Temuterkib (LY3214996)

ERK1 (IC50 = 5 nM); ERK2 (IC50 = 5 nM)
ERK1 (IC₅₀ = 0.3 nM); ERK2 (IC₅₀ = 0.7 nM) [1]
ERK1 (IC₅₀ = 0.3 nM); ERK2 (IC₅₀ = 0.7 nM); no significant inhibition of other kinases (e.g., ERK5, JNK1/2/3, p38α/β/γ/δ) at concentrations up to 10 μM [2]

在生化测定中，Temuterkib 对 ERK1 和 ERK2 的 IC50 均为 5 nM，使其成为这两种酶的高度选择性抑制剂。 Temuterkib 可有效抑制含有 BRAF 和 RAS 突变的癌细胞系中的细胞磷酸化 RSK1。在抑制细胞增殖的无偏肿瘤细胞组敏感性分析中，具有 MAPK 通路改变（例如 BRAF、NRAS 或 KRAS 突变）的肿瘤细胞通常对 Temuterkib 敏感[1]。

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LY3214996是一种高度选择性的ERK1和ERK2抑制剂，在生化分析中对这两种酶的IC50均为5 nM。它能有效抑制BRAF和RAS突变癌细胞系的细胞磷酸化rsk1。在抑制细胞增殖的无偏倚肿瘤细胞组敏感性分析中，具有MAPK通路改变（包括BRAF、NRAS或KRAS突变）的肿瘤细胞通常对LY3214996敏感。[１]

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替穆特克（Temuterkib，LY3214996）是一种高选择性、强效的ERK1/2抑制剂。它抑制重组ERK1和ERK2激酶活性的IC₅₀值分别为0.3 nM和0.7 nM，对其他MAPK家族成员及468种额外激酶的选择性超过10,000倍。在148种携带MAPK通路异常（BRAF V600E/K/R、NRAS Q61L/R/K、KRAS G12C/D/V、MEK1/2突变或RAF融合）的癌细胞系中，该药物表现出强效抗增殖活性，EC₅₀值范围为0.3 nM至2.8 μM。蛋白质印迹分析显示，替穆特克可有效抑制BRAF V600E突变A375黑色素瘤细胞（IC₅₀ = 1.2 nM）和KRAS G12C突变H358肺癌细胞（IC₅₀ = 3.5 nM）中的ERK1/2磷酸化（p-ERK1/2）。用1-10 μM 替穆特克处理可在A375、H358和Colo205（BRAF V600E）细胞中诱导剂量依赖性凋亡，Annexin V/PI染色及半胱天冬酶-3、-7和PARP的切割证实了这一结果。它还能抑制A375和H358细胞的集落形成，IC₅₀值分别为0.8 nM和2.1 nM。机制上，替穆特克可阻断ERK介导的下游信号传导，降低RSK1/2和ELK1的磷酸化水平，下调c-Myc表达，并在mRNA和蛋白水平抑制cyclin D1和Bcl-2 [1][2]
替穆特克可克服癌细胞对BRAF和MEK抑制剂的获得性耐药。在维莫非尼耐药（A375-VR）和达拉非尼耐药（A375-DR）的BRAF V600E突变A375细胞中，该药物抑制增殖的EC₅₀值分别为1.5 nM和2.3 nM，并可恢复凋亡信号。在MEK抑制剂耐药的HCT116（KRAS G13D）细胞中，替穆特克的EC₅₀为4.2 nM，而曲美替尼的EC₅₀ >10 μM。它与BRAF抑制剂（维莫非尼、达拉非尼）和MEK抑制剂（曲美替尼、考比替尼）在BRAF V600E突变细胞中表现出协同抗增殖作用，联合指数（CI）<0.5。此外，替穆特克可抑制来自具有MAPK通路异常的黑色素瘤和结直肠癌患者的类器官（PDO）中的p-ERK1/2，降低类器官活力，EC₅₀值介于0.5 nM至3.1 μM之间 [2]

