LysoTracker Yellow HCK 123

目录号: V42289 纯度: ≥98%
LysoTracker Yellow hck123 是一种高效的黄色膜渗透/穿透荧光探针。
LysoTracker Yellow HCK 123 CAS号: 1064123-31-4
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
LysoTracker Yellow hck123 是一种高效的黄色膜渗透性荧光探针。LysoTracker Yellow hck123 是一种弱碱性胺,可选择性地在管腔内 pH 值较低的细胞区室中积累。(λex=465 nm, λem=535 nm)
LysoTracker Yellow HCK 123(CAS号:1064123-31-4)是一种高效、可渗透细胞的黄色荧光探针(弱碱性胺),由于其pH依赖性的质子化和滞留作用,能够选择性地聚集在酸性细胞区室(例如溶酶体)中。它广泛用于活细胞成像和高内涵筛选应用中溶酶体的标记和追踪。
生物活性&实验参考方法
靶点
The probe targets acidic cellular compartments (specifically lysosomes). Its mechanism of action is based on a physicochemical property rather than a biological receptor. The weak base moiety becomes protonated within the acidic lysosomal environment (pH ~4.5-5.0), which prevents it from diffusing back across the membrane, leading to selective accumulation of the fluorescent dye. LysoTracker probes are not fixable, so they must be used on live cells.
体外研究 (In Vitro)
建议(以下是我们建议的实验方案,仅供参考,请根据您的具体情况进行调整)。定量 GAPDH LysoTracker Yellow HCK 123 检测 [1]:1. 使用 8 孔细胞培养板培养 EMT6 细胞。采用标准方法进行细胞培养。2. 向每个孔中加入 TONS504,使其最终浓度达到 30 µg/mL。将细胞在 37 °C 下孵育 4 小时。3. 向每个孔中加入 LysoTracker Yellow HCK 123,直至最终浓度达到 50 μM。4. 将细胞在 37°C、5% CO2 条件下孵育 30 分钟。使用共聚焦激光扫描显微镜观察样品。
作为一种成像荧光探针,它并不像药物那样具有药理活性。它的“活性”在于其在激发光(Ex=465 nm)照射下发出荧光并聚集在溶酶体中的能力。荧光强度与细胞器的酸度成正比,使其成为研究溶酶体pH动态、自噬通量以及其他涉及酸性囊泡的细胞过程的有效工具。
体内研究 (In Vivo)
LysoTracker是一种体外诊断成像探针,并非用于药物的体内“活性”评估。因此,它不像治疗药物那样具有体内疗效数据。它用于临床前体外试验,以研究溶酶体生物学,并可用作动物组织来源细胞中自噬或内吞作用的标志物。
酶活实验
这是一种用于细胞染色的荧光染料;它不是酶抑制剂,也不用于无细胞酶结合实验。因此,它不适用于无细胞应用。其选择性基于细胞的完整生理状态,而非纯化的蛋白质。
细胞实验
LysoTracker Yellow HCK 123 的标准操作流程如下:1. 配制 1 mM 的 DMSO 储备液。2. 将储备液用温热的无血清细胞培养基稀释至工作浓度(通常为 50-75 nM)。3. 对于活细胞,吸出培养基,加入预热的含 LysoTracker 的培养基。4. 将细胞置于 37℃、CO2 培养箱中孵育 30-120 分钟。5. 用预热的 PBS 或培养基轻轻洗涤细胞 2-3 次。6. 立即使用荧光显微镜或共聚焦显微镜,并配备黄色荧光滤光片组(激发/发射波长约为 465/535 nm)对活细胞进行成像。
动物实验
LysoTracker Yellow HCK 123 是一种专用于体外活细胞成像的探针。典型的溶酶体追踪细胞实验步骤如下:1. 将细胞(例如 HeLa、EMT6)接种于 8 孔培养皿或 96 孔成像板中,使其贴壁。2. 根据实验设计进行细胞处理(例如药物刺激、饥饿处理)。3. 在 37℃ 避光条件下,用 LysoTracker (50-75 nM) 对活细胞进行染色 30-120 分钟。4. (可选)用 Hoechst 33342 对细胞核进行复染。5. 洗涤并更换新鲜培养基,然后立即进行成像。该探针不能用于固定/透化的细胞。
药代性质 (ADME/PK)
由于背景信号和代谢率较高,LysoTracker Yellow HCK 123 不适用于体内动物实验。虽然一些类似的探针可用于活体成像,但该产品通常用于体外实验。体内实验需要进行尾静脉注射,然后进行全身荧光成像,但由于清除迅速和非特异性蓄积,其应用受到限制。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
不适用。这是一种显像染料,而非全身用药。由于它直接用于培养细胞进行即时显像,因此药代动力学特性无关紧要。其特性由光谱特征(激发波长λex=465 nm,发射波长λem=535 nm)、细胞渗透性和溶酶体滞留决定。
参考文献

[1]. New tools for labeling silica in living diatoms. New Phytol. 2008;177(3):822-829.

[2]. In vitro investigation of hyaluronan-based polymeric micelles for drug delivery into the skin: the internalization pathway. Eur J Pharm Sci2020 Feb 15:143:105168.

其他信息
HCK-123染料是一种苯并恶二唑化合物,可用作荧光染料。
不适用(标准工作浓度下无毒荧光染料)。该化合物是一种弱碱性胺,在推荐的纳摩尔浓度下通常被认为对细胞无毒。其作用机制依赖于进入亚细胞区室,而非诱导细胞毒性,因此常用于短期活细胞成像实验。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H24N6O4
分子量
364.4
精确质量
364.185
CAS号
1064123-31-4
PubChem CID
25195435
外观&性状
Yellow to orange solid powder
LogP
1.3
tPSA
129
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
26
分子复杂度/Complexity
459
定义原子立体中心数目
0
SMILES
N(C1=CC=C(N(=O)=O)C2=NON=C12)CCCCCC(=O)NCCN(C)C
InChi Key
WIOHDRVBBRICQL-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H24N6O4/c1-21(2)11-10-18-14(23)6-4-3-5-9-17-12-7-8-13(22(24)25)16-15(12)19-26-20-16/h7-8,17H,3-6,9-11H2,1-2H3,(H,18,23)
化学名
N-[2-(dimethylamino)ethyl]-6-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]hexanamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~62.5 mg/mL (~171.51 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7442 mL 13.7212 mL 27.4424 mL
5 mM 0.5488 mL 2.7442 mL 5.4885 mL
10 mM 0.2744 mL 1.3721 mL 2.7442 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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