MIP-1α-CCR5 (IC50 = 3.3 nM); RANTES-CCR5 (IC50 = 5.2 nM); MIP-1β-CCR5 (IC50 = 7.2 nM); HIV-1 (Ba-L) (IC50 = 1.1 nM (IC50 in PM-1 cells)

maraviroc (UK-427857) 是一种强效选择性 CCR5 拮抗剂，可有效抑制 1 型人类免疫缺陷病毒 (HIV-1)。 Maraviroc 对 MIP-1β、MIP-1α 和 RANTES 的 IC50 范围为 7 至 30 nM，可抑制趋化因子诱导的细胞内钙重新分布后发生的事件。在采用分离多重（合并）的 5 天抗病毒测定中，Maraviroc (UK-427857) 在低纳摩尔剂量下对 HIV-1 Ba-L（一种实验室工程 R5 菌株）具有活性 (IC90) [1]。该测定评估了供体 PBMC 上的 IC90 (3.1 nM)、单一供体 PBMC 上的 IC90 (1.8 nM) 或 PM-1 细胞上的 IC90 (1.1 nM)。

静脉注射后，狗和大鼠的清除率值为中等到高（分别为 74 和 21 mL/min/kg）。在这两个物种中，马拉韦罗同样表现出中等的分布体积（4.3 至 6.5 L/kg）。 Maraviroc 在大鼠中的半衰期为 0.9 小时，在狗中的半衰期为 2.3 小时。狗口服 2 mg/kg，1.5 小时后达到 Cmax (256 ng/mL)。给药后40%的物质可被生物利用。根据对口服给药后门静脉中浓度的研究，大约百分之三十的口服剂量是从大鼠肠道吸收的[1]。 Maraviroc 特异性地减少 DSS/TNBS 结肠炎和转移模型中携带 CCR5 的白细胞的募集，从而减轻肠道炎症的发展[2]。

趋化因子结合CCR5的抑制作用。[1] 125i标记的MIP-1α、MIP-1β和RANTES与CCR5的结合基本上与先前描述的一样，使用稳定表达受体或其膜制剂的完整HEK-293细胞进行测量。简单地说，将细胞重悬在结合缓冲液中(50 mM HEPES，含有1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2和0.5%牛血清白蛋白[BSA]，并调整到pH 7.4)，密度为2 × 106个细胞/ml。对于膜制备，将磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤的细胞在裂解缓冲液(20 mM HEPES, 1 mM CaCl2, 1片COMPLETE / 50 ml, pH 7.4)中重悬，然后在Polytron手持式均质机中均质，超离心(40000 × g, 30分钟)，并在结合缓冲液中重悬至蛋白浓度为0.25 mg/ml(96孔板每孔使用12.5 μg膜蛋白)。制备125i放射性标记的MIP-1α、MIP-1β和RANTES，并在结合缓冲液中稀释至最终浓度为400 pM。向每个孔中加入适当的maraviroc稀释液，使最终体积为100μl，将测定板孵育1小时，通过预封闭和洗涤的Unifilter板过滤内容物，干燥过夜后进行计数。

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可溶性重组HIV-1 gp120 (Ba-L菌株)与CCR5结合的抑制作用[1]
该试验按前面所述进行。简单地说，将HEK-293细胞等分液(100 μl, 1 × 106个细胞/ml)镀于聚d-赖氨酸包被板中，在37℃下孵育过夜。将可溶性重组人CD4 (sCD4)(在培养基中稀释至4.5 nM)和HIV-1 gp120 1:1混合，在室温下孵育15分钟，然后将其加入pbs洗涤的细胞中，稀释maraviroc，以便测定IC50。37℃孵育1 h，洗涤。在每孔中加入Eu3+标记的抗gp120抗体(在测定缓冲液中稀释1/500)(50 μl)，孵育1 h。在加入增强液(200 μl/孔)和测量Eu3+荧光(Victor2多标记计数器;“铕”协议)。在未与sCD4预孵育的情况下，以非特异性结合作为gp120与细胞孵育的荧光测量。

