| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CD73 Ecto-5'-nucleotidase (CD73) (IC50 = 0.4 nM in recombinant human CD73 enzyme assay; IC50 = 3.2 nM in mouse CD73 enzyme assay) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CD73-IN-3 的 EC50 为 0.213 μM，可抑制人血清中的 CD73 活性。 CD73-IN-3 浓度分别为 0.52 μM、1.56 μM 和 4.68 μM 时，可将人血清中的 CD73 活性抑制 56.8%、71.7% 和 76.9% [1]。根据Calu6人细胞中CD73的检测结果，CD73-IN-3对CD73的IC50为0.0073 μM [1]。
重组CD73酶抑制活性：LY-3475070 强效抑制人及小鼠CD73介导的AMP水解为腺苷的反应。IC50值分别为0.4 nM（人CD73）和3.2 nM（小鼠CD73），对其他核苷酸酶（如CD39、碱性磷酸酶）的选择性超过10,000倍 [1] - 细胞腺苷生成抑制：在表达内源性CD73的MDA-MB-231乳腺癌细胞中，该化合物抑制AMP诱导的腺苷蓄积，IC50为8.7 nM。100 nM浓度下，细胞外腺苷水平较溶剂对照组降低92% [1] - 免疫调节活性：在人PBMC共培养实验中，LY-3475070（10–100 nM）可逆转腺苷介导的T细胞增殖抑制。50 nM浓度下，T细胞增殖恢复至无腺苷对照组的85% [1] - 抗癌细胞迁移活性：LY-3475070（1–100 nM）以浓度依赖方式抑制MDA-MB-231细胞迁移，50 nM浓度下迁移能力较对照组降低68% [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
CD73抑制剂LY3475070是一种口服生物可利用的外酶CD73抑制剂（分化簇73；5'-外核苷酸酶；5'-NT；外5'-核苷酸酶），具有潜在的免疫调节和抗肿瘤活性。口服后，CD73抑制剂LY3475070靶向并结合CD73，导致CD73聚集和内化。这阻止了CD73介导的腺苷一磷酸（AMP）转化为腺苷，并减少了肿瘤微环境（TME）中游离腺苷的量。这可以防止腺苷介导的淋巴细胞抑制，并增加CD8阳性效应细胞和自然杀伤（NK）细胞的活性。这也会激活巨噬细胞，降低髓系衍生抑制细胞（MDSC）和调节性T淋巴细胞（Tregs）的活性。通过消除对免疫系统的抑制作用并增强细胞毒性T细胞介导的针对肿瘤细胞的免疫反应，肿瘤细胞的生长会减少。此外，CD73的聚集和内部化减少了癌症细胞的迁移并防止了转移。CD73是一种属于5'-核苷酸酶（NTase）家族的质膜蛋白，催化细胞外核苷酸（如AMP）转化为膜透性核苷（如腺苷）。它在许多癌症细胞类型中上调，并在TME中腺氨酸介导的免疫抑制中发挥关键作用。
小鼠肿瘤生长抑制：携带MC38结直肠癌异种移植瘤的C57BL/6小鼠经LY-3475070治疗，10 mg/kg每日两次口服给药21天，肿瘤体积缩小56%（治疗组体积：320 ± 45 mm³ vs. 对照组：728 ± 62 mm³），肿瘤重量降低52% [1] - 体内腺苷生成抑制：BALB/c小鼠在腹腔注射AMP前1小时，口服给予LY-3475070（10 mg/kg），AMP注射30分钟后，治疗组血清腺苷水平较对照组降低83% [1] - 联合抗癌疗效：在MC38荷瘤小鼠中，LY-3475070（10 mg/kg，口服，每日两次）与抗PD-1抗体（10 mg/kg，腹腔注射，每3天一次）联合治疗，肿瘤体积缩小78%，显著优于单一疗法（LY-3475070单药：56%；抗PD-1单药：41%）[1] |
| 酶活实验 |
重组CD73酶活性实验：重组人或小鼠CD73与含AMP（底物）及系列稀释LY-3475070（0.01 nM–1 μM）的反应缓冲液在37°C孵育60分钟。采用荧光检测系统定量生成的腺苷量，通过四参数logistic模型拟合剂量-反应曲线计算IC50值 [1]
- 核苷酸酶选择性实验：采用重组CD39、碱性磷酸酶及胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1（ENPP1）及其对应底物进行平行实验。LY-3475070浓度高达10 μM时，对这些酶无显著抑制（抑制率<5% vs. 对照组）[1] |
| 细胞实验 |
细胞腺苷蓄积实验：MDA-MB-231细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于24孔板，过夜孵育。用LY-3475070（0.1 nM–1 μM）预处理1小时后，加入AMP（100 μM）刺激2小时。收集培养上清液，LC-MS/MS检测腺苷浓度，通过剂量-反应曲线推导IC50值 [1]
- T细胞增殖实验：分离人PBMC，接种于96孔板，加入抗CD3/CD28抗体刺激T细胞增殖。同时加入腺苷（1 μM）和LY-3475070（0.1 nM–1 μM），培养72小时后，通过检测胸腺嘧啶类似物掺入量量化增殖水平 [1] - 细胞迁移实验：MDA-MB-231细胞接种于Transwell小室上室，上下室均加入含LY-3475070（0.1 nM–1 μM）的培养基，孵育24小时。固定并染色下室迁移细胞后手动计数，计算相对于溶剂对照组的迁移抑制率 [1] |
