Luteoloside (Cynaroside)   中文名称: 木犀草苷

RNA polymerase inhibitor（IC50=32 nM）

Cynaroside 可减少与脓毒症相关的肝脏炎症损伤，促进巨噬细胞表型从促炎性 M1 转变为抗炎性 M2。
通过阻止 PKM2 易位至细胞核，促进 PKM2 四聚体的形成，并抑制 PKM2 磷酸化Y105 在体内和体外，西洋蓟苷均可降低 PKM2 与缺氧诱导因子 1α (HIF-1α) 的结合。
在脓毒症肝脏中，西洋蓟苷可防止糖酵解导致的 HMGB1 过度乙酰化，恢复丙酮酸激酶活性，并促进抑制与糖酵解相关的蛋白质，如 PFKFB3、HK2 和 HIF-1α。
通过减少活性氧的产生并防止线粒体和死亡受体途径中 caspase 的激活，西洋皂苷可以保护 H9c2 细胞免受 H2O2 诱导的细胞凋亡。< br> 通过控制 JNK、P53 和 Bcl-2 蛋白的表达，西葫芦苷可保护线粒体功能[2][3]。

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Cynaroside调节与PKM2介导的促炎途径相关的巨噬细胞表型转变[2]
为了进一步探讨cynaroside对巨噬细胞表型转变中PKM2的影响，我们在LPS刺激下使用RAW264.7细胞进行了细胞表型鉴定。Cynaroside和PKM2抑制剂紫草素显著降低了LPS诱导的M1标志物CXCL10、iNOS和TNF-α的mRNA水平以及iNOS的蛋白表达水平（图5A和C）。相比之下，用cynaroside和紫草素治疗增加了M2标志物Arg-1、IL-10和CD206的表达水平（图5B和C）。这些发现表明，Cynaroside在体外抑制促炎M1型巨噬细胞极化，并增加抗炎和组织修复M2型巨噬细胞极化。此外，cynaroside和紫草素降低了糖酵解相关基因HK2、PFKFB3和PKM2的表达水平，而LPS在RAW264.7细胞中增加了这些基因的表达水平（图6A）。PKM2与Hif-1α相互作用，刺激Hif-1α转录激活结构域功能。此外，PKM2促进p300募集到与HIF-1靶基因相关的缺氧反应元件（HRE）中。我们测量了HIF-1α水平，以确定cynaroside对PKM2与HIF-1α结合的影响。Cynaroside治疗降低了CLP手术小鼠肝组织核提取物或全细胞提取物中HIF-1α的表达水平（图4A），但降低了脓毒症小鼠肝巨噬细胞中PKM2的核转位（图4E）。此外，cynaroside在体外抑制了核提取物中PKM2和HIF-1α的表达水平，以及PKM2与HIF-1α在LPS暴露的RAW264.7核中的共定位（图4B、6B和F）。Co IP实验结果显示，在体外和体内，cynaroside降低了PKM2和HIF-1α在细胞核中形成的复合物的水平（图4D和6E）。此外，我们还研究了cynaroside对PKM2四聚体的影响。TEPP-46通过充当激动剂促进PKM2二聚体转化为四聚体。Cynaroside和TEPP-46治疗显著增加了LPS暴露的巨噬细胞中四聚体PKM2的比例（图6C）。Y105的磷酸化表明单体或二聚体的形成，因为它阻止了PKM2四聚体构型，这进一步促进了Warburg效应。CLP和LPS在体外和体内诱导PKM2Y105的高磷酸化。Cynaroside处理在体外和体内抑制PKM2中Y105残基的磷酸化（图4C和6D）。使用SwissDock进行分子对接分析(http://www.swissdock.ch/)Autodock-vina的研究表明，cynaroside与PKM2结合（PDB ID:1T5A）（图6H）。对接结果预测，cynaroside可能通过氢键与关键氨基酸残基LYS311和ASN350、ALA388、TYE390结合。同时，PKM2的PHE306与cynaroside之间形成疏水相互作用和π-π堆积。因此，分子对接信息表明PKM2可能是cynaroside的潜在药物靶点。上述所有结果表明，cynaroside可能靶向PKM2，抑制Y105位点的磷酸化，增强PKM2四聚体的稳定性，如TEPP-46，从而阻断PKM2介导的促炎途径。

