| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TLR4's coreceptor is myeloid differentiation protein 2 (MD2). Of all the derivatives, compound 20 (MD2-IN-1) had the most potent inhibitory effect on the production of TNF-α and IL-6 produced by LPS. While pretreatment with MD2-IN-1 suppressed the increase in TLR4/MD2 complexes to vehicle levels, LPS alone significantly enhanced the quantity of TLR4/MD2 complexes relative to vehicle. SPR study revealed that xanthohumol bound to MD2 with a KD value of 460 μM, whereas MD2-IN-1 bound to rhMD2 protein in a dose-dependent manner with a KD value of 189 μM. The binding of FITC-LPS to MD2 in the cell surface membrane was dose-dependently decreased by pretreatment with several dosages of MD2-IN-1, with an average fluorescence intensity inhibition of 65% at 10 μM. Additionally, pretreatment with MD2-IN-1 dose-dependently prevents MPM-induced MAPK phosphorylation caused by LPS [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
TLR4 的辅助受体是骨髓分化蛋白 2 (MD2)。在所有衍生物中，化合物20（MD2-IN-1）对LPS产生的TNF-α和IL-6的产生具有最有效的抑制作用。虽然用 MD2-IN-1 预处理抑制了 TLR4/MD2 复合物相对于媒介物水平的增加，但单独的 LPS 相对于媒介物显着增加了 TLR4/MD2 复合物的数量。 SPR研究表明，黄腐酚与MD2结合的KD值为460 μM，而MD2-IN-1以剂量依赖性方式与rhMD2蛋白结合，KD值为189 μM。通过多次剂量的 MD2-IN-1 预处理，FITC-LPS 与细胞表面膜 MD2 的结合呈剂量依赖性降低，10 μM 时平均荧光强度抑制为 65%。此外，MD2-IN-1 预处理可剂量依赖性地防止 LPS 引起的 MPM 诱导的 MAPK 磷酸化 [1]。
化合物20 剂量依赖性地抑制脂多糖 (LPS) 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞 (MPMs) 产生肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和白介素-6 (IL-6)，IC₅₀值分别为4.27 μM和2.09 μM。其抑制活性强于同等浓度的阳性对照 xanthohumol。 [1] 化合物20 (2.5, 5, 10 μM) 剂量依赖性地抑制LPS诱导的ERK、JNK和p38 MAPKs的磷酸化，并阻止LPS诱导的IκB-α降解。 [1] 化合物20 (10 μM) 有效抑制LPS诱导的MPMs中NF-κB p65的核转位及其DNA结合活性。 [1] 化合物20 (10 μM) 显著抑制LPS诱导的MPMs中TNF-α、IL-6、IL-1β和COX-2 mRNA表达的上调。 [1] 化合物20 (0.1, 1, 10 μM) 剂量依赖性地减少FITC标记的LPS与RAW264.7巨噬细胞表面MD2的结合，在10 μM时抑制率约为65%。 [1] 化合物20 (10 μM) 预处理显著减少了LPS诱导的MPMs中TLR4/MD2复合物的形成，免疫共沉淀实验证实了这一点。 [1] 化合物20 在测试浓度下 (高达10 μM) 对巨噬细胞未显示出明显的细胞毒性。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
通过施用 MD2-IN-1，LPS 诱导的 BALF 中蛋白质浓度的升高明显减弱。 MD2-IN-1的治疗减轻了LPS引起的肺水肿，并且LPS治疗组的肺湿/干重比显着大于对照组。此外，炎症浸润区域、出血、间质水肿、肺泡壁增厚和肺组织损失都是LPS引起的可见组织学变化。在接受 MD2-IN-1 治疗的组中，这些组织学改变得到改善[1]。