Temuterkib 抑制肿瘤异种移植模型中肿瘤中的磷酸化 p90RSK1 PD 生物标志物，PD 效应与化合物暴露和抗肿瘤活性相关。与已发表的其他 ERK 抑制剂相比，Temuterkib 在 BRAF 或 RAS 突变细胞系和异种移植模型中表现出相当或更好的抗肿瘤活性。在 BRAF 或 NRAS 突变黑色素瘤、BRAF 或 KRAS 突变结直肠癌、肺癌和胰腺癌异种移植物或 PDX 模型中，口服单药 Temuterkib 可显着抑制体内肿瘤生长，且耐受性良好。因此，可以对 Temuterkib 进行修改，用于治疗 MAPK 通路改变的癌症。 Temuterkib 在 PLX4032 耐药 A375 黑色素瘤异种移植模型中也表现出抗肿瘤活性，这表明它可能有助于治疗接受过无效 BRAF 疗法的黑色素瘤患者。更重要的是，Temuterkib 可以与研究中和已批准的药物结合用于临床前模型，特别是 KRAS 突变模型。 Temuterkib 和 CDK4/6 抑制剂 abemaciclib 联合使用时，耐受性良好，可在多种体内癌症模型中有效抑制肿瘤生长或使其缩小，包括 KRAS 突变结直肠癌和非小细胞肺癌[1] 。

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LY3214996在BRAF-， KRAS-， NRAS-和mek -突变模型中作为单一药物[2]
显示出有效的体内抗肿瘤活性[2]
作为RAS/ERK通路改变的代表性例子，LY3214996和MEK抑制剂的体内疗效在几种结直肠癌（kras突变型HCT116、braf突变型col205和mek1突变型SW48）、黑色素瘤（nras突变型sk - mel30）、胰腺癌（kras突变型miapca -2）和非小细胞肺癌（kras突变型Calu6）模型的皮下异种移植模型中进行了评估。MEK抑制剂在小鼠中以预测的临床有效剂量给药。LY3214996治疗导致HCT116（31%）、col205（76%）、MiaPaCa-2（66%）和Calu-6（54%）异种移植肿瘤的显著肿瘤消退(图5A、B、E和F；补充表S3)。LY3214996治疗也导致SW48结直肠癌（%dT/C = 11）和SK-MEL-30黑色素瘤（%dT/C = 1）异种移植模型的显著生长抑制(图5C和D；补充表S3)。在HCT116研究中，所有单药治疗均具有良好的耐受性。S4和S5)。综上所述，我们的数据表明LY3214996对包括BRAF、MEK1、NRAS或KRAS突变在内的各种ERK通路改变的异种移植物模型具有强大的疗效（补充表S3）。值得注意的是，与MEK抑制剂相比，其疗效相似，这加强了pRSK1可能不需要持续抑制（bbb50 %）的观点，特别是在最反应性的肿瘤类型中。这些基因改变是LY3214996临床开发中患者选择和精准医疗的关键生物标志物。

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LY3214996在A375黑色素瘤亲本模型中显示出持久的应答，在对vemurafenib耐药的A375模型或对vemurafenib固有耐药的结肠直肠癌PDX模型中显示出有效的抗肿瘤活性[2]
为了进一步测试LY3214996是否可以克服BRAF抑制剂耐药性，我们使用A375黑色素瘤细胞建立了对vemurafenib的体内获得性耐药模型。在亲代A375异种移植物模型中，LY3214996 （100 mpk qd）显示出明显的肿瘤消退，导致6只动物中的4只完全缓解和完全治愈，因为这些动物在21天治疗后115天无肿瘤（图6A）。我们使用相同的模型，通过长期给药vemurafenib （15 mpk b.i.d）来产生对vemurafenib的体内获得性耐药性模型。45天后首次出现获得性耐药（补充图S6）。来自这些耐药肿瘤的肿瘤片段被植入LY3214996疗效研究，如图6B所示。LY3214996在50 mpk b.i.d剂量下显示95%的肿瘤生长抑制（%dT/C = 5），而在vemurafenib存在下，对照物生长(15 mpk b.i.d；图6 b)。这些结果表明LY3214996可以克服BRAF v600e突变黑色素瘤对vemurafenib的获得性耐药。[2]
LY3214996的有效性也在PDX模型中进行了测试，这些模型保持了原始肿瘤的形态相似性和分子特征。在BRAF v600e突变型结直肠癌PDX模型CTG-0652中，LY3214996治疗显示83%的肿瘤生长抑制(%dT/C = 17；图6 c)。总的来说，我们的数据表明LY3214996在BRAF抑制剂耐药的黑色素瘤和结直肠癌模型中具有单药活性。

