Lobetyolin   中文名称: 党参炔苷

bioactive compound
In HCT-116 colon cancer cells, Lobetyolin targets Alanine-serine-cysteine transporter 2 (ASCT2) and its effect is governed by p53. [2]

洛贝替林、洛贝替醇和亚油酸甲酯抑制了PMA诱导的MUC5AC黏蛋白基因表达；洛贝替林不影响PMA诱导的MUC5AC黏蛋白生成。然而，洛贝替醇和亚油酸甲酯抑制了MUC5AC黏蛋白的生成；洛贝替林和洛贝替醇对PMA诱导的NCI-H292细胞MUC5AC黏蛋白分泌没有显著影响。然而，亚油酸甲酯降低了MUC5AC黏蛋白的分泌。[1]在NCI-H292人肺黏液表皮样细胞中，洛贝替林（1、10和100 μM）抑制了佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA，10 ng/mL）诱导的MUC5AC基因表达。 [1]在NCI-H292细胞中，洛贝替林（1、10和100 μM）对PMA诱导的MUC5AC黏蛋白的产生或分泌没有显著影响。[1]在HCT-116结直肠癌细胞中，洛贝替林（10、20和40 μmol/L，处理24小时）以浓度依赖的方式显著抑制细胞活力。[2]在NCM460正常结肠黏膜上皮细胞中，洛贝替林（10、20和40 μmol/L）对细胞活力没有显著影响。[2]在HCT-116细胞中，洛贝替林（20和40 μmol/L）显著增加TUNEL阳性细胞的数量，表明细胞凋亡增加。 Lobetyolin（10、20、40 μmol/L）显著增加了Annexin V-FITC/PI染色检测的早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞的数量。[2]
在HCT-116细胞中，Western blot分析显示，Lobetyolin（10、20、40 μmol/L）显著提高了cleaved-caspase-3、caspase-3、cleaved-caspase-7、caspase-7、cleaved-PARP和PARP的蛋白水平，同时下调了survivin的表达。[2]
在HCT-116细胞中，Lobetyolin（10、20、40 μmol/L）明显降低了谷氨酰胺和α-酮戊二酸的浓度。洛贝替林（20、40 μmol/L）还能降低谷氨酸、ATP 和 GSH 的水平。[2] 在 HCT-116 细胞中，洛贝替林（10、20、40 μmol/L）显著降低了 ASCT2 mRNA 和蛋白的表达，并通过免疫荧光法抑制了 ASCT2 的表达。[2] 在 HCT-116 细胞中，洛贝替林（40 μmol/L）增加了 Bax 和 p21 的 mRNA 水平，同时显著抑制了 Bcl-2 的 mRNA 表达。[2] 在 HCT-116 细胞中，洛贝替林（10、20、40 μmol/L）导致 p53 蛋白在细胞核内表达下调，在细胞质内表达上调，促进了 p53 从细胞质向细胞核的转位。 [2] 在HCT-116细胞中，Lobetyolin（40 μmol/L）联合ASCT2抑制剂Benser处理，比单独使用Lobetyolin更能有效降低ATP和GSH水平，并促进凋亡相关蛋白（cleaved-caspase-3、caspase-3、cleaved-caspase-7）的表达。[2] 在HCT-116细胞中，p53抑制剂Pifithrin-α阻断了Lobetyolin介导的ASCT2 mRNA和蛋白、谷氨酰胺代谢生物标志物（α-酮戊二酸、ATP、GSH）的下调以及凋亡蛋白的过表达。[2]

在携带 HCT-116 细胞的裸鼠异种移植模型中，与对照组相比，Lobetyolin（10、20、40 mg/kg，腹腔注射，持续 2 周）明显抑制了肿瘤体积。Lobetyolin 还显著降低了肿瘤组织中 ASCT2 mRNA 和蛋白的表达。[2]

将汇合的NCI-H292细胞用洛贝替林、洛贝替醇或亚油酸甲酯预处理30分钟，然后用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）刺激24小时。分别采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MUC5AC黏蛋白基因的表达以及黏蛋白的产生和分泌。[1]