在大鼠气管内滴注LPS (5 mg/kg) 诱导的急性肺损伤 (ALI) 模型中，提前一周灌胃给予化合物20 (20 mg/kg/天) 显著减轻了肺损伤。 [1] 化合物20 治疗降低了LPS诱导的支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中总蛋白浓度的增加，并降低了肺湿/干重比，表明减轻了肺水肿。 [1] 化合物20 治疗改善了LPS诱导的肺组织病理学变化，包括炎性浸润、出血、间质水肿和肺泡壁增厚。 [1] 化合物20 给药减少了LPS诱导的BALF中总细胞和中性粒细胞的流入，降低了巨噬细胞浸润 (CD68染色)，并降低了肺组织中的髓过氧化物酶 (MPO) 活性。 [1] 化合物20 治疗显著抑制了LPS诱导的肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达的上调。 [1] 肺组织免疫共沉淀实验证实，化合物20 治疗在体内抑制了LPS诱导的TLR4/MD2复合物的形成。 [1] |
| 酶活实验 |
通过表面等离子体共振 (SPR) 评估化合物20 与重组人MD2 (rhMD2) 蛋白的直接相互作用。将rhMD2固定于经硫酸镍活化的HTE传感芯片上。将浓度为6.25、12.5、25、50和100 μM的化合物20 样品用运行缓冲液配制，以30 μL/min的流速同时进样，进行120秒的结合相，随后是120秒的解离相。使用1:1 Langmuir结合模型分析结合动力学以计算KD值。 [1]
使用荧光光谱法研究其与MD2疏水口袋的竞争性结合。将rhMD2蛋白和荧光探针 (bis-ANS) 在缓冲液中混合。荧光稳定后，加入化合物20 (5-30 μM)，测量相对荧光单位的降低，表明探针被置换。 [1] 采用竞争性ELISA评估化合物20 对LPS与MD2结合的影响。将抗rhMD2抗体包被在板上，然后与rhMD2蛋白孵育。随后加入生物素标记的LPS，同时存在或不存在化合物20 (0.1和1.0 μM)。通过测量吸光度检测结合。 [1] 使用突变的MD2蛋白 (R90A, Y102A, R90A/Y102A) 进行了类似的竞争性ELISA，以确认关键的结合残基。 [1] |
| 细胞实验 |
对于细胞因子抑制实验，小鼠腹腔巨噬细胞 (MPMs) 用不同浓度的化合物20 预处理2小时，然后用LPS (0.5 μg/mL) 刺激22小时。通过ELISA定量培养基中TNF-α和IL-6的水平。 [1]
对于信号蛋白的Western blot分析，MPMs用化合物20 预处理30分钟，然后用LPS (0.5 μg/mL) 刺激20分钟。制备细胞裂解液，蛋白质经凝胶电泳分离，转膜，并用针对MAPKs (ERK, JNK, p38) 和IκB-α的磷酸化及总形式的特异性抗体进行探测。 [1] 对于NF-κB核转位实验，MPMs用化合物20 (10 μM) 预处理30分钟，LPS刺激1小时，然后固定并用Cy3标记的抗NF-κB p65抗体和DAPI (染核) 染色。使用荧光显微镜观察。 [1] 采用电泳迁移率变动分析 (EMSA) 评估NF-κB的DNA结合活性。将经化合物20 预处理和LPS刺激的MPMs的核提取物与生物素标记的NF-κB探针孵育。DNA/蛋白复合物在非变性凝胶上分离，转膜后检测。 [1] 对于定量PCR (qPCR)，MPMs用化合物20 (10 μM) 预处理30分钟，LPS刺激6小时，提取总RNA。合成cDNA，使用SYBR Green测量TNF-α、IL-6、IL-1β和COX-2的mRNA水平，并以β-actin作为内参进行归一化。 [1] 对于LPS结合的流式细胞术分析，将RAW264.7巨噬细胞饥饿处理后，在有或无化合物20 (0.1-10 μM) 存在下，与FITC标记的LPS孵育30分钟。固定细胞后通过流式细胞术分析荧光强度。 [1] 对于TLR4/MD2复合物的免疫共沉淀，MPMs在有或无化合物20 (10 μM) 存在下用LPS处理5分钟。细胞裂解物与抗MD2抗体孵育过夜，然后加入蛋白A+G琼脂糖。沉淀的复合物通过Western blot检测TLR4进行分析。 [1] |
| 动物实验 |
在雄性Sprague-Dawley大鼠中建立急性肺损伤（ALI）模型。大鼠随机分为对照组、LPS组和化合物20+LPS组。[1]化合物20+LPS组在LPS刺激前一周，连续一周灌胃给予溶于0.9%生理盐水中的化合物20，剂量为20 mg/kg体重/天。[1]在麻醉状态下，通过气管内滴注LPS（大肠杆菌O55:B5，5 mg/kg，溶于50 μL 0.9%生理盐水）诱导ALI。对照组大鼠接受气管内滴注生理盐水。[1]LPS诱导6小时后，处死大鼠。收集支气管肺泡灌洗液（BALF），并采集肺组织进行湿重/干重比、组织病理学、免疫组织化学、mRNA表达和蛋白质复合物形成分析。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化合物 20 是一种查尔酮衍生物，含有 (E)-4-苯基丁-3-烯-2-酮结构单元，该单元被认为是许多 MD2 抑制剂的核心结构。其化学结构包含一个 3,4,5-三甲氧基苯基（A 环）和一个 4-羟基苯基（B 环）。[1] 化合物 20 及其类似物的合成包括取代苯乙酮与芳香醛之间的克莱森-施密特缩合反应，随后通过核磁共振和质谱进行纯化和表征。 [1] 分子对接模拟表明，化合物 20 与 MD2 的疏水口袋结合，并与 Arg⁹⁰ 和 Tyr¹⁰² 残基形成氢键。突变研究证实了这一结果，结果显示突变型 MD2（R90A、Y102A）丧失了结合能力和抑制活性。[1] 主要作用机制是化合物 20 作为一种特异性 MD2 抑制剂，竞争性阻断 LPS 与 MD2 的结合，从而阻止 TLR4/MD2/LPS 复合物的形成、后续下游信号通路（MAPKs/NF-κB）的激活以及促炎细胞因子的产生。[1] 该研究表明，化合物 20 具有作为治疗急性炎症性疾病（例如急性肺损伤 (ALI) 和脓毒症）候选药物的巨大潜力。[1]