| 动物实验 |
MC38结肠癌异种移植模型：将MC38细胞（5×10⁶个细胞/100 μL PBS）皮下注射到6-8周龄C57BL/6小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为对照组（载体组）和治疗组（每组n=8）。LY-3475070溶于0.5%羟丙基甲基纤维素（HPMC）+ 0.1% Tween 80溶液中，以10 mg/kg的剂量每日两次（bid）口服给药，连续21天。每3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），并记录体重以监测毒性[1]
- 血清腺苷抑制模型：BALB/c小鼠（每组n=6）在腹腔注射AMP（20 mg/kg）前1小时，分别口服LY-3475070（10 mg/kg）或给予载体。AMP注射后30分钟，通过眼眶后静脉丛采集血样，并用LC-MS/MS定量血清腺苷水平[1] - 联合治疗模型：将MC38荷瘤小鼠随机分为四组（每组n=8）：载体组、LY-3475070组（10 mg/kg，口服，每日两次）、抗PD-1抗体组（10 mg/kg，腹腔注射，每3天一次）和联合治疗组。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时开始治疗，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积和体重 [1] - 药代动力学研究：Sprague-Dawley 大鼠（每个时间点 n=3）单次口服 LY-3475070（10 mg/kg，溶于 0.5% HPMC + 0.1% Tween 80 中）。分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血样。采用 LC-MS/MS 法测定血浆药物浓度，并使用非房室模型分析计算药代动力学参数 [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
口服生物利用度：在Sprague-Dawley大鼠中，单次口服10 mg/kg LY-3475070的口服生物利用度为68% [1]
- 血浆药代动力学：血浆峰浓度（Cmax）为1.8 μM，达峰时间为给药后1.2小时（Tmax）。消除半衰期（t1/2）为6.8小时，血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀₋₂₄h）为12.3 μM·h [1] - 组织分布：口服10 mg/kg 24小时后，该化合物广泛分布于各种组织，其中肝脏（4.2 μM）、肾脏（3.8 μM）和肿瘤（2.5 μM）的浓度最高。脑渗透率低（0.12 μM，脑血浆浓度比 = 0.08）[1] - 代谢和排泄：大鼠研究表明，给药剂量的约 72% 在 72 小时内经粪便排出（58% 为原药，14% 为代谢物），23% 经尿液排出（11% 为原药，12% 为代谢物）。体外肝微粒体试验显示代谢极少（2 小时后原药残留量为 89%）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性：在Sprague-Dawley大鼠和C57BL/6小鼠中，单次口服剂量高达300 mg/kg的LY-3475070不会导致死亡或显著的临床毒性。两种动物的LD50均大于300 mg/kg [1]
- 重复给药毒性：大鼠连续28天口服LY-3475070（10、50、200 mg/kg，每日一次），未观察到明显的体重变化或剂量相关的不良反应。血液学和血清生化指标（ALT、AST、肌酐、BUN）均在正常范围内[1] - 器官毒性：重复给药毒性研究中主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏、淋巴结）的组织病理学检查未发现异常病变或炎症[1] - 血浆蛋白结合：体外试验表明，LY-3475070 与人血浆蛋白的结合率为 83%，与大鼠血浆蛋白的结合率为 81%[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CD73抑制剂LY3475070是一种口服生物利用度高的CD73（分化簇73；5'-外核苷酸酶；5'-NT；外-5'-核苷酸酶）外酶抑制剂，具有潜在的免疫调节和抗肿瘤活性。口服后，CD73抑制剂LY3475070靶向并结合CD73，导致CD73聚集和内化。这可阻止CD73介导的腺苷单磷酸（AMP）转化为腺苷，并降低肿瘤微环境（TME）中游离腺苷的含量。这可阻止腺苷介导的淋巴细胞抑制，并增强CD8阳性效应细胞和自然杀伤（NK）细胞的活性。这也能激活巨噬细胞，并降低髓源性抑制细胞（MDSC）和调节性T淋巴细胞（Treg）的活性。通过消除对免疫系统的抑制作用，并增强细胞毒性T细胞介导的针对肿瘤细胞的免疫反应，肿瘤细胞的生长得以抑制。此外，CD73的聚集和内化还能减少癌细胞的迁移，从而阻止转移。CD73是一种属于5'-核苷酸酶（NTase）家族的质膜蛋白，它催化胞外核苷酸（如AMP）转化为膜通透性核苷（如腺苷）。它在多种癌细胞类型中上调，并在肿瘤微环境内腺苷介导的免疫抑制中发挥关键作用。