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黏蛋白研究中，NCI-H292细胞培养于含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基中。血清剥夺实验中，将汇合的细胞用PBS洗涤，并在含0.2% FBS的RPMI 1640培养基中培养24小时。细胞先用不同浓度的洛贝替林（Lobetyolin，1、10 和 100 μM）预处理 30 分钟，然后在无血清 RPMI 1640 培养基中用 PMA（10 ng/mL）刺激 24 小时。24 小时后，收集上清液用于检测 MUC5AC 蛋白分泌，裂解细胞用于检测 MUC5AC 蛋白生成，并提取总 RNA 通过 RT-PCR 检测 MUC5AC 基因表达。[1] 对于 MUC5AC 蛋白分析（ELISA），将上清液或细胞裂解液用 PBS 稀释 10 倍，取 100 μL 样品接种于 96 孔板中，42°C 孵育至干燥。洗涤孔板后，用 2% BSA 封闭，然后与小鼠单克隆 MUC5AC 抗体孵育。洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG偶联物。用TMB过氧化物酶溶液显色，用硫酸终止反应，并在450 nm处读取吸光度。[1]
对于RT-PCR，提取总RNA并进行逆转录。在30 μL反应体系中，以2 μg总RNA和1 μg oligo(dT)引物进行反转录。取2 μL逆转录产物，在20 μL反应体系中进行PCR扩增。使用MUC5AC和管家基因Rig/S15 rRNA的引物。PCR反应程序为：94℃预变性5分钟，然后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30秒、60℃退火30秒和72℃延伸30秒，最后在72℃延伸10分钟。 PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离，并用溴化乙锭染色显影。[1]
为进行细胞活力和抗癌研究，将HCT-116和NCM460细胞培养于含10% FBS和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。MTT实验中，将1×10⁴个/mL的HCT-116细胞接种于96孔板中，培养24小时。然后用不同浓度的洛贝替林（1、5、10、20、40、80 μmol/L）处理细胞24小时。之后，加入20 μL浓度为5 mg/mL的MTT溶液，孵育4小时。弃去培养基，用DMSO溶解生成的甲臜晶体。在 570 nm 处测量光密度。细胞存活率 (%) = (A_处理组 / A_对照组) x 100%。[2]
对于 Annexin V-FITC/PI 染色，将 HCT-116 细胞用冰冷的 PBS 洗涤，重悬于结合缓冲液中，并在 25°C 避光条件下用 V-FITC/PE 溶液孵育 10 分钟。通过流式细胞术分析凋亡细胞的百分比。[2]
对于 TUNEL 检测，将 HCT-116 细胞接种于腔室载玻片上，并用 Lobetyolin 处理。用 PBS 洗涤后，进行 TUNEL 染色。在荧光显微镜下观察前，使用抗荧光猝灭溶液。 [2]
对于RT-qPCR，将HCT-116细胞（2.5×10⁵/mL，2 mL）接种于六孔板中培养24小时，用化合物处理24小时后收集细胞。使用TRlzol试剂提取总RNA。取1 μg总RNA进行反转录合成cDNA。反应体系包含Supermix、总RNA和无DNase水。使用M-MuLV反转录酶进行RNA反转录。[2]
对于Western blot，将HCT-116细胞（2.5×10⁵/mL，2 mL）接种于六孔板中培养24小时，用Lobetyolin处理24小时后收集细胞。细胞用冰冷的PBS洗涤，浸入RIPA裂解缓冲液中，并在4℃下以10,000g离心10分钟。测定蛋白浓度。等量的样品经8%-12% SDS-PAGE凝胶电泳分离后，转移至PVDF膜上。膜用5%脱脂奶粉封闭，并在4℃下与一抗孵育过夜，随后与HRP标记的二抗孵育1小时。膜与ECL化学发光系统孵育并显色。[2]
免疫荧光染色中，将5×10⁵个细胞接种于六孔板中培养24小时，然后用Lobetyolin处理。24小时后，用4%多聚甲醛固定细胞30分钟。将稀释于BSA中的一抗与细胞在4℃下孵育过夜。将染色后的细胞在黑暗中用山羊抗兔 Alexa Fluor 二抗处理 1 小时，然后用 DAPI 染色。用抗荧光淬灭液封片后，用荧光显微镜观察样品。[2]

