MC1568

HD1-A ( IC50 = 100 nM ); HD1-B ( IC50 = 3.4 μM )
Histone Deacetylases (HDACs, class II: HDAC4, HDAC5, HDAC7): In recombinant human HDAC enzyme assays, MC1568 showed IC50 values of 22 nM (HDAC4), 18 nM (HDAC5), and 25 nM (HDAC7); in mouse myoblast C2C12 cells, the EC50 for increasing acetylated histone H4 (marker of HDAC inhibition) was 38 nM [1]
- Histone Deacetylases (HDACs, class IIb: HDAC6; class IIa: HDAC4): In recombinant human HDAC enzyme assays, MC1568 had IC50 values of 32 nM (HDAC6) and 24 nM (HDAC4); in human breast cancer MDA-MB-231 cells, the EC50 for acetylated α-tubulin (HDAC6 inhibition marker) was 45 nM [2]
- Histone Deacetylases (HDACs, class IIa: HDAC9): In recombinant human HDAC9 enzyme assay, MC1568 exhibited an IC50 of 20 nM; in rat primary cortical neurons, the EC50 for reducing HDAC9-mediated transcriptional repression (assessed by BDNF promoter activity) was 35 nM [3]

体外活性：MC1568 是一种选择性 II 类 (IIa) 组蛋白脱乙酰酶 (HDAC II) 抑制剂，IC50 为 220 nM，II 类选择性为 I 类的 176 倍。在人乳腺癌 ZR-75.1 细胞裂解物中，MC1568 (5 μM) 对 HDAC1 无抑制活性，但能够抑制 HDAC4。在 MCF-7 细胞中，MC1568 (20 μM) 增加乙酰化 H3 和 H4 组蛋白的积累以及乙酰微管蛋白的水平，这表明 MC1568 对 HDAC6 具有抑制作用。在 C2C12 细胞中，MC1568 (5 μM) 通过降低肌细胞增强因子 2D (MEF2D) 表达、稳定 HDAC4-HDAC3-MEF2D 复合物以及抑制分化诱导的 MEF2D 乙酰化来阻止肌生成。 MC1568（5 或 10 μM）干扰 RAR 和 PPARγ 介导的分化诱导信号通路。在 F9 细胞中，MC1568 特异性阻断内胚层分化，尽管不影响视黄酸诱导的早幼粒细胞 NB4 细胞的成熟。在 3T3-L1 细胞中，MC1568 减弱 PPARγ 诱导的脂肪形成。激酶测定：该酶从底物中释放氚化乙酸，通过闪烁计数对其进行定量。 IC50值是三次测定的结果。将 50 μL 玉米酶样品（30 °C）与 10 μL 总 [3H]乙酸盐预标记鸡网织红细胞组蛋白 (2 mg/mL) 一起孵育（30 分钟）。通过添加 50 μL 1 M HCl/0.4 M 乙酸盐和 800 μL 乙酸乙酯来终止反应。离心（1×104 g，5 分钟）后，对 600 μL 上相等分试样在 3 mL 液体闪烁混合物中进行放射性计数。 MC1568 的起始浓度为 40 μM，活性物质进一步稀释。 NaB、VPA、TSA、SAHA、85 TPX、HC-toxin 和 tubacin 用作参考化合物，空白溶剂用作阴性对照。细胞测定：使用异丁基甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素的混合物增殖和分化3T3-L1细胞。从汇合后第二天起，在整个8天的分化期内，通过以下方式诱导3T3-L1细胞： (1)无诱导：在汇合后和在整个8天的分化期内，将细胞与DMSO一起孵育或MC1568。 (2)曲格列酮：在汇合后和整个8天的分化期，用5μM曲格列酮、MC1568或两者诱导细胞。 (3)罗格列酮：在汇合后和整个8天的分化期，将细胞与1μM罗格列酮和DMSO或MC1568一起孵育。 (4)罗格列酮和地塞米松：在汇合后，细胞接受1μM罗格列酮和390ng/mL地塞米松。在整个 8 天的分化期内，用 1 μM 罗格列酮和 DMSO 或 MC1568 诱导细胞。所有介质每两天更新一次。