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黄酮类化合物具有强大的抗氧化作用，是治疗心血管疾病的传统草药中的主要有效成分。Cynaroside是一种具有抗氧化能力的黄酮类化合物。然而，人们对其对心肌细胞氧化损伤的影响及其潜在机制知之甚少。本研究旨在探讨cynaroside对H9c2成肌细胞H（2）O（2）诱导凋亡的保护作用。H9c2细胞在暴露于150µM h（2）O（2）6小时之前用cynaroside预处理4小时。h（2”O（2”）处理对H9c2细胞造成严重损伤，并伴有凋亡，通过Annexin V FITC/PI染色和胱天蛋白酶激活对细胞核形态进行分析。Cynaroside预处理通过增强超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶的内源性抗氧化活性，从而抑制细胞内活性氧（ROS）的产生，显著降低了凋亡率。此外，cynaroside调节了H（2）O（2）诱导的线粒体膜电位破坏，增加了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，同时降低了促凋亡蛋白Bax的表达，从而抑制了H9c2细胞线粒体中凋亡因子（细胞色素c和smac/Diablo）的释放。我们的数据还表明，cynaroside预处理对H（2）O（2）诱导的c-Jun N-末端激酶（JNK）和P53蛋白表达的增加具有抑制作用。这些结果表明，cynaroside通过减少内源性ROS的产生、维持线粒体功能以及调节JNK和P53通路来预防H（2）O（2）诱导的H9c2细胞凋亡。[3]

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黄酮类化合物Cynaroside已被证明具有抗菌、抗真菌和抗癌活性。在这里，我们通过不同的计算机模拟和体外试验评估了其抗利什曼原虫特性及其作用机制。Cynaroside在体外以时间和剂量依赖的方式表现出抗利什曼原虫活性，50%的抑制浓度（IC50）值为49.49±3.515µM。当与具有很高毒性的标准药物米替福辛联合使用时，它在仅20µM的浓度下显著抑制了寄生虫的生长。当与米替福辛联合使用时，它在低剂量下也显著抑制了巨噬细胞内的寄生虫。在相似剂量下，它的毒性低于现有的抗利什曼原虫药物米替福辛。碘化丙啶染色显示，cynaroside抑制了细胞周期G0/G1期的寄生虫。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯（H2DCFDA）染色显示，cynaroside通过在寄生虫中产生活性氧（ROS）诱导抗利什曼原虫活性。与杜氏利什曼原虫关键药物靶点的分子对接研究显示出显著的抑制作用。在这些靶标中，cynaroside与尿苷二磷酸（UDP）-吡喃半乳糖变位酶的亲和力最强，为-10.4 kcal/mol，这进一步通过分子动力学（MD）模拟得到了验证[4]。

Cynaroside（腹腔注射；5 mg/kg）通过阻止 PKM2 转位至细胞核、促进 PKM2 四聚体的形成以及防止 PKM2 在 Y105 处磷酸化，抑制 PKM2 与缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) 的结合[2 ]。

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Cynaroside抑制CLP诱导的肝脏炎症[2]
为了研究Cynaroside在CLP诱导的肝损伤中的作用，在对小鼠进行盲肠结扎和肝脏穿刺（CLP）后，向其腹腔注射Cynarosid或生理盐水溶液，以模拟临床脓毒症的效果（图1A）。CLP后16小时测定小鼠血浆ALT和AST水平。cynaroside治疗显著降低了CLP诱导的高血浆ALT和AST水平（图1C和D）。为了证实cynaroside对CLP诱导的肝损伤的影响，通过H&E染色测定了小鼠肝脏的组织病理学变化。CLP诱导的小鼠脓毒症肝组织H&E染色结果显示，肝脏中有淋巴细胞和中性粒细胞浸润。然而，药物治疗组的炎性细胞浸润显示出不同程度的恢复（图1B）。我们对肝组织进行了免疫荧光检测，以进一步探讨cynaroside对CLP诱导的肝损伤免疫反应的影响。肝脏切片的IF染色显示，cynaroside减少了肝脏中F4/80阳性巨噬细胞的浸润（图2A）。促炎细胞因子在CLP诱导的肝损伤进展中起着关键作用[7]。此外，我们通过Western blot（图2B）和IHC染色（图2A）比较了不同治疗组CLP后16小时肝脏中早期促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和晚期HMGB1的表达。CLP小鼠IL-1β、IL-6和TNF-α以及HMGB1的表达水平显著升高，而cynaroside预处理组的表达水平明显低于对照组。总之，这些发现表明，cynaroside可以缓解CLP引起的肝脏炎症。