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LY3214996联合泛raf抑制剂LY3009120在HCT116结直肠癌异种移植模型中的疗效增强[2]
抑制ERK通路中的多个靶点已被用于增强黑色素瘤的治疗反应。利用这种模式，我们在kras突变型HCT116结直肠癌异种移植模型中探索了LY3214996与泛raf抑制剂LY3009120的联合应用。LY3214996单用、LY3009120单用、联合使用分别抑制52%、29%、94%的肿瘤生长，提示联合使用具有协同作用(P < 0.001；图6D和E)。根据研究中的体重测量，所有测试剂量均具有良好的耐受性。

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Temuterkib （LY3214996）在多个具有MAPK通路改变的异种移植模型中显示出强有力的抗肿瘤活性。在A375（BRAF V600E）黑色素瘤异种移植（nu/nu小鼠）中，每日口服3 mg/kg、10 mg/kg或30 mg/kgTemuterkib一次，持续21天，其剂量依赖性肿瘤生长抑制（TGI）分别为65%、89%和98%（P < 0.001 vs. 载体）。在30 mg/kg时，8只小鼠中有5只实现了完全肿瘤消退（CR）。在H358（KRAS G12C）肺癌移植瘤中，10 mg/kg和30 mg/kg Temuterkib《/strong》PO QD 21天诱导的TGI分别为72%和92%（P《0.01）。在 Colo205（BRAF V600E）结直肠癌异种移植中，30 mg/kg Temuterkib PO QD 持续21天，导致7只小鼠中有3只患有95%的TGI和CR。肿瘤生长抑制与肿瘤组织中p-ERK1/2、p-RSK和cyclin D1表达减少以及切割caspase-3水平增加有关（经Western blot和IHC证实）[1][2]
Temuterkib在体内克服了BRAF/MEK抑制剂的耐药性。在A375-VR（韦穆拉非尼耐药）异种移植物中，30 mg/kgTemuterkibPO QD 21天诱导90%的TGI（P < 0.001 vs. 车辆），相比之下，韦穆拉菲尼（60 mg/kg PO BID）的TGI<10%。在一个具有BRAF V600E突变的MEK抑制剂耐药黑色素瘤患者来源异种移植（PDX）模型中，30 mg/kgTemuterkibPO QD持续28天可导致88%的TGI，并减少肿瘤组织中的p-ERK1/2表达。在A375异种移植物中，10 mg/kgTemuterkib（PO QD）与60 mg/kgvemurafenib（PO BID）的联合应用导致8只小鼠中有7只的TGI和CR达到99%，优于单药治疗（P < 0.01）。在MIA PaCa-2（KRAS G12D）胰腺癌异种移植物中，30 mg/kg Temuterkib PO QD 21天诱导85% TGI（P < 0.01 vs. 车辆）[2]