作用机制：LY-3475070 与 CD73 的活性位点结合，抑制其催化活性，并阻断细胞外 AMP 向腺苷的转化。这可以降低腺苷介导的免疫抑制，增强抗肿瘤免疫反应，并抑制癌细胞的迁移和存活[1] - 选择性：该化合物对 CD73 具有高度选择性，优于其他核苷酸酶（CD39、ENPP1、碱性磷酸酶）以及 150 多种激酶、GPCR 和离子通道（在 10 μM 浓度下抑制率 < 10%）[1] - 治疗潜力：LY-3475070 正在开发用于治疗实体瘤（例如乳腺癌、结肠癌、肺癌），可作为单药疗法或与免疫检查点抑制剂（例如抗 PD-1、抗 PD-L1 抗体）联合使用。它还显示出治疗腺苷介导的炎症性疾病的潜力[1] - 制剂特性：该化合物可溶于DMSO（≥ 20 mM）和水性制剂（0.5% HPMC + 0.1% Tween 80），浓度最高可达10 mg/mL，适用于口服和肠外给药[1] |
| 分子式 |
C15H18N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
286.3290
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| 精确质量 |
286.142
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| 元素分析 |
C, 62.92; H, 6.34; N, 19.57; O, 11.18
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| CAS号 |
2375815-63-5
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| PubChem CID |
152262911
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
1
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| tPSA |
84Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
488
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CC1=NN=C(C=C1[C@H]2C[C@@H]2C(C)C)C3=CNC(=O)NC3=O
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| InChi Key |
WHRUIISQCORGKK-KOLCDFICSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H18N4O2/c1-7(2)9-4-11(9)10-5-13(19-18-8(10)3)12-6-16-15(21)17-14(12)20/h5-7,9,11H,4H2,1-3H3,(H2,16,17,20,21)/t9-,11+/m1/s1
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| 化学名 |
5-(5-((1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl)-6-methylpyridazin-3-yl)pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
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| 别名 |
LY 3475070; LY-3475070; 2375815-63-5; LY-3475070; CD73-IN-3; ly3475070; 5-(5-((1S,2R)-2-Isopropylcyclopropyl)-6-methylpyridazin-3-yl)pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione; CHEMBL4792487; 5-[6-Methyl-5-[(1S,2R)-2-propan-2-ylcyclopropyl]pyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione; AKA9175T4N; LY3475070
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~349.25 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4925 mL | 17.4624 mL | 34.9247 mL | |
| 5 mM | 0.6985 mL | 3.4925 mL | 6.9849 mL | |
| 10 mM | 0.3492 mL | 1.7462 mL | 3.4925 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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