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Cynaroside抑制脓毒症小鼠肝脏巨噬细胞的M1极化表型[2]
巨噬细胞极化在脓毒症进展过程中的肝脏炎症和组织损伤中起着关键作用。因此，我们探讨了cynaroside对肝巨噬细胞极化的影响。F4/80是巨噬细胞的表面糖蛋白，用作巨噬细胞的标志物。iNOS是M1巨噬细胞的标志物，因此，它被用作组织中的M1标志物。此外，CD206被用作标记M2标记的表面受体蛋白。CLP手术显著提高了iNOS+（红色）、F4/80+（绿色）标记物的水平（图3A）。值得注意的是，cynaroside治疗显著降低了iNOS+酶的水平。相反，cynaroside治疗增加了CD206+（红色）和F4/80+（绿色）标记物的数量（图3A）。Western blot结果显示，cynaroside下调了CLP诱导的高iNOS蛋白水平，上调了CD206（图3B）。结果表明，cynaroside促进脓毒症小鼠肝脏中的M2极化并抑制M1极化。

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Cynaroside抑制脓毒症小鼠肝脏中PKM2的表达[2]
M1巨噬细胞的过度炎症反应和极化受有氧糖酵解的控制[8]。因此，我们通过进行蛋白质印迹分析来研究肝脏糖酵解相关信号。结果表明，CLP上调了参与糖酵解的关键酶，但cynaroside的诱导显著逆转了这些酶的上调，包括HK2、PFKFB3和PKM2（图4A）。PKM2是连接免疫和代谢、平衡糖酵解和OXPHOS以及通过核转位激活炎症反应的关键蛋白[27]。本研究进行了一系列实验，以探索cynaroside与PKM2之间的关系，旨在阐明cynarosid通过调节PKM2调节炎症反应和巨噬细胞表型转换的机制。此外，cynaroside治疗抑制了CLP诱导的HMGB1乙酰化，该乙酰化被PKM2介导的肝组织异常糖酵解激活（图2B）。肝脏切片的IF染色显示，PKM2（显示为红色）在脓毒症小鼠的整个肝脏以及肝巨噬细胞（F4/80+，显示为绿色）中高度表达（图S1和S2）。此外，cynaroside降低了肝巨噬细胞和整个肝脏中PKM2的表达水平。

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Cynaroside抑制脓毒症小鼠肝脏PKM2核转位[2]
PKM2可以单体或二聚体以及四聚体的形式存在。PKM2四聚体的高水平丙酮酸激酶活性促进正常的细胞代谢。然而，PKM2二聚体的低酶活性导致免疫激活过程中细胞代谢减少，这也会在易位到细胞核后激活炎症基因。使用Native PAGE电泳检测脓毒症小鼠肝脏中PKM2二聚体的表达。CLP增加了PKM2二聚体在肝脏中的表达水平，而cynaroside治疗降低了PKM2的表达水平（图4B），这一观察结果与之前的一项研究结果一致。此外，用cynaroside治疗恢复了脓毒症小鼠肝脏中的丙酮酸激酶活性（图4F）。Cynaroside逆转了CLP治疗后小鼠肝细胞核中PKM2的上调（图4A）。此外，IF染色显示，cynaroside减少了脓毒症小鼠肝巨噬细胞中PKM2的核转位（图4E）。

蛋白质-配体复合物的分子对接和分子动力学模拟[4]
将蛋白质分子加载到PyRx虚拟筛选工具中，并将其转化为大分子pdbqt格式。将待筛选的Cynaroside导入并转化为配体pdbqt格式。在Vina向导中，选择pdbqt大分子和pdbqts配体，并设置网格框，网格框内包含所有活性位点残基。通过运行Vina来执行对接。对输出文件进行分析以找到结合能。选择了Cynaroside的最佳方向并将其保存为PDB文件。将蛋白质分子和最佳取向的配体分子装载在Pymol中，并可视化蛋白质-配体复合物。将蛋白质-配体复合物加载到Ligplot软件中，并分析输出的2D图，以找到蛋白质的氢键数量和结合位点残基。
通过选择最低的结合自由能（ΔG）和使用以下公式计算的最低抑制常数（Ki），分析了Cynaroside的最有利结合位姿：