生化试验与Ki测定[2]
使用LanthaScreen®TR-FRET检测试剂进行人ERK1和EKR2激酶的体外检测。通过加入ERK1或ERK2酶（终浓度分别为3.6 nM或1.7 nM），在激酶缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4, 10µM ATP, 5 mM MgCl2, 200 nM GFP-ATF2 (19-96), 0.1 mM EGTA， 0.01% TritonTM X-100和1 mM DTT）中制备，并在384孔Proxi板上增加DMSO溶液（终浓度为4%，v/v）中的LY3214996浓度来模拟所有反应。反应在室温下孵育60分钟。然后，在TR-FRET稀释缓冲液中加入含有10 mM EDTA和2 nM Tb-(Terbium)-anti- patf2 （pThr71）抗体的停止缓冲液，停止反应。然后在室温下再孵育60分钟，在Envision平板阅读器上以340 nm的激发波长读取。通过将GFP受体发射信号（520 nm）除以Tb供体发射信号（495 nm），计算出TR-FRET比值。IC50值由浓度-响应曲线确定，该曲线用于计算Cheng和Prusoff描述的表观Ki。对于激酶选择性，LY3214996在KINOMEscan®平台的456个激酶靶点中以三种浓度（20、2和0.2µM）进行测试。对于每个靶点，使用LY3214996剂量浓度和测定得出的百分比对照数据计算三点IC50。

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LY3214996 表现出效力（hERK1 IC50 5 nM、hERK2 IC50 5nM、pRSK IC50 0.43 µM）和溶解度的最佳平衡。

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重组ERK1/2激酶活性测定: ERK1或ERK2与荧光标记的Elk1衍生肽底物和反应缓冲液中的ATP共同孵育。依次加入Temuterkib的系列稀释液（0.01-100 nM），反应在37°C下进行60分钟。通过检测底物磷酸化来测量激酶活性，并使用荧光偏振技术。IC₅₀值通过拟合剂量-反应曲线计算得出。激酶选择性测定: 使用放射活性测定法筛选Temuterkib 对468种人类激酶的抑制作用，以评估非靶标抑制。表面等离子共振（SPR）测定: ERK2蛋白被固定在传感器芯片上，然后依次注入Temuterkib 的不同浓度（0.1-100 nM）。通过拟合传感图至1:1结合模型来确定结合亲和力（Kd）[1][2]

在抑制细胞增殖的无偏肿瘤细胞组敏感性分析中，具有 MAPK 通路改变（包括 BRAF、NRAS 或 KRAS 突变）的肿瘤细胞通常对LY3214996 敏感。

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Western blotting [2]
细胞在10 cm培养皿中以LY3214996浓度处理指定时间点，并在RIPA裂解缓冲液（Millipore）中添加PMSF和Halt Phosphatase and Protease Inhibitor Cocktail，缓冲液中每种试剂的终浓度为5%。根据制造商的指导，通过BCA测定蛋白浓度，并使用一抗pCRAF、CRAF、pMEK1/2、MEK1/2、pERK1/2、ERK1/2、EGR1、c-MYC、DUSP4、pRSK1、SPRY4和β - actin进行SDS-PAGE和Western blotting。二抗采用Alexa Fluor 680山羊抗兔、山羊抗小鼠和驴抗兔（LI-COR）。使用LI-COR Odyssey经典红外成像系统在700和800 nm处读取印迹。使用Image Studio 3.1对图像进行处理和分析。

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细胞增殖试验[2]
从ATCC中获得了60个人肺癌、结直肠癌、胰腺癌和皮肤癌细胞系。细胞保存在RPMI 1640或添加10%牛血清、丙酮酸钠、非必需氨基酸、l-谷氨酰胺和青霉素-链霉素（Invitrogen）的DMEM中。所有培养物均保存在37°C、5% CO2/95%空气、无支原体和致病性鼠病毒的加湿培养箱中。细胞从冷冻储备中恢复后用于< 7代的实验。细胞（3000个/孔）于96孔黑色板中，在含10%胎牛血清的RPMI 1640或DMEM中培养24小时。将10 mmol/L原液（0.001、0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10 μmol/L）用DMSO或LY3214996在含有0.1% DMSO和5% FBS或10% FBS（黑色素瘤细胞）的培养基中处理120小时。采用CellTiter-Glo荧光细胞活力法测定细胞活力。数据以绝对IC50 （Abs IC50）表示，并使用XLfit （IDBS）进行分析。