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CCR5信号的抑制:钙通量。[1]
通过使用钙敏感染料荧光测定趋化因子依赖的细胞内钙再分配(通量)，研究了maraviroc依赖性ccr5介导的信号传导抑制，基本与先前报道的一样。简单地说，将ccr5稳定转染的HEK-293细胞在PBS中洗涤，然后在含有fluo-3染料(5 μg/ml;分子探针)。染色细胞用PBS洗涤，用通量缓冲液(10 mM HEPES缓冲液，pH 7.4，含1.6 mM CaCl2和1瓶汉克斯平衡盐粉)重悬至5 × 105个细胞/ml进行检测。将细胞悬液(160 μl)分成等分，放置于黑壁清底96孔板的每孔中，离心(400 × g) 5 min。maraviroc稀释液和化因子溶液分成等分，放置于单独的96孔板中，依次添加到HEK-293细胞中，随后在荧光激光成像板读取器(FLIPR)上测量细胞内钙再分配效应。FLIPR在30 s后加入maraviroc稀释液(20 μl)， 4 min后原位加入RANTES趋化因子(20 μl)至终浓度为20 nM。在8 min内测量荧光(分别为488 nm和530 nm的激发和发射波长)，以研究maraviroc对细胞信号传导的直接影响和maraviroc对趋化因子介导的信号传导的抑制作用。

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抑制CCR5内化。[1]
流式细胞术检测maraviroc对CCR5内化的影响，使用FACSCalibur仪器。300.19个细胞(100 μl, 5 × 106/ml)在37°C下与maraviroc、RANTES或SDF-1α(均为100 nM原位)孵育45分钟，使CCR5内化。样品洗涤2次，用0.5% BSA-PBS (40 μl)重悬，用10 μl 2D7(抗人CCR5小鼠单克隆抗体)或同型对照抗体(小鼠IgG2a)在4℃下孵育45 min。样品经0.5% BSA-PBS洗涤，植红蛋白-山羊抗小鼠二抗(75 μl)在4℃下孵育45 min。样品经1% (vol/vol)甲醛- pbs (1000 μl)洗涤后固定，分别在488 nm和530 nm的激发/发射波长下检测CCR5的表达。以上翻译结果来自有道神经网络翻译（YNMT）· 通用场景

在24孔组织培养板上进行药敏试验。在DMSO和培养基中制备重复的maraviroc 8点稀释系列，使实验中DMSO的最终浓度为0.1% (vol/vol)。将pha刺激的PBMC或PM-1细胞在37℃下感染1 h。细胞随后洗涤一次，每孔加入3.6 × 105 PBMC或2.0 × 105 PM-1细胞。培养皿在37°C的5% CO2 (vol/vol)湿化气氛中孵育5天(实验室适应菌株)或7天(初代分离株)。对照化合物沙奎那韦(一种HIV-1蛋白酶抑制剂)和RANTES被纳入所有检测。

Pharmacokinetic studies with rats and dogs. [1]
Preclinical pharmacokinetic studies were carried out with maravirocfollowing a single intravenous and oral administration to both male Sprague-Dawley rats (1 mg/kg of body weight given intravenously [i.v.] and 10 mg/kg given orally [p.o.]; n = 2) and male beagle dogs (0.5 mg/kg i.v. and 2 mg/kg p.o; n = 4). Plasma samples were taken for up to 24 h postdose, and the concentrations of unchanged maraviroc were determined using a specific high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrum assay.

