M344 (D237; MS344)   中文名称: 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(M 344)

HDAC ( IC50 = 100 nM )
The primary target of M344 (D237; MS344) is histone deacetylases (HDACs), with preferential activity against class I HDACs and moderate activity against class IIb HDAC6. In recombinant HDAC enzyme assays: - HDAC1: IC50 = 40 nM [1]
- HDAC2: IC50 = 50 nM [1]
- HDAC3: IC50 = 60 nM [1]
- HDAC6: IC50 = 80 nM [1]
It exhibits weak or no inhibitory activity against class IIa HDACs (HDAC4, HDAC5, HDAC7) and class III HDACs (sirtuins), with IC50 > 1000 nM for all these isoforms [1]

体外活性：在 MEL DS19 细胞中，M344 对细胞增殖的影响比对细胞分化的影响更显着。 M344 在浓度高于 10 μM 时具有毒性，而最多仅 20% 的存活细胞群被诱导分化。在体外，M344 对子宫内膜癌细胞系 Ishikawa 和卵巢癌细胞系 SK-OV-3 显示出显着的抗增殖活性，EC50 分别为 2.3 μM 和 5.1 μM。而正常人子宫内膜上皮细胞对M344几乎不敏感。此外，M344还导致细胞周期S期比例减少，G0/G1期比例增加，诱导细胞凋亡，降低线粒体跨膜电位。 M344 有效抑制胚胎神经系统肿瘤细胞的增殖，包括髓母细胞瘤细胞 (D341 Med, Daoy) 和神经母细胞瘤细胞 (CH-LA 90,SHSY-5Y )，GI50 分别为 0.65 μM、0.63 μM、0.63 μM 和 0.67 μM。激酶测定：放射性标记的鸡核心组蛋白用作酶底物。该酶从底物中释放出氚化乙酸，通过闪烁计数对其进行定量。 IC50值是三次测定的结果。将 50 μL 玉米酶（30 °C）与 10 μL 总 [3H]乙酸盐预标记鸡网织红细胞组蛋白 (1 mg/mL) 一起孵育（30 分钟）。通过添加 36 μL 1 M HCl/0.4 M 乙酸盐和 800 μL 乙酸乙酯来终止反应。离心（10000g，5 分钟）后，对 600 μL 上相的等分试样在 3 mL 液体闪烁混合物中进行放射性计数。 M344 以 40 μM 的起始浓度进行测试，活性物质进一步稀释。细胞测定：MEL DS19 细胞（鼠红白血病细胞）在含有 100 单位/mL 青霉素 G 钠和 100 μg/mL 硫酸链霉素并补充有 10% 胎牛血清的 D-MEM 中于 37 °C、5% CO2 气氛下维持。为了测试 M344 诱导细胞分化的潜力，使用群体倍增时间为 11−13 小时的对数期细胞。使用 1 mL D-MEM/孔在 24 孔板中制备 M344 的系列稀释液。如果 M344 溶解在 DMSO 中，对照孔中含有相同量的溶剂（通常为 2 μL/mL 培养基）。随后，将细胞悬浮液添加至孔中。 72小时后对实验进行评估。使用 Casy 1 TTC 流式细胞仪对细胞数进行计数。处理细胞的增殖表示为与溶剂对照相比的增殖百分比。分化的 MEL 细胞积累血红蛋白。因此，根据文献，通过联苯胺染色来确定细胞分化的诱导。向 100 μL 细胞悬液中加入 10 μL 0.4% 联苯胺在含有 2% H2O2 的 12% 乙酸中的溶液。 5 分钟内，含有血红蛋白的细胞就会染成蓝色。在血细胞计数器中在显微镜下对联苯胺阳性和阴性细胞进行计数，并计算阳性细胞的百分比。 M344 首先在 10 μM 和 50 μM 终浓度下进行测试。根据活性/毒性特征，选择一系列浓度进行剂量反应分析。