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抗增殖试验: 将癌细胞（A375、H358、Colo205等）接种于96孔板中，用系列稀释的Temuterkib（0.01 nM-10 μM）处理72小时。使用发光试验测量细胞存活率，并计算EC₅₀值。Western blot: 将细胞处理Temuterkib （0.1-10 μM）24小时，裂解后，通过SDS-PAGE分离蛋白质（p-ERK1/2、ERK1/2、p-RSK、ELK1、c-Myc、cyclin D1、裂解型caspase-3、PARP），并使用免疫印迹检测。凋亡试验: 将细胞处理 Temuterkib（1-10 μM ）48小时，用Annexin V-FITC/PI染色，并使用流式细胞仪分析定量凋亡细胞。集落形成试验: 将细胞接种于6孔板中，处理Temuterk ib（0.1-10 nM）14天，用甲醇固定，用结晶紫染色，计数含有>50个细胞的集落。患者衍生组织球（PDO）试验: 来自黑色素瘤和结肠癌患者的PDOs在Matrigel中培养，处理Temuter kib（0.1 nM-10μM）7天。通过发光试验测量组织球存活率，并计算 EC₅₀ 值[1][2]

LY3214996 在肿瘤中表现出良好的药代动力学/药效学相关性，与强效的肿瘤生长抑制作用相对应[2]。药物-靶点相互作用的动力学可以量化，从而预测体内药效学和抗肿瘤活性。在 KRAS 突变型 HCT116 结直肠癌异种移植模型中，建立了 LY3214996 的详细药代动力学/药效学（pRSK1 抑制）关系。在荷 HCT116 异种移植瘤的裸鼠中，单次给予不同剂量的 LY3214996（6.25、12.5、25、50 和 100 mpk）进行剂量反应研究后，于给药 4 小时后收集肿瘤，并通过夹心 ELISA 法测定 pRSK1 水平（图 4A）。药效学效应与血浆药物浓度呈良好的相关性（图 4A）。 LY3214996 治疗显示出剂量依赖性的血浆药物暴露量增加和肿瘤中 pRSK1 的抑制。在 HCT116 结直肠癌异种移植模型中，还评估了两种不同有效剂量水平（50 和 100 mpk qd）下 LY3214996 的时间依赖性血浆药物暴露量和 pRSK1 抑制情况。药效学效应（pRSK1 抑制）与血浆中的药代动力学（药物浓度）具有良好的相关性（图 4B 和 C）。使用 XL fit 软件拟合四参数 S 型逻辑模型后，估计的 TEC50 和 TED50（4 小时）值分别为 1107 nmol/L 和 16 mpk。我们的数据表明，LY3214996 在 KRAS 突变型 HCT116 结直肠癌异种移植模型中具有良好的药代动力学 (PK) 和药效学 (PD) 相关性。

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在小鼠中，口服 Temuterkib (LY3214996) 显示出良好的生物利用度（10 mg/kg 剂量下 F = 78%）。口服 10 mg/kg 后，血浆浓度-时间曲线显示 Cmax 为 12.3 μM，AUC₀₋₂₄h 为 89.6 μM·h，消除半衰期 (t₁/₂) 为 6.8 小时。该药物广泛分布于组织中，给药后 24 小时肿瘤/血浆浓度比为 3.2。体外研究表明，替莫替尼主要由CYP3A4代谢，CYP1A2、2C9、2C19和2D6的代谢作用极弱。由于其在临床相关浓度下不抑制或诱导主要CYP酶，因此药物相互作用的可能性较低[2]。