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In this study, researchers aimed to determine the role of CCR5 in mediating leukocyte trafficking in models of colitis, and evaluate the therapeutic potential of maraviroc, an orally active CCR5 antagonist used in the treatment of CCR5-tropic HIV. Acute and chronic colitis were induced by administration of DSS or TNBS to wild-type and CCR5(-/-) mice or adoptive transfer of splenic naïve CD4(+) T-cells from wild type or CCR5(-/-) mice into RAG-1(-/-). CCR5 gene ablation reduced the mucosal recruitment and activation of CCR5-bearing CD4(+) and CD11b(+) leukocytes, resulting in profound attenuation of signs and symptoms of inflammation in the TNBS and transfer models of colitis. In the DSS/TNBS colitis and in the transfer model, maravirocattenuated development of intestinal inflammation by selectively reducing the recruitment of CCR5 bearing leukocytes. In summary, CCR5 regulates recruitment of blood leukocytes into the colon indicating that targeting CCR5 may offer therapeutic options in IBDs.

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Dissolved in phosphate-buffered saline, sterile-filtered and adjusted to a final concentration of 4 mg/mL (7.8 mM). A 3.4% gel preparation of hydroxyl-ethyl cellulose (HEC) is added to achieve a final concentration of 5 mM maraviroc in 2.2% HEC gel; ~64 μg; A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.

Humanized BALB/c-Rag2 / γc / and BALB/c-Rag1 / γc / (RAG-hu) mice

[1]. Maraviroc (UK-427,857), a potent, orally bioavailable, and selective small-molecule inhibitor of chemokine receptor CCR5 with broad-spectrum anti-human immunodeficiency virus type 1 activity. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Nov;49(11):472.

[2]. Highly specific blockade of CCR5 inhibits leukocyte trafficking and reduces mucosal inflammation in murine colitis. Sci Rep. 2016 Aug 5;6:30802.

[3]. Effect of maraviroc on HIV-disease progression-related biomarkers. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Nov;56(11):5858-64.

[4]. NRSF and CCR5 Established Neuron-glia Communication during Acute and Chronic Stresses. Journal of Drug Metabolism & Toxicology. January 10, 2016.

Maraviroc is a monocarboxylic acid amide obtained by formal condensation of the carboxy group of 4,4-difluorocyclohexanecarboxylic acid and the primary amino group of (1S)-3-[(3-exo)-3-(3-isopropyl-5-methyl-4H-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]oct-8-yl]-1-phenylpropylamine. An antiretroviral drug, it prevents the interaction of HIV-1 gp120 and chemokine receptor 5 (CCR5) necessary for CCR5-tropic HIV-1 to enter cells. It has a role as an antiviral drug, a chemokine receptor 5 antagonist and a HIV fusion inhibitor. It is an azabicycloalkane, an organofluorine compound, a member of triazoles and a monocarboxylic acid amide.
Maraviroc is a CCR5 Co-receptor Antagonist. The mechanism of action of maraviroc is as a Chemokine Co-receptor 5 Antagonist.
A cyclohexane and triazole derivative that acts as an antagonist of the CCR5 RECEPTOR. It prevents infection by HIV-1 virus strains which use CCR5 as a co-receptor for membrane fusion and cellular entry.
See also: Maraviroc (annotation moved to).

C29H41F2N5O

513.67

513.327

C, 67.81; H, 8.05; F, 7.40; N, 13.63; O, 3.11

376348-65-1

Maraviroc-d6;1033699-22-7

3002977

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

79-81ºC

1.628

3.6

63.05

1

6

8

37

751

3

CC1=NN=C(N1C2C[C@H]3CC[C@@H](C2)N3CC[C@@H](C4=CC=CC=C4)NC(=O)C5CCC(CC5)(F)F)C(C)C

GSNHKUDZZFZSJB-HLMSNRGBSA-N

InChI=1S/C29H41F2N5O/c1-19(2)27-34-33-20(3)36(27)25-17-23-9-10-24(18-25)35(23)16-13-26(21-7-5-4-6-8-21)32-28(37)22-11-14-29(30,31)15-12-22/h4-8,19,22-26H,9-18H2,1-3H3,(H,32,37)/t23-,24+,25?,26-/m0/s1

4,4-difluoro-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]-1-phenylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.97 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 7 中的溶解度: 2% DMSO +Corn oil : 10 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。