细胞系：H9c2 细胞
浓度：25、50、100 μg/mL
孵育时间：4 小时
结果：保护 H9c2 细胞免受氧化应激诱导的细胞损伤。

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RAW264.7细胞系在添加了10%FBS的DMEM中培养，并在37°C下用5%CO2孵育。细胞每2-3天传代一次。RAW264.7细胞以1×105个细胞/mL的密度接种，并在六孔板中培养过夜，以实现70%的融合。RAW264.7巨噬细胞用Cynaroside或紫草素（PKM2的特异性抑制剂）预处理4小时，并用LPS（0.5μg/mL）刺激8小时 细胞活力和形态变化分析[3]
通过3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑（MTT）比色法测定细胞存活率。简而言之，细胞在1 × 104 96孔板中的细胞/孔。4之后 用不同浓度的Cynaroside处理h，然后用150 µM过氧化氢，适用于6 h, 20 µl，共5个 向每个孔中加入mg/ml MTT溶液（0.1mg/孔），并孵育4小时 h.吸出上清液，将每个孔中的甲赞晶体溶解在100 µl二甲基亚砜。在570℃下测量吸光度 在微孔板阅读器（佛蒙特州BioTek）上显示nm。还观察了细胞的形态变化，并在连接数码相机的倒置显微镜下拍摄了图像。

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细胞内ROS产生的检测[3]
为了研究Cynaroside对细胞内ROS产生的影响，将细胞用Cynarosid预处理4小时 h加150之前 µM过氧化氢，适用于6 h.然后，根据制造商的说明书，使用总ROS检测试剂盒监测细胞内ROS水平。收集细胞，放入5 ml圆底聚苯乙烯管处理后，用1×洗涤缓冲液洗涤。然后，将细胞离心5分钟 在室温下以400g搅拌min，弃去上清液。将细胞重新悬浮在500 µl ROS检测溶液，在37°C的黑暗中染色30 然后通过流式细胞术进行分析。

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抗前鞭毛体评价和IC50测定[4]
计数对数相前鞭毛体，在22°C下，在有和没有Cynaroside的情况下，以120µM的两倍系列稀释液以5×106寄生虫的密度孵育48小时。寄生虫存活率百分比计算为（处理样品的平均寄生虫数/对照的平均寄生虫）×100。通过外推寄生虫存活率百分比与药物/化合物浓度的关系图来确定50%的抑制浓度。使用LMI英国vImage软件在20×和40×透镜下观察寄生虫的形态学变化。

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Cynaroside的抗无鞭毛体和细胞毒性评价[4]
在37°C下，将总共2×106个THP-1分化的巨噬细胞铺在RPMI 1640完全培养基（含5%CO2）的96孔组织培养级板上，以评估Cynaroside的细胞毒性活性。用普通RPMI 1640培养基洗涤分化的贴壁细胞，并将其暴露于从500µM开始的两倍连续稀释的cynaroside中24小时。细胞进一步与50µM的5 mg/ml MTT孵育3-4小时，然后将所得甲赞溶解在150µM的DMSO中。产生的甲赞的量代表了活细胞的相对数量，这是通过ELISA平板读数器在570nm下分光光度法记录的。细胞毒性浓度50%，即CC50值，是通过外推细胞存活率与化合物浓度的剂量反应曲线来确定的。为了计算寄生虫载量，将THP-1分化的巨噬细胞铺在六孔板的盖玻片上，并以1:10的比例感染杜氏乳杆菌。感染的巨噬细胞用不同浓度的药物/化合物处理48小时，然后用冷冻甲醇固定细胞，用Giemsa染色以计算寄生虫载量百分比。

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前鞭毛体细胞周期的研究[4]
简而言之，在有和没有不同浓度的Cynaroside和miltefosine作为阳性对照的情况下培养前鞭毛体。孵育48小时后收获前鞭毛体，用PBS洗涤三次，然后用80%冷冻乙醇固定，并在4°C下过夜。用PBS洗涤固定的细胞两次，在37°C下用200μg/ml的RNase孵育1小时，然后在黑暗中用50µM的1mg/ml碘化丙啶（PI）染色20分钟。通过流式细胞仪分析细胞。