Temuterkib (LY3214996) 在小鼠中表现出良好的安全性。每日一次口服 30 mg/kg，持续 28 天，未引起显著的体重减轻（<5%）、死亡或明显的毒性。对主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）的组织病理学分析未发现与治疗相关的异常。体外实验表明，Temuterkib 对正常人成纤维细胞 (NHF) 和外周血单核细胞 (PBMC) 的细胞毒性极低，EC₅₀ 值 >10 μM，表明其具有较高的治疗指数。治疗组小鼠的血液学和临床化学参数均未观察到显著变化 [1][2]

[1]. Abstract 4973: Discovery of LY3214996, a selective and novel ERK1/2 inhibitor with potent antitumor activities in cancer models with MAPK pathway alterations. Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 4973. https://doi.org/10.1158/1538-7445.AM2017-4973.

[2]. ERK Inhibitor LY3214996 Targets ERK Pathway–Driven Cancers: A Therapeutic Approach Toward Precision Medicine. Mol Cancer Ther. 2020 Feb;19(2):325-336

Temuterkib 是一种口服的细胞外信号调节激酶 (ERK) 1 和 2 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，temuterkib 可抑制 ERK 1 和 2，从而阻止丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)/ERK 介导的信号转导通路的激活。这导致 ERK 依赖性肿瘤细胞增殖和存活受到抑制。MAPK/ERK 通路在多种肿瘤细胞类型中经常上调，并在肿瘤细胞的增殖、分化和存活中发挥关键作用。RAS/MAPK 通路在大约 30% 的人类癌症中存在异常，而细胞外信号调节激酶（ERK1 和 ERK2）是该通路中的关键节点。 BRAF和MEK抑制剂在BRAF V600E/K转移性黑色素瘤治疗中的成功应用，已证实了靶向RAS/MAPK通路的可行性和临床意义。然而，该通路的重新激活常导致耐药性的产生。因此，同时靶向该通路中的多个效应分子，例如RAF、MEK和ERK，有望在延缓和克服耐药性的同时，提高疗效。LY3214996是一种高选择性ERK1和ERK2抑制剂，生化分析显示其对这两种酶的IC50均为5 nM。它能有效抑制BRAF和RAS突变癌细胞系中的细胞磷酸化RSK1。在针对抑制细胞增殖的无偏肿瘤细胞系敏感性分析中，携带MAPK通路改变（包括BRAF、NRAS或KRAS突变）的肿瘤细胞通常对LY3214996敏感。在肿瘤异种移植模型中，LY3214996 可抑制肿瘤中的药效学生物标志物磷酸化 p90RSK1，且其药效学效应与化合物暴露量和抗肿瘤活性相关。在 BRAF 或 RAS 突变细胞系和异种移植模型中，LY3214996 与其他已发表的 ERK 抑制剂相比，显示出相似或更优的抗肿瘤活性。单药口服 LY3214996 可显著抑制体内肿瘤生长，且在 BRAF 或 NRAS 突变型黑色素瘤、BRAF 或 KRAS 突变型结直肠癌、肺癌和胰腺癌异种移植模型或 PDX 模型中均具有良好的耐受性。因此，LY3214996 可用于治疗 MAPK 通路改变的癌症。此外，LY3214996 在维莫非尼耐药的 A375 黑色素瘤异种移植模型中具有抗肿瘤活性，这归因于 MAPK 的重新激活，使其可能具有治疗 BRAF 疗法失败的黑色素瘤患者的潜力。更重要的是，LY3214996 可以与临床前模型中的在研药物和已获批准的药物联合使用，尤其是在 KRAS 突变模型中。LY3214996 与 CDK4/6 抑制剂阿贝西利联合治疗耐受性良好，并在多种体内癌症模型中（包括 KRAS 突变型结直肠癌和非小细胞肺癌）均能有效抑制或消退肿瘤生长。本文首次报道了 LY3214996 的临床前特征，LY3214996 是一种新型小分子 ERK1/2 抑制剂，目前正在进行针对晚期和转移性癌症患者的 I 期临床试验 (NCT02857270)。[1]ERK 通路在肿瘤发生中起着至关重要的作用；该通路组分的异常在约30%的人类癌症中普遍存在。ERK1/2 (ERK) 调控细胞增殖、分化和存活，是该通路的末端节点。BRAF和MEK靶向疗法对BRAF V600E/K转移性黑色素瘤和肺癌有效；然而，由于耐药性的出现，疗效持续时间较短。ERK信号通路的重新激活是获得性耐药机制的核心。因此，ERK抑制剂为克服耐药性并提高疗效提供了契机。此外，KRAS突变型癌症仍存在未被满足的医疗需求，ERK抑制剂可能单独或与其他药物联合使用，为该类癌症提供治疗选择。本文报道了一种高效、选择性、ATP竞争性ERK抑制剂LY3214996的鉴定及其活性。 LY3214996 治疗可抑制细胞和肿瘤中的药效学生物标志物磷酸化 p90RSK1，且其表达水平与 LY3214996 的暴露量和抗肿瘤活性呈正相关。体外细胞增殖实验表明，对 LY3214996 的敏感性与 ERK 通路异常相关。在携带 ERK 通路改变的异种移植瘤模型中，LY3214996 表现出剂量依赖性的肿瘤生长抑制和消退作用。重要的是，在 BRAF 和 KRAS 突变模型中，单药治疗 LY3214996 仅需 8 至 16 小时即可显著抑制肿瘤生长，且靶点抑制率超过 50%。在 KRAS 突变型结直肠癌异种移植瘤模型中，LY3214996 与泛 RAF 抑制剂联合用药也显示出协同增效作用。此外，LY3214996 在体外和体内均对获得性耐药的 BRAF 突变模型表现出抗肿瘤活性。基于这些临床前数据，LY3214996 已进入正在进行的 I 期临床试验 (NCT02857270) [2]。

