无症状的。有报道称，再次使用来特莫韦后，血清ALT水平会再次升高。在上市前研究中，0.5%的受试者出现黄疸和肝损伤，但在造血干细胞移植的情况下，所有病例均存在其他更可能导致肝损伤的原因，且均无法令人信服地归因于来特莫韦治疗。自来特莫韦获批上市以来，尚未有报道出现与使用来特莫韦相关的、具有临床表现的黄疸性肝损伤病例；然而，来特莫韦治疗的临床经验总体有限。
可能性评分：E（不太可能引起临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用来特莫韦的信息。由于来特莫韦与血浆蛋白的结合率高达99%，因此其在乳汁中的含量可能非常低。然而，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时，可能更倾向于选择其他药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
体外观察发现，来特莫韦在浓度为 0.2-50 mg/L 时与血浆蛋白的结合率高达 99%。

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该论文指出，来特莫韦在 I 期临床试验中显示出良好的安全性。在所描述的体外实验中，细胞毒性评估表明，在测试浓度下未观察到毒性。[1]

[1]. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Feb;56(2):1135-7.

[2]. J Virol. 2011 Oct;85(20):10884-93.

[3]. Antimicrob Agents Chemother. 2010 Mar;54(3):1290-7.

[4]. Antimicrob Agents Chemother. 2015;59(6):3140-8.

2017年11月8日，来特莫韦（Letermovir）获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，用于预防异基因造血干细胞移植患者的巨细胞病毒（CMV）感染。它是首个被归类为DNA末端酶复合物抑制剂的新型CMV抗感染药物。来特莫韦已获得FDA的优先权和孤儿药资格认定。目前，该药以商品名Prevymis上市销售。
来特莫韦是一种巨细胞病毒DNA末端酶复合物抑制剂。来特莫韦的作用机制是作为DNA末端转移酶复合物抑制剂、细胞色素P450 3A抑制剂、有机阴离子转运多肽1B1抑制剂、有机阴离子转运多肽1B3抑制剂、细胞色素P450 2C8抑制剂、细胞色素P450 2C9诱导剂和细胞色素P450 2C19诱导剂。
来特莫韦是一种抗病毒药物，靶向巨细胞病毒（CMV）的DNA末端转移酶复合物，用于预防免疫功能低下患者的CMV再激活。来特莫韦治疗期间可能出现轻度至中度血清转氨酶升高，但尚未发现与临床上明显的急性肝损伤病例相关。
来特莫韦是一种口服生物利用度高的非核苷类药物，属于3,4-二氢喹唑啉乙酸类，是巨细胞病毒 (CMV) 病毒末端酶复合物 pUL56 亚基的抑制剂，具有潜在的 CMV 特异性抗病毒活性。口服后，来特莫韦与 CMV 病毒末端酶复合物的 pUL56 亚基结合，阻止串联 DNA 裂解为单体基因组长度的 DNA。由于该药物干扰病毒DNA的加工和后续病毒DNA包装成前衣壳的过程，因此可阻断巨细胞病毒（CMV）复制，从而预防CMV感染。

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药物适应症
来特莫韦适用于预防CMV血清阳性的成年异基因造血干细胞移植（HSCT）受者的巨细胞病毒（CMV）感染和疾病。它也适用于预防有风险的成年肾移植受者（即供体CMV血清阳性/受体CMV血清阴性）的CMV疾病。
FDA标签
普瑞维米斯适用于预防CMV血清阳性[R+]成年异基因造血干细胞移植（HSCT）受者的巨细胞病毒（CMV）再激活和疾病。应参考官方指南正确使用抗病毒药物。
预防巨细胞病毒感染

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作用机制
巨细胞病毒 (CMV) 依赖于由多个亚基（pUL51、pUL56 和 pUL89）组成的 DNA 末端酶复合物来加工病毒 DNA。病毒 DNA 以单链重复序列的形式产生，然后由 DNA 末端酶复合物切割成单个病毒基因组，这些基因组随后可以包装成成熟的病毒颗粒。来替莫韦抑制该复合物的活性，从而阻止成熟病毒基因组的产生和活性病毒颗粒的形成。目前尚不清楚来替莫韦与该复合物结合的确切机制。最初，在 pUL56 中观察到的耐药突变提示该亚基是来替莫韦的结合位点。然而，现在已在 pUL51、pUL56 和 pUL89 中观察到耐药突变。一个亚基氨基酸序列的改变可能导致相互作用亚基的构象变化，从而影响来特莫韦的结合；或者来特莫韦可能与复合物的多个亚基相互作用，但目前尚未发现支持这两种可能性的证据。已知pUL89含有该复合物的核酸内切酶活性，但由于复合物的所有成员对于靶向以及防止蛋白酶体降解都是必需的，因此很难确定来特莫韦是否直接抑制pUL89的活性。

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药效学
来特莫韦抑制巨细胞病毒（CMV）DNA末端酶复合物的活性，从而阻止病毒DNA被切割成成熟长度的基因组，进而无法包装成病毒颗粒。来特莫韦对DNA末端酶复合物的EC50值为2.1nM。

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人巨细胞病毒（HCMV）是一种具有临床意义的疱疹病毒，可导致免疫功能低下者出现并发症。
目前的治疗方法（更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸钠、西多福韦）靶向病毒DNA聚合酶，但存在毒性、口服生物利用度低和耐药性等局限性。
来特莫韦 (AIC246) 是一种新型的3,4-二氢喹唑啉化合物，目前正处于临床开发阶段，其作用机制独特，靶向病毒末端酶复合物，该酶在人类中没有对应物。
这种独特的机制使其能够对抗对现有标准治疗药物耐药的HCMV毒株，正如本研究和已报道的多重耐药HCMV疾病临床病例所证实的那样。
来特莫韦对HCMV相对于其他疱疹病毒和无关的人类致病病毒的高选择性表明其具有良好的安全性和耐受性，有望解决现有疗法的局限性。[1]

C29H28F4N4O4

572.56

572.204

C, 60.84; H, 4.93; F, 13.27; N, 9.79; O, 11.18

917389-32-3

45138674

Solid powder

1.4±0.1 g/cm3

706.5±70.0 °C at 760 mmHg

381.1±35.7 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.601

3.47

77.84

1

10

7

41

931

1

C([C@H]1C2C=CC=C(C=2N=C(N2CCN(C3C=CC=C(OC)C=3)CC2)N1C1C=C(C(F)(F)F)C=CC=1OC)F)C(=O)O

FWYSMLBETOMXAG-QHCPKHFHSA-N

InChI=1S/C29H28F4N4O4/c1-40-20-6-3-5-19(16-20)35-11-13-36(14-12-35)28-34-27-21(7-4-8-22(27)30)23(17-26(38)39)37(28)24-15-18(29(31,32)33)9-10-25(24)41-2/h3-10,15-16,23H,11-14,17H2,1-2H3,(H,38,39)/t23-/m0/s1

(S)-2-(8-fluoro-3-(2-methoxy-5-(trifluoromethyl)phenyl)-2-(4-(3-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)-3,4-dihydroquinazolin-4-yl)acetic acid

MK-8828; MK 8828; MK8828; AIC-246; AIC 246; AIC246; Letermovir; Prevymis

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL ( ~174.65 mM )
Ethanol : ~100 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。