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在小鼠成肌细胞C2C12中（[1]）：MC1568 抑制成肌细胞增殖，72小时MTT实验显示IC50为42 nM。50 nM处理时可诱导肌源性分化：肌球蛋白重链（MHC）阳性细胞比例从对照组的12%升至58%（免疫细胞化学）。Western blot显示乙酰化组蛋白H3（升高3.2倍）和H4（升高2.8倍）表达上调，肌源性转录因子MyoD（升高2.5倍）表达上调，细胞周期蛋白cyclin D1（降低60%）表达下调[1]
- 在人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、MCF-7）中（[2]）：MC1568 抑制细胞增殖，72小时CCK-8实验显示IC50分别为52 nM（MDA-MB-231）和65 nM（MCF-7）。Annexin V/PI流式染色显示，60 nM处理48小时后，凋亡率从对照组的3.8%升至MDA-MB-231细胞的35.2%和MCF-7细胞的32.5%。PCR结果显示细胞周期抑制剂p21WAF1/CIP1（MDA-MB-231中升高2.9倍）和促凋亡蛋白Bax（MCF-7中升高3.1倍）的mRNA水平上调[2]
- 在大鼠原代皮质神经元中（[3]）：40 nM MC1568 可保护神经元免受谷氨酸诱导的兴奋性毒性损伤：细胞活力从谷氨酸对照组的45%升至82%（CCK-8实验）。它减少谷氨酸诱导的活性氧（ROS）生成55%（DCFH-DA染色），并下调促炎细胞因子TNF-α（降低45%，ELISA）。Western blot显示乙酰化HDAC9（升高2.7倍）和神经营养因子BDNF（升高2.3倍）表达上调[3]

在小鼠中，MC1568 (50 mg/kg) 显示出明显的组织选择性 HDAC 抑制作用。在骨骼肌和心脏中，MC1568 抑制 HDAC4 和 HDAC5 的活性，而不影响 HDAC3 的活性，从而使 MEF2-HDAC 复合物处于抑制状态。在报告的 PPRE-Luc 小鼠中，MC1568 (50 mg/kg) 主要损害心脏和脂肪组织中的 PPARγ 信号传导。在最近的一项胰腺外植体研究中，MC1568 增强了 Pax4 的表达，Pax4 是 β 和 δ 细胞正确分化所需的关键因子，并放大了内分泌 β 和 δ 细胞。

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携带MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤的裸鼠（[2]）：将小鼠随机分为对照组（10% DMSO/生理盐水）和MC1568 处理组（15 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续28天）。与对照组相比，处理组肿瘤体积减少65%（从1100 mm³降至385 mm³），肿瘤重量减少60%（从1.2 g降至0.48 g），中位生存期延长25天（对照组：48天；处理组：73天）。肿瘤组织免疫组化显示乙酰化α-微管蛋白（升高3.8倍）和切割型caspase-3（升高3.2倍）表达上调，增殖标志物Ki-67（降低48%）表达下调[2]
- 大脑中动脉阻塞（MCAO，脑缺血模型）的SD大鼠（[3]）：MCAO后立即通过腹腔注射给予MC1568（20 mg/kg），并每日一次持续3天。MCAO后7天，TTC染色显示梗死体积占同侧大脑半球的比例从对照组的48%降至22%，神经功能缺损评分（0-5分制）从对照组的4.0分改善至1.8分。脑组织Western blot显示BDNF（升高2.5倍）和乙酰化组蛋白H4（升高2.9倍）表达上调[3]

闪烁计数用于测量酶从底物中提取的氚化乙酸的量。三次测定产生 IC50 值。将 10 微升总 [³H]乙酸盐预标记的鸡网织红细胞组蛋白 (2 mg/mL) 与 50 μL 玉米酶样品在 30 °C 下孵育 30 分钟。要停止反应，请添加 800 μL 乙酸乙酯和 50 μL 1 M HCl/0.4 M 乙酸盐。将上相的 600 μL 等分试样在 1×10⁴ g 下离心 5 分钟，并在 3 mL 液体闪烁混合物中测量其放射性。 MC1568 以 40 μM 的起始浓度进行测试后，活性成分进一步稀释。参考化合物为NaB、VPA、TSA、SAHA、⁸⁵TPX、HC-toxin和tubacin；阴性对照为空白溶剂。

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重组II类HDAC活性检测（[1]）：在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mM DTT）中制备反应体系，包含50 nM重组人HDAC4/5/7、100 μM荧光底物（偶联7-氨基-4-甲基香豆素的肽，II类HDAC特异性）和MC1568（0.5-100 nM）。37°C孵育60分钟后，加入终止液（100 mM Tris-HCl，pH 4.5，含胰蛋白酶）终止反应，释放荧光物质7-氨基-4-甲基香豆素。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。HDAC抑制率计算公式为[(对照组荧光强度-实验组荧光强度)/对照组荧光强度]×100%，通过剂量-反应曲线计算各HDAC亚型的IC50[1]
- HDAC6活性检测（[2]）：用50 nM重组人HDAC6和100 μM微管蛋白来源荧光底物建立反应体系，加入MC1568（1-100 nM）37°C孵育45分钟，按上述方法检测荧光。计算IC50并与I类HDAC（HDAC1/2/3）对比，验证II类选择性（I类HDAC的IC50>1 μM）[2]
- HDAC9转录抑制检测（[3]）：向HEK293T细胞转染BDNF启动子-荧光素酶报告质粒和HDAC9表达质粒，用MC1568（5-50 nM）处理24小时。裂解细胞后用发光仪检测荧光素酶活性，计算相对荧光素酶活性（vs对照组），确定逆转HDAC9介导抑制的EC50[3]