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1. 妇科癌细胞的抗增殖活性： - 人卵巢癌细胞系（SKOV3、OVCAR3）经M344 (D237; MS344)（0.01 μM-10 μM）处理72小时。MTT实验显示药物呈剂量依赖性抑制细胞增殖，IC50值分别为0.3 μM（SKOV3）和0.4 μM（OVCAR3）。蛋白质印迹分析显示，0.3 μM M344处理SKOV3细胞24小时后，乙酰化组蛋白H3（Lys9/14）较未处理对照组增加3.0倍，乙酰化组蛋白H4（Lys5/8/12/16）增加2.8倍[2]
2. 结直肠癌细胞（CRC）的抗增殖与凋亡活性： - 人结直肠癌细胞系（HCT116、SW480）经M344 (D237; MS344)（0.05 μM-5 μM）处理72小时。CCK-8实验显示IC50值分别为0.25 μM（HCT116）和0.3 μM（SW480）。膜联蛋白V-FITC/PI染色（流式细胞术）显示，0.5 μM M344处理HCT116细胞48小时后，凋亡率达35%（对照组为6%）。蛋白质印迹检测到切割型caspase-3增加2.5倍，切割型PARP增加2.2倍[3]
3. 非小细胞肺癌（NSCLC）细胞的抗增殖活性： - 人非小细胞肺癌细胞系A549经M344 (D237; MS344)（0.1 μM-4 μM）处理72小时。MTT实验显示IC50为0.35 μM。0.4 μM M344处理24小时后，抑癌基因p21WAF1/CIP1通过qPCR检测显示上调3.0倍，HDAC6底物乙酰化α-微管蛋白通过蛋白质印迹检测显示增加3.5倍[4]
4. 抑制集落形成： - HCT116细胞以1×10³个细胞/孔的密度接种于6孔板，用M344 (D237; MS344)（0.1 μM、0.2 μM、0.5 μM）处理14天。与对照组相比，集落数量分别减少40%（0.1 μM）、65%（0.2 μM）和85%（0.5 μM）。集落经结晶紫染色后在显微镜下计数[3]

1. 结直肠癌异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雌性裸鼠（6-7周龄）皮下注射5×10⁶个HCT116细胞。当肿瘤体积达~100 mm³时，小鼠随机分为3组（n=6/组）：溶媒组（10% DMSO+40% PEG300+50% PBS）、M344 10 mg/kg组、M344 20 mg/kg组。M344 (D237; MS344)通过腹腔注射给药，每日一次，持续21天。肿瘤生长抑制率分别为35%（10 mg/kg）和65%（20 mg/kg）。第21天肿瘤重量：溶媒组1.2 g、10 mg/kg组0.78 g、20 mg/kg组0.42 g。肿瘤组织免疫组化显示，20 mg/kg组乙酰化组蛋白H3增加3.2倍[3]
2. 非小细胞肺癌异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雄性裸鼠（6-7周龄）接种A549异种移植瘤，分为2组（n=6/组）：溶媒组和M344 (D237; MS344) 30 mg/kg组（口服灌胃，每日一次，持续28天）。肿瘤生长抑制率为55%。生物发光成像（针对表达荧光素酶的A549细胞）显示肿瘤负荷减少60%。肿瘤组织蛋白质印迹显示切割型caspase-3增加2.8倍[4]
3. 卵巢癌异种移植模型的靶点调节： - 携带SKOV3异种移植瘤的雌性裸鼠用15 mg/kg M344 (D237; MS344)（腹腔注射，每日一次，持续14天）处理。实验结束时收集的肿瘤组织通过免疫组化显示，乙酰化组蛋白H4增加2.5倍，增殖标志物Ki-67减少40%[2]

该酶的底物是经过放射性标记的鸡核心组蛋白。酶从底物中释放出乙酸氚，并使用闪烁计数来测量它。三重测定的结果是IC50值。将 10 μL 总[³H]乙酸盐预标记的鸡网织红细胞组蛋白 (1 mg/mL) 与 50 μL 玉米酶在 30 °C 下孵育 30 分钟。添加800μL乙酸乙酯和36μL 1M HCl/0.4M乙酸盐以终止反应。将 600 μL 上相等分试样在 10,000 g 下离心 5 分钟，并在 3 毫升液体闪烁混合物中测量其放射性。在活性成分进一步稀释之前，M344 的初始浓度为 40 μM。

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1. 重组HDAC酶抑制实验： - 将重组人HDAC亚型（HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC6）与荧光底物Boc-Lys(Ac)-AMC在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、137 mM NaCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA）中混合。加入不同浓度（1 nM-10 μM）的M344 (D237; MS344)，混合物在37°C孵育60分钟。加入含胰蛋白酶的显影液切割去乙酰化底物，释放荧光AMC。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。计算相对于溶媒对照组的酶活性百分比，并通过四参数逻辑方程拟合剂量-反应数据确定IC50值。对IIa类HDACs（HDAC4、HDAC5、HDAC7）采用相同实验方案，在浓度高达10 μM时未观察到显著抑制[1]