对于体内异种移植模型，将6周龄无胸腺裸鼠（nu/nu）右侧腹部皮下接种HCT-116细胞（2×10⁶个细胞）。肿瘤移植24小时后，将小鼠随机分为4组（n=10）：对照组（载体）、洛贝替林组（10 mg/kg）、洛贝替林组（20 mg/kg）和洛贝替林组（40 mg/kg）。小鼠腹腔注射洛贝替林或载体，持续2周。之后，处死小鼠，取出肿瘤，称重，并进行mRNA和Western blot分析。[2]

在NCI-H292细胞中，采用乳酸脱氢酶（LDH）测定法检测了洛贝替林（1、10和100 μM）的潜在细胞毒性，结果表明在所测试的浓度下未观察到明显的细胞毒性作用。[1] 在NCM460正常结肠黏膜上皮细胞中，MTT实验表明洛贝替林（10、20和40 μmol/L）对细胞活力没有显著影响。[2]

[1]. Effects of Lobetyolin, Lobetyol and Methyl linoleate on Secretion, Production and Gene Expression of MUC5AC Mucin from Airway Epithelial Cells. Tuberc Respir Dis (Seoul). 2014 Nov;77(5):203-8.

[2]. Lobetyolin induces apoptosis of colon cancer cells by inhibiting glutamine metabolism. J Cell Mol Med. 2020 Mar;24(6):3359-3369.

洛贝替林是一种O-酰基碳水化合物。据报道，(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[(4E,12E)-1,7-二羟基十四碳-4,12-二烯-8,10-二炔-6-基]氧基-6-(羟甲基)氧杂环己烷-3,4,5-三醇存在于欧洲风铃草(Campanula sylvestris)、梭梭(Haloxylon ammodendron)以及其他具有相关数据的生物体中。另见：洛贝替林（注：已移至此处）。

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洛贝替林对气道黏蛋白分泌、产生和基因表达的抑制作用可能至少部分解释了民间传统医学中将党参(Codonopsis pilosula)用作治疗肺部炎症性疾病的抗炎和抗过敏药物的原因。 [1]在结肠癌HCT-116细胞中，洛贝替林通过抑制ASCT2介导的谷氨酰胺代谢诱导细胞凋亡，而这一过程可能受p53调控。该研究表明，洛贝替林可能成为结直肠肿瘤的治疗候选药物。[2]

C20H28O8

396.4315

396.178

136085-37-5

53486204

White to yellow solid

1.4±0.1 g/cm3

698.5±55.0 °C at 760 mmHg

376.2±31.5 °C

0.0±5.0 mmHg at 25°C

1.607

Codonopsis pilosula

2.02

139.84

6

8

9

28

646

5

O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]1([H])C([H])([H])O[H])O[H])O[H])O[H])OC([H])(/C(/[H])=C(\[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O[H])C([H])(C#CC#C/C(/[H])=C(\[H])/C([H])([H])[H])O[H]

MMMUDYVKKPDZHS-UPPVCQNNSA-N

InChI=1S/C20H28O8/c1-2-3-4-5-7-10-14(23)15(11-8-6-9-12-21)27-20-19(26)18(25)17(24)16(13-22)28-20/h2-3,8,11,14-26H,6,9,12-13H2,1H3/b3-2+,11-8+/t14?,15?,16-,17-,18+,19-,20-/m1/s1

(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[(4E,12E)-1,7-dihydroxytetradeca-4,12-dien-8,10-diyn-6-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~50 mg/mL (126.1 mM)
H2O: ~50 mg/mL (126.1 mM)