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ROS估计[4]
为了评估Cynaroside诱导的ROS产生，将5×106个寄生虫与不同浓度的化合物/药物在22°C下孵育48小时。用PBS洗涤处理过的寄生虫，用10µM荧光染料2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯（H2DCFDA）在黑暗中孵育20分钟，并通过BD FACS ARIA进行分析。数据以直方图的形式表示。

动物模型：脓毒症小鼠模型[2]
剂量：5mg/kg
给药途径：洋蓟苷（腹腔注射；5mg/kg）
结果：抑制脓毒症小鼠肝脏中PKM2二聚体的形成。

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脓毒症小鼠模型[2]
根据Daniel Rittirsch等人的方法，建立了盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的严重脓毒症小鼠模型。将C57BL/6小鼠随机分为三组：假手术组、CLP组和CLP+洋蓟苷（5 mg/kg）组。在CLP手术前30分钟，通过腹腔注射给予洋蓟苷或溶剂对照。之后，使用氯胺酮（80–100 mg/kg/腹腔注射，1867-66-9）和赛拉嗪（5 mg/kg/腹腔注射）进行麻醉。在腹部正中做一个小切口，将盲肠外翻，并用4-0丝线结扎回盲瓣远端，避免肠梗阻。此外，用21号针头穿刺阑尾两次。腹部采用双层缝合关闭。假手术组的小鼠接受了相同的手术操作，但未对盲肠进行结扎或穿孔。最后，将小鼠放回温度控制室（22℃）的笼子中，每6小时观察一次。药代动力学研究[4] 通过分析Lipinski规则-5的违反情况来评估所选配体的药理学特征，该分析由Molsoft LLC的药物相似性和分子性质预测软件（http://www.molsoft.com/mprop/）完成。利用 Molinspiration (https://molinspiration.com/cgi-bin/properties) 对Cynaroside的生物活性进行了检测。随后，利用 GUSAR 和 SwissADME 数据库对Cynaroside的 ADMET（吸收、分布、代谢、排泄和毒性）特性进行了进一步评估。SwissADME 软件通过应用不同的虚拟筛选方法，帮助我们识别目标药物分子。此外，亲脂性（iLOGP、WLOGP、XLOGP3、MLOGP、Log Po/w）、药代动力学（胃肠道吸收、血脑屏障渗透性、P-gp 底物、Log (Kp)）以及水溶性等不同指标也有助于对合适的药物分子进行初步筛选。 OSIRIS Property Explorer 程序用于评估化合物的致突变性、致瘤性、刺激性和生殖毒性风险，该程序还提供化合物的毒性、溶解度 (LogS)、亲水性 (LogP)、分子量、类药性和药物评分等信息。