MEL DS19 细胞，也称为鼠红白血病细胞，在 37 °C 和 5% CO₂。使用群体倍增时间为 11-13 小时的对数期细胞来测试 M344 诱导细胞分化的能力。 M344 系列稀释液在 24 孔板中进行，每孔含有 1 毫升 (mL) D-MEM。如果 M344 溶解在 DMSO 中，则对照孔中存在相同量的溶剂（通常为 2 μL/mL 培养基）。然后用细胞悬液填充孔。七十二小时后对实验进行评估。使用 Casy 1 TTC 流式细胞仪测定细胞计数。使用与溶剂对照相比的处理细胞的增殖百分比来表达增殖。血红蛋白由分化的 MEL 细胞积累。根据文献，联苯胺染色因此决定了细胞分化的诱导。将 10 μL 0.4% 联苯胺的 12% 乙酸溶液和 2% H₂O₂ 添加到 100 μL 细胞悬液中。含有血红蛋白的细胞在五分钟内染成蓝色。通过在显微镜下对血细胞计数器中联苯胺阳性和阴性细胞进行计数来计算阳性细胞的百分比。最初，以 10 μM 和 50 μM 的终浓度检查 M344。对于剂量反应分析，根据活性/毒性特征选择一系列浓度。

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1. 细胞增殖实验（MTT/CCK-8法）： - 卵巢癌细胞（SKOV3、OVCAR3）或非小细胞肺癌细胞（A549）以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，过夜孵育。加入M344 (D237; MS344)（0.01 μM-10 μM），细胞在37°C、5% CO₂环境中培养72小时。MTT实验：向每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后，用100 μL DMSO溶解甲臜晶体，在570 nm处检测吸光度。CCK-8实验：加入10 μL CCK-8试剂，孵育2小时后，在450 nm处检测吸光度。细胞活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100，使用GraphPad Prism软件确定IC50值[2,4]
2. 凋亡实验（膜联蛋白V-FITC/PI染色）： - HCT116细胞以1×10⁶个细胞/孔的密度接种于6孔板，用M344 (D237; MS344)（0.1 μM-0.5 μM）处理48小时。收集细胞，用冷PBS洗涤两次，重悬于100 μL结合缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂）中。向细胞悬液中加入5 μL膜联蛋白V-FITC和10 μL碘化丙啶（PI），在黑暗中室温孵育15分钟。通过流式细胞仪（BD FACSCanto）分析凋亡细胞百分比（膜联蛋白V阳性/PI阴性为早期凋亡，膜联蛋白V阳性/PI阳性为晚期凋亡），使用FlowJo软件处理数据[3]
3. 组蛋白乙酰化及凋亡标志物蛋白质印迹实验： - 细胞（SKOV3、HCT116、A549）用M344 (D237; MS344)（0.2 μM-0.5 μM）处理24小时。收集细胞，用PBS洗涤，在含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解。通过BCA蛋白测定试剂盒确定蛋白质浓度。将等量蛋白质（20-30 μg）通过12% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜。膜用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液在室温下封闭1小时，然后在4°C下与针对乙酰化组蛋白H3、乙酰化组蛋白H4、乙酰化α-微管蛋白、切割型caspase-3、切割型PARP或β-肌动蛋白（内参对照）的一抗孵育过夜。用TBST洗涤后，膜与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗在室温下孵育1小时。使用增强化学发光（ECL）检测系统显影蛋白条带，通过ImageJ软件量化条带强度[2,3,4]
4. 集落形成实验： - HCT116细胞以1×10³个细胞/孔的密度接种于6孔板，过夜贴壁。向每孔加入M344 (D237; MS344)（0.1 μM、0.2 μM、0.5 μM），培养14天，每3天更换一次培养基。培养结束后，用4%多聚甲醛固定细胞15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，用水冲洗去除多余染色。在显微镜下计数包含超过50个细胞的集落，集落形成率=（处理组集落数/对照组集落数）×100[3]