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| 分子式 |
C20H22O6
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|---|---|---|
| 分子量 |
358.39
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| 精确质量 |
358.141
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| CAS号 |
111797-22-9
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
5724738
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
3.5
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| tPSA |
63.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
451
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1C(/C=C/C(=O)C2=CC(OC)=C(C=C2)OC)=CC(=C(OC)C=1OC)OC
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| InChi Key |
ZKYRYELHPFTZTI-SOFGYWHQSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H22O6/c1-22-16-9-7-14(12-17(16)23-2)15(21)8-6-13-10-18(24-3)20(26-5)19(11-13)25-4/h6-12H,1-5H3/b8-6+
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (9.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 3.25 mg/mL (9.07 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (9.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7903 mL | 13.9513 mL | 27.9026 mL | |
| 5 mM | 0.5581 mL | 2.7903 mL | 5.5805 mL | |
| 10 mM | 0.2790 mL | 1.3951 mL | 2.7903 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Inhibition of TNF-α and IL-6 production as indicated by chalcone derivatives.Sci Rep.2016 Apr 27;6:25130. |
Compound 20 (MD2-IN-1) is a specific inhibitor of MD2. |
Compound20(MD2-IN-1)binds with MD2 via interacting with Arg90and Tyr102. |
Effects of compound20(MD2-IN-1)on the LPS-induced activation of MAPK and NF-κB and expression of inflammatory genes.Sci Rep.2016 Apr 27;6:25130. |
Proposed model of signaling pathway involved in compound 20(MD2-IN-1) preventing LPS-induced TLR4 signaling pathway activation and acute lung injury.Sci Rep.2016 Apr 27;6:25130. |
TLR7/8 agonist 13
L07-2
GNE-5152
3A-MPLA ammonium
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COA
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