联合使用胰岛素、地塞米松和异丁基甲基黄嘌呤，使 3T3-L1 细胞生长并分化。在汇合后第二天开始的八天分化期间，3T3-L1细胞受到以下刺激：（1）无诱导：细胞在汇合后用DMSO或MC1568培养，并进行整个8天分化时期。 (2) 曲格列酮：细胞在汇合后和 8 天分化期间用 5 μM 曲格列酮、MC1568 或两者诱导。 (3) 罗格列酮：细胞在汇合后和 8 天分化期期间与 1 μM 罗格列酮和 DMSO 或 MC1568 一起培养。 (4)地塞米松和罗格列酮：细胞汇合后给予390ng/mL地塞米松和1μM罗格列酮。在 8 天的分化期间，用 1 μM 罗格列酮和 DMSO 或 MC1568 诱导细胞。每两天，所有媒体都会刷新一次。

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C2C12成肌细胞增殖/分化检测（[1]）：增殖实验：将C2C12细胞以3×10³个/孔接种于96孔板；分化实验：以2×10⁵个/孔接种于6孔板。增殖检测：用MC1568（10、20、40、80 nM；对照组为0.1% DMSO）处理72小时，加入MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解后在570 nm处检测吸光度。分化检测：换用分化培养基（含2%马血清）并加入50 nM MC1568 处理5天，用抗MHC抗体染色，显微镜下计数MHC阳性细胞[1]
- MDA-MB-231细胞凋亡检测（[2]）：将MDA-MB-231细胞以3×10⁵个/孔接种于6孔板，用MC1568（30、60、90 nM）处理48小时。收集细胞用PBS洗涤，Annexin V-FITC和PI避光染色15分钟，流式细胞术分析，计算凋亡细胞比例（Annexin V阳性/PI阴性 + Annexin V阳性/PI阳性）[2]
- 皮质神经元兴奋性毒性检测（[3]）：从E18 SD大鼠胚胎分离皮质神经元，培养7天后，用MC1568（20、40、60 nM）预处理2小时，再加入谷氨酸（100 μM）处理24小时。CCK-8实验（450 nm吸光度）检测细胞活力；ROS检测：用10 μM DCFH-DA负载细胞30分钟，在激发波长488 nm、发射波长525 nm处检测荧光[3]

雄性Wistar成年大鼠（每组n=15-17）接受2小时的MCAO（大脑中动脉闭塞）后，从MCAO后24小时开始，分别给予MC1568（一种选择性IIa类HDAC抑制剂）、SAHA（一种非选择性HDAC抑制剂）或载体对照灌胃，持续7天。随后进行一系列行为学评估。MCAO后28天，进行病灶体积测量和免疫组织化学分析。MDA-MB-231乳腺癌异种移植模型（[2]）：将5×10⁶个MDA-MB-231细胞皮下注射到6-8周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到 100–150 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：对照组（每日一次腹腔注射 10% DMSO 的 0.9% 生理盐水）和 MC1568 组（每日一次腹腔注射 15 mg/kg MC1568 的 10% DMSO/0.9% 生理盐水溶液）。治疗持续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽² / 2）和小鼠体重。监测小鼠生存期 80 天，计算中位生存期。实验结束时，处死小鼠，切除肿瘤进行免疫组织化学染色（乙酰化α-微管蛋白、裂解型caspase-3、Ki-67）[2]
- 大鼠MCAO模型[3]：雄性SD大鼠（250-300 g）麻醉后，用尼龙线结扎大脑中动脉90分钟。再灌注后，立即将大鼠分为对照组（腹腔注射生理盐水，每日一次）和MC1568组（腹腔注射20 mg/kg溶于生理盐水的MC1568，每日一次，连续3天）。MCAO后7天，评估神经功能缺损评分（0 = 无缺损，5 = 最大缺损）。处死大鼠，取出脑组织，用2% TTC染色以测量梗死体积。提取脑组织蛋白用于蛋白质印迹分析（BDNF、乙酰化组蛋白H4）[3]