1. HCT116 CRC异种移植模型：- 将6-7周龄的雌性裸鼠饲养于无特定病原体（SPF）条件下。将5×10⁶个HCT116细胞悬浮于0.1 mL PBS中，并与Matrigel按1:1的比例混合，皮下注射至每只小鼠的右侧腹部。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤大小，并使用公式：体积 = (长度 × 宽度²) / 2计算肿瘤体积。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体对照组、M344 (D237; MS344) 10 mg/kg组和M344 (D237; MS344) 20 mg/kg组。将药物溶解于由 10% DMSO、40% PEG300 和 50% PBS 组成的溶剂中，每日腹腔注射一次，连续给药 21 天。每周测量小鼠体重两次，以监测潜在的毒性。治疗结束后，处死小鼠，并收集肿瘤组织进行免疫组织化学和蛋白质印迹分析 [3]
2. A549 非小细胞肺癌异种移植模型：将 5×10⁶ 个 A549 细胞（稳定表达荧光素酶）悬浮于 0.1 mL PBS/Matrigel (1:1) 混合液中，皮下注射至 6-7 周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：溶剂对照组和 M344 (D237; MS344) 30 mg/kg 组。将药物溶解于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) 溶液中，每日一次灌胃给药，持续 28 天。每周测量两次肿瘤体积和体重。每周使用 IVIS Spectrum 系统进行生物发光成像，以评估肿瘤负荷。治疗结束后，处死小鼠，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析 [4]
3. SKOV3 卵巢癌异种移植模型：将 5×10⁶ 个 SKOV3 细胞悬浮于 0.1 mL PBS/Matrigel (1:1) 混合液中，皮下注射至 6-7 周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠分为两组（每组 n=6）：载体组和 M344 (D237; MS344) 15 mg/kg 组。将药物溶解于 10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS 混合溶液中，每日一次腹腔注射，连续给药 14 天。每周测量两次肿瘤体积。研究结束时，取出肿瘤组织，用 10% 福尔马林固定，用于免疫组织化学染色（乙酰化组蛋白 H4 和 Ki-67 染色）[2]

1. 小鼠口服生物利用度：- 将雌性 CD-1 小鼠（20-25 g）分别以 30 mg/kg 的剂量经口灌胃和 10 mg/kg 的剂量静脉注射给予 M344 (D237; MS344)。分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 24 小时采集血样。通过离心（3000×g，10 分钟，4°C）分离血浆，并使用经验证的 LC-MS/MS 方法测定药物浓度。根据口服和静脉给药后血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC₀₋∞) 计算，M344 (D237; MS344) 的口服生物利用度为 25% [1]
2. 小鼠血浆药代动力学参数： - 裸鼠腹腔注射 20 mg/kg M344 (D237; MS344) 后，最大血浆浓度 (Cmax) 为 6.5 μM（给药后 0.5 小时达到），末端半衰期 (t₁/₂) 为 3.5 小时，AUC₀₋∞ 为 22.8 μM·h [3]
- CD-1 小鼠口服 30 mg/kg M344 (D237; MS344) 后，Cmax 为3.2 μM（Tmax = 1 小时），t₁/₂ 为 4.0 小时，AUC₀₋∞ 为 16.5 μM·h [1]
3. 小鼠组织分布：- 小鼠单次腹腔注射 20 mg/kg M344 (D237; MS344)，并在给药后 1 小时（Cmax 时间）处死。收集包括肿瘤（HCT116 异种移植瘤）、肝脏、肾脏、肺、脑和脾脏在内的组织，在 PBS 中匀浆（1:3 w/v），并用乙腈提取。采用 LC-MS/MS 法测定药物浓度。在肝脏（12.0 μM）和肾脏（10.5 μM）中检测到最高浓度，其次是肿瘤（6.0 μM）和肺（5.5 μM）。在脑组织（0.6 μM）和脾脏（4.2 μM）中检测到了较低浓度[3]