本研究对洋蓟苷进行了药理学研究，旨在通过Lipinski五规则确定其良好的口服给药性能。该规则由Molsoft LLC公司进行评估，用于预测药物相似性和分子性质。洋蓟苷符合Lipinski五规则的所有参数，但氢键供体(HBD)和氢键受体(HBA)的原子数分别超出2个和1个。洋蓟苷的亲脂性值为0.47，表明其舌下吸收中等（见表2）。Lipinski五规则是一种预测药物相似性的分析方法，它指出分子量（MW ≤ 500 Da）、亲脂性（LogP ≤ 5）、氢键供体(HBD ≤ 5)和氢键受体(HBA ≤ 10)均较高的分子具有良好的吸收或跨细胞膜渗透性。在通过虚拟筛选选择目标药物分子时，我们有时会发现一些筛选规则被违反，例如 Ro5 和 Veber 规则等。目前，制药行业中一些重要的上市药物违反了某些相似性规则。在一些非常受欢迎的药物中，例如福辛普利、溴隐亭甲磺酸盐、达比吉曲奈酯、奥美沙坦酯和利血平等，都存在两项 Ro5 规则的违反。我们使用 SwissADME 系统对洋蓟苷进行了药效学研究，以了解该药物在宿主体内的作用机制。洋蓟苷的胃肠道吸收率低，溶解度良好，其溶解度值为 -3.65，高于 -4（≥ -4）。洋蓟苷不能透过血脑屏障。其先导化合物相似性标准仅在分子量（≥350）方面被违反，且具有中等的生物利用度评分。结果汇总于表2。ADMET研究重点关注可定义吸收、分布、代谢、排泄、毒性、胃肠道吸收（GIA）、溶解度（LogS）、P-糖蛋白底物抑制以及细胞色素底物/抑制剂的参数。金丝桃苷被评估为一种活性酶抑制剂，其值为0.42。Molinspiration预测的生物活性见表3。Molinspiration用于评估金丝桃苷的生物活性，计算其对GPCR配体、激酶抑制剂、离子通道调节剂、蛋白酶抑制剂、核受体配体和酶抑制剂的活性。生物活性值解释如下：无活性（生物活性评分≤-5.0）、中等活性（生物活性评分：-5.0至0.0）和活性（生物活性评分≥0）。根据经济合作与发展组织（OECD）的化学分类，如表4所示，洋蓟苷被判定为无毒物质。预测急性毒性的主要目的是评估化合物通过已知给药途径（口服、吸入、皮下注射、静脉注射或腹腔注射）单次或多次暴露于生物体后产生的不良副作用。本研究使用GUSAR软件，基于物质活性谱预测算法和原子定量邻域描述符，确定了成功对接的洋蓟苷的急性毒性。所得结果与毒性数据库进行比较，并根据OECD化学分类手册进行分类。根据给药途径，当化合物剂量超过静脉注射7000 mg/kg、口服500000 mg/kg、腹腔注射和皮下注射20000 mg/kg时，洋蓟苷被认为具有毒性（见表4）。所有预测的洋蓟苷毒性风险因素均较低，分子量小于500，表明其易于吸收，且作为药物给药后能够到达作用部位。[4] 生物活性、ADMET（吸收、分布、代谢、排泄和毒性）特性、经济合作与发展组织（OECD）化学分类以及毒性风险预测表明，洋蓟苷是一种具有良好溶解性和无毒特性的酶抑制剂。总之，洋蓟苷可单独使用，也可与现有药物米替福新联合使用，以控制利什曼病，且细胞毒性较小。

药效学研究表明，洋蓟苷无毒。据预测，洋蓟苷不具有致突变性、致瘤性、刺激性和生殖毒性风险，如表5所示。[4]

[1]. Unraveling the Anti-Influenza Effect of Flavonoids: Experimental Validation of Luteolin and its Congeners as Potent Influenza Endonuclease Inhibitors. Eur J Med Chem. 22 August 2020, 112754.

[2]. Cynaroside prevents macrophage polarization into pro-inflammatory phenotype and alleviates cecal ligation and puncture-induced liver injury by targeting PKM2/HIF-1α axis. Fitoterapia. 2021 Jul;152:104922.

[3]. Protective effects of cynaroside against H₂O₂-induced apoptosis in H9c2 cardiomyoblasts. J Cell Biochem. 2011 Aug;112(8):2019-29.

[4]. Cynaroside inhibits Leishmania donovani UDP-galactopyranose mutase and induces reactive oxygen species to exert antileishmanial response. Biosci Rep. 2021 Jan 29;41(1):BSR20203857.

木犀草素 7-O-β-D-葡萄糖苷是一种糖基氧基黄酮，是木犀草素在 7 位通过糖苷键被 β-D-吡喃葡萄糖基取代而形成的。它具有抗氧化作用，也是一种植物代谢产物。它是一种 β-D-葡萄糖苷、糖基氧基黄酮、三羟基黄酮和单糖衍生物。它在功能上与木犀草素相关。它是木犀草素 7-O-β-D-葡萄糖苷(1-)的共轭酸。
据报道，金鸡菊 (Coreopsis lanceolata)、苦苣菜 (Sonchus fruticosus) 和其他一些有相关数据的生物体中都含有洋蓟苷。
另见：洋蓟叶（部分）；金银花（部分）。洋甘菊（Chamaemelum nobile）花（部分）。