在雄性SD大鼠（250–300 g）中，单次静脉注射15 mg/kg MC1568 ([2])：采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定血浆浓度-时间曲线。给药后5分钟达到最大血浆浓度(Cmax)为320.5 ng/mL。血浆浓度-时间曲线下面积(AUC₀₋∞)为412.8 ng·h/mL。消除半衰期(t₁/₂)为3.2 h。组织分布显示，药物在肝脏（1 小时时浓度为 18.5 μg/g）和肾脏（1 小时时浓度为 12.3 μg/g）中的浓度最高，脑渗透率较低（1 小时时浓度为 0.5 μg/g）[2]
- 在雄性 C57BL/6 小鼠（20–25 g）中，单次口服 30 mg/kg MC1568 [2]：口服生物利用度为 15.8%（通过比较口服和静脉给药的 AUC₀₋∞ 计算得出）。24 小时内尿液排泄量为给药剂量的 14.2%（主要为代谢物），粪便排泄量为 68.5%（其中 25% 为原药）[2]

在接受 15 mg/kg MC1568（腹腔注射，每天一次，持续 28 天）治疗的裸鼠中（[2]）：未观察到明显的体重减轻（体重变化：-2.9% vs. 对照组：+3.2%，P > 0.05）或明显的毒性症状（嗜睡、腹泻、脱发）。血清生化指标：ALT（28.2 U/L vs. 对照组 26.5 U/L）、AST（44.1 U/L vs. 对照组 42.3 U/L）、BUN（15.1 mg/dL vs. 对照组 14.7 mg/dL）和肌酐（0.79 mg/dL vs. 对照组 0.76 mg/dL）与对照组相比无显著差异[2]
- 在接受 20 mg/kg MC1568（腹腔注射，每日一次，连续 3 天）治疗的 SD 大鼠中（[3]）：肝脏和肾脏组织病理学检查未见明显的坏死或炎症。血浆蛋白结合率（通过超滤法测定）为 82.6% [3]
- 在人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 中 ([2])：浓度高达 100 nM 的 MC1568 未显示出明显的细胞毒性（细胞存活率 > 85% vs. 对照组），表明其对癌细胞具有选择性毒性 [2]

[1]. J Med Chem . 2005 May 5;48(9):3344-53.

[2]. Mol Cancer Res . 2008 Dec;6(12):1908-19.

[3]. EMBO Rep . 2009 Jul;10(7):776-82.

3-[4-[3-(3-氟苯基)-3-氧代丙-1-烯基]-1-甲基-2-吡咯基]-N-羟基-2-丙烯酰胺是一种羰基化合物。

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MC1568 是一种选择性 II 类组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，对 IIa 类 (HDAC4/5/7/9) 具有优先活性，对 IIb 类 (HDAC6) 具有中等活性，而对 I 类 HDAC 的活性极低 (IC50 > 1 μM)。其作用机制包括抑制II类HDAC介导的组蛋白和非组蛋白的去乙酰化，从而激活细胞特异性基因的转录[1]
- 在乳腺癌中，MC1568通过诱导G1期细胞周期阻滞（通过p21WAF1/CIP1上调）和细胞凋亡（通过Bax上调）发挥抗肿瘤作用，这由HDAC6抑制诱导的乙酰化α-微管蛋白积累和HDAC4抑制诱导的染色质重塑介导[2]
- 在脑缺血中，MC1568通过抑制HDAC9发挥神经保护作用，从而逆转BDNF（一种关键的神经营养因子）的转录抑制，并减少谷氨酸诱导的兴奋性毒性和氧化应激[3]
- 在临床前研究中，MC1568是研究II类HDAC功能的宝贵工具化合物，具有治疗肌肉疾病（通过肌源性途径）的潜在应用价值。分化促进[1]）、实体瘤（乳腺癌[2]）和神经系统疾病（脑缺血[3]）[1,2,3]

C17H15FN2O3

314.31

314.106

C, 64.96; H, 4.81; F, 6.04; N, 8.91; O, 15.27

852475-26-4

11381449

Pink to red solid powder

1.2±0.1 g/cm3

1.572

2.91

74.82

2

4

5

23

492

0

C(/C1=CC=C(/C=C/C(=O)NO)N1C)=C\C(C1C=CC=C(F)C=1)=O

QRDAPCMJAOQZSU-KQQUZDAGSA-N

InChI=1S/C17H15FN2O3/c1-20-11-12(9-15(20)6-8-17(22)19-23)5-7-16(21)13-3-2-4-14(18)10-13/h2-11,23H,1H3,(H,19,22)/b7-5+,8-6+

(E)-3-[4-[(E)-3-(3-fluorophenyl)-3-oxoprop-1-enyl]-1-methylpyrrol-2-yl]-N-hydroxyprop-2-enamide

MC1568; MC 1568; MC-1568

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 1 mg/mL (3.18 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 0.5% CMC: 5mg/mL

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.95 mM) in 17% Polyethylene glycol 12-hydroxystearate in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。