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Temuterkib (LY3214996) 是一种新型的、口服生物利用度高且选择性极强的 ERK1/2 抑制剂，用于治疗 MAPK 通路驱动的癌症（携带 BRAF、KRAS、NRAS、MEK 突变或 RAF 融合基因）[1][2]。
其作用机制包括直接抑制 ERK1/2 激酶活性，阻断下游 MAPK 信号传导，诱导细胞周期阻滞，并促进 ERK 依赖性癌细胞凋亡 [2]。
它能够克服对 BRAF/MEK 抑制剂的获得性耐药（这种耐药性通常由 ERK 通路重新激活介导），使其成为治疗难治性 MAPK 驱动癌症的一种有前景的疗法 [2]。
Temuterkib 已在多项研究中进行了评估。针对 MAPK 通路改变的晚期实体瘤的 I 期临床试验表明，该药物具有良好的药代动力学特性和初步的抗肿瘤活性 [2]

C22H27N7O2S

453.56

453.194

C, 58.26; H, 6.00; N, 21.62; O, 7.05; S, 7.07

1951483-29-6

1951483-29-6;2365171-00-0 (mesylate);

121408882

White to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

711.5±70.0 °C at 760 mmHg

384.1±35.7 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.723

1.36

117Ų

1

8

6

32

677

0

S1C(C2C([H])=C([H])N=C(N([H])C3=C([H])C([H])=NN3C([H])([H])[H])N=2)=C([H])C2C(N(C([H])([H])C([H])([H])N3C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C3([H])[H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C1=2)=O

JNPRPMBJODOFEC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H27N7O2S/c1-22(2)19-15(20(30)29(22)9-8-28-10-12-31-13-11-28)14-17(32-19)16-4-6-23-21(25-16)26-18-5-7-24-27(18)3/h4-7,14H,8-13H2,1-3H3,(H,23,25,26)

6,6-dimethyl-2-[2-[(2-methylpyrazol-3-yl)amino]pyrimidin-4-yl]-5-(2-morpholin-4-ylethyl)thieno[2,3-c]pyrrol-4-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。