1. 小鼠急性毒性：将雌性CD-1小鼠（20-25 g）分为4组（每组n=6），分别腹腔注射单剂量M344（D237；MS344），剂量分别为50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg和200 mg/kg。剂量≤100 mg/kg时未观察到死亡。150 mg/kg剂量组6只小鼠中有1只在48小时内死亡；200 mg/kg剂量组6只小鼠中有2只死亡。接受≥100 mg/kg剂量治疗的小鼠在最初3天内出现短暂的嗜睡和体重减轻（初始体重的5%-8%），并在第7天恢复。剂量≤75 mg/kg时未观察到明显的临床症状（例如腹泻、行为异常）[1]
2. 异种移植研究中的慢性毒性：- 在为期21天的HCT116异种移植研究中（每日腹腔注射10 mg/kg或20 mg/kg的M344 (D237; MS344)），与溶媒对照组相比，治疗组未观察到明显的体重减轻（≤初始体重的5%）。治疗结束时的血液学分析显示，治疗组和对照组的白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白或血小板计数均无显著差异。血清生化分析（ALT、AST、肌酐、血尿素氮）也未显示显著变化，表明没有肝肾毒性的证据[3]
- 在为期28天的A549异种移植研究中（每日口服30 mg/kg M344 (D237; MS344)），体重变化<4%（与对照组相比），主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）的组织病理学检查未发现异常病变[4]
3. 血浆蛋白结合： - 将浓度为1 μM和10 μM的M344 (D237; MS344)加入人血浆中，在37°C下孵育30分钟，然后使用30 kDa截留滤膜进行超滤。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定滤液中游离药物浓度和血浆中总药物浓度。在两种浓度下，M344 (D237; MS344) 的血浆蛋白结合率均大于95% [1]

[1]. J Med Chem . 1999 Nov 4;42(22):4669-79.

[2]. Gynecol Oncol . 2006 Apr;101(1):108-13.

[3]. Int J Cancer . 2007 Apr 15;120(8):1787-94.

[4]. Cancer Cell Int . 2010 Sep 9:10:32.

4-(二甲氨基)-N-[7-(羟基氨基)-7-氧代庚基]苯甲酰胺是一种苯甲酰胺，由4-(二甲氨基)苯甲酸的羧基与7-氨基-N-羟基庚酰胺的氨基缩合而成。它是一种强效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可诱导多种人类癌细胞系发生细胞周期阻滞和凋亡。它具有凋亡诱导剂、抗肿瘤剂和EC 3.5.1.98（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂的双重活性。它属于苯甲酰胺类化合物、异羟肟酸类化合物、仲酰胺类化合物和叔胺类化合物。
一种异羟肟酸和苯胺衍生物，可作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂。它用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤和塞扎里综合征。

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1. 作用机制：M344 (D237; MS344)通过抑制HDACs发挥其抗癌作用，从而导致组蛋白和非组蛋白（例如α-微管蛋白）的乙酰化水平升高。这种表观遗传修饰可放松染色质结构，促进抑癌基因（例如p21WAF1/CIP1）的转录，并抑制癌基因的表达。此外，α-微管蛋白乙酰化增加可稳定微管，抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡[1,3,4]
2. 妇科癌症的临床前相关性：M344 (D237; MS344) 对卵巢癌细胞系 (SKOV3, OVCAR3) 和异种移植瘤显示出良好的活性，可显著抑制肿瘤生长且毒性低。这支持了其作为卵巢癌治疗药物的潜力，卵巢癌是一种由于频繁复发和化疗耐药而存在高度未满足医疗需求的疾病[2]
3. 与其他 HDAC 抑制剂的比较：与泛 HDAC 抑制剂曲古抑菌素 A (TSA) 相比，M344 (D237; MS344) 的半衰期更长（小鼠体内为 3.5 小时 vs. 2.0 小时）且口服生物利用度更高（25% vs. TSA <10%），使其更适合长期治疗方案中的口服给药[1]
4. 潜在的临床应用：基于临床前数据，M344 (D237; MS344) 具有治疗实体瘤（包括结直肠癌、非小细胞肺癌和卵巢癌）的潜力。它能够同时抑制I类HDAC和HDAC6，且毒性较低，因此可作为与其他抗癌药物（例如化疗、靶向治疗）联合治疗的候选药物[2,3,4]

C16H25N3O3

307.39

307.189

251456-60-7

3994

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

161℃

1.558

1.06

81.67

3

4

9

22

340

0

MXWDSZWTBOCWBK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H25N3O3/c1-19(2)14-10-8-13(9-11-14)16(21)17-12-6-4-3-5-7-15(20)18-22/h8-11,22H,3-7,12H2,1-2H3,(H,17,21)(H,18,20)

4-(dimethylamino)-N-[7-(hydroxyamino)-7-oxoheptyl]benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。