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黄酮类化合物对哺乳动物细胞的生物学效应多种多样，包括清除自由基、抗癌活性以及抗流感活性。尽管人们已投入大量精力来了解黄酮类化合物的抗流感活性，但其在细胞水平上的确切作用机制尚未达成共识。本文报道了一种基于AlphaScreen技术的筛选方法的开发和验证，并展示了其在测定一系列多元醇对具有核酸内切酶活性的流感RNA依赖性RNA聚合酶PA N端结构域（PA-Nter）抑制效力方面的应用。我们鉴定出的最有效的抑制剂是木犀草素（IC50为72 ± 2 nM）及其8-C-葡萄糖苷荭草素（IC50为43 ± 2 nM）。我们还利用单链DNA进行体外内切酶活性测定，评估了亚微摩尔级抑制剂，结果与竞争性AlphaScreen测定的数据完全一致。利用X射线晶体衍射技术，我们分析了PA-Nter与木犀草素（2.0 Å分辨率）和昆巴拉林B（2.5 Å分辨率）的复合物结构，清晰地揭示了这些多元醇与内切酶活性位点中两个锰离子配位的结合模式。结合两种不同的测定方法和结构分析，我们推测已鉴定并表征了黄酮类化合物在流感病毒感染细胞中的分子作用机制。[1]脓毒症的治疗仍然具有挑战性，肝脏是脓毒症相关损伤的重要靶器官。巨噬细胞是肝脏中重要的固有免疫细胞，调节巨噬细胞的M1/M2极化可能是治疗脓毒症肝损伤的一种有前景的策略。巨噬细胞极化和肝组织炎症已被证实受丙酮酸激酶M2 (PKM2) 介导的有氧糖酵解和免疫炎症通路调控。因此，调控PKM2介导的免疫代谢重编程为炎症相关疾病提供了一种新的治疗策略。本研究发现，黄酮类化合物洋蓟苷能够促进巨噬细胞表型由促炎性M1型向抗炎性M2型转变，并减轻脓毒症相关的肝脏炎症损伤。我们发现，洋蓟苷通过抑制PKM2向细胞核的转位和促进PKM2四聚体的形成，从而降低PKM2与缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) 的结合，并在体内外均能抑制PKM2在Y105位点的磷酸化。此外，洋蓟苷可恢复丙酮酸激酶活性，抑制糖酵解相关蛋白（包括PFKFB3、HK2和HIF-1α），并抑制脓毒症肝脏中糖酵解相关的HMGB1过度乙酰化。因此，本研究报道了洋蓟苷在脓毒症小鼠肝脏巨噬细胞极化以及盲肠结扎穿刺诱导的肝损伤中的新功能。这些发现为洋蓟苷治疗脓毒症的疗效提供了关键信息。[2]

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总之，本研究结果表明，洋蓟苷通过降低活性氧（ROS）生成和抑制线粒体及死亡受体通路中的caspase活化，保护H9c2细胞免受H2O2诱导的细胞凋亡。此外，洋蓟苷通过调节Bcl-2蛋白以及JNK和P53的表达来维持线粒体功能。尽管洋蓟苷是一种有前景的治疗H2O2诱导细胞凋亡的药物，但仍需进一步研究以探索洋蓟苷对氧化应激诱导的心血管疾病的细胞保护机制。[3]

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本研究观察到洋蓟苷具有潜在的抗利什曼原虫活性。当与低浓度米替福新联合使用时，其疗效更佳。通过计算机模拟研究，我们发现LdUGM的结合能和结合位点残基与抑制性黄酮类化合物洋蓟苷的相互作用最佳。分子动力学模拟研究也证实了这一点。我们的结果表明，在对实验性内脏利什曼病进行详细的体内研究后，洋蓟苷可作为食品成分用于对抗利什曼病。[4]

C21H20O11

448.3769

448.1

5373-11-5

5280637

Light yellow to green yellow solid powder

1.7±0.1 g/cm3

838.1±65.0 °C at 760 mmHg

256 - 258 °C

296.8±27.8 °C

0.0±3.2 mmHg at 25°C

1.740

-0.09

190.28

7

11

4

32

714

5

C1=CC(=C(C=C1C2=CC(=O)C3=C(C=C(C=C3O2)O[C@H]4[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O4)CO)O)O)O)O)O)O

PEFNSGRTCBGNAN-QNDFHXLGSA-N

InChI=1S/C21H20O11/c22-7-16-18(27)19(28)20(29)21(32-16)30-9-4-12(25)17-13(26)6-14(31-15(17)5-9)8-1-2-10(23)11(24)3-8/h1-6,16,18-25,27-29H,7H2/t16-,18-,19+,20-,21-/m1/s1

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one

Cynaroside;Luteolin 7-glucoside; Cinaroside; Luteolin-7-glucoside; Luteolin 7-O-glucoside; Luteolin-7-O-glucoside

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~83.33 mg/mL (~185.85 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 16.67 mg/mL (37.18 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。