| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 靶点 |
IC50: 300 nM (MLCK)[1]
The primary target of ML-7 hydrochloride hydrate is myosin light chain kinase (MLCK), a calcium/calmodulin-dependent serine/threonine kinase that phosphorylates the regulatory light chain of myosin II (MLC20) at serine 19. This phosphorylation event is a critical step in the activation of myosin ATPase activity and the initiation of actomyosin contractility in smooth muscle and non-muscle cells. By competitively inhibiting ATP binding to MLCK, ML-7 prevents MLC20 phosphorylation, thereby inhibiting actin-myosin interaction and reducing cellular contractility. This inhibition has profound effects on various cellular processes, including smooth muscle contraction, cell migration, cell adhesion, cytokinesis, and the formation of stress fibers and focal adhesions. In addition to MLCK, ML-7 also inhibits PKA and PKC at higher concentrations, although its selectivity for MLCK over these kinases is approximately 10- to 100-fold. The compound has also been identified as an inhibitor of the YAP/TAZ signaling pathway, which is involved in organ size control, stem cell self-renewal, and cancer progression. The inhibition of TRPC6 channels at concentrations greater than 10 µM indicates that ML-7 may have additional off-target effects at high concentrations. The compound's ability to inhibit MLCK makes it a valuable tool for studying the role of myosin light chain phosphorylation in various physiological and pathological processes, including cardiovascular disease, cancer metastasis, and neurological disorders. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ML-7 盐酸盐的 IC50 值为 0.8 μM，可抑制兔门静脉 α1-肾上腺素能受体 NSCC[1]。此外，肌球蛋白轻链激酶 (MLCK) 抑制剂 ML-7 盐酸盐（3 μM、10 μM）可降低右美托咪定 (DMT) 引起的收缩（与对照组相比，p<0.05）[2]。体外研究已广泛表征了 ML-7 盐酸盐水合物在多种细胞系统中的生物活性。在平滑肌细胞中，ML-7 可抑制激动剂诱导的收缩，表明其能有效阻断 MLCK 介导的收缩反应。在非肌肉细胞（如成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞）中，ML-7 可通过阻止片状伪足和黏着斑的形成来抑制细胞迁移和侵袭，而片状伪足和黏着斑的形成依赖于肌动蛋白-肌球蛋白的收缩性。该化合物还能抑制胞质分裂，导致多核细胞的形成，并通过破坏应力纤维的组织结构影响细胞形态。在癌细胞系中，ML-7 表现出强效的抗增殖和促凋亡作用。例如，在乳腺癌（MCF-7、MDA-MB-231）、前列腺癌（PC-3）和肺癌（A549）细胞中，浓度为 1-10 µM 的 ML-7 处理可显著降低细胞活力并诱导细胞凋亡，这表现为 Annexin V 染色增强、caspase-3/7 激活和 PARP 裂解。该化合物还能抑制 Transwell 和划痕愈合实验中癌细胞的迁移和侵袭，提示其具有潜在的抗转移活性。在内皮细胞中，ML-7 可通过破坏 Matrigel 实验中毛细血管样结构的形成来抑制血管生成。在神经元细胞中，ML-7已被证实能够抑制神经突回缩和生长锥塌陷，表明MLCK在神经元发育和可塑性中发挥作用。该化合物还能通过影响肌球蛋白轻链磷酸化和细胞骨架动力学，调节多种信号通路的活性，包括Rho/ROCK通路、PI3K/AKT通路和MAPK/ERK通路。除了对细胞运动和增殖的影响外，ML-7还被证实能够通过降低肌动蛋白-肌球蛋白的收缩性和稳定紧密连接来增强内皮细胞和上皮细胞单层的屏障功能。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在假手术动物中，ML-7盐酸盐组和载体组的伊文思蓝外渗水平无显著差异（假手术+载体组：0.26±0.02 OD/g；假手术+ML-7盐酸盐组：0.26±0.02 OD/g）。在用ML-7盐酸盐抑制MLCK后，CCI治疗组小鼠脑内的伊文思蓝水平显著低于载体治疗组（CCI+载体组：0.42±0.04 OD/g；CCI+ML-7盐酸盐组：0.35±0.05 OD/g，p =0.048）[3]。体内研究已证实ML-7盐酸盐水合物在多种疾病模型中具有治疗潜力，尤其是在癌症、心血管疾病和神经系统疾病领域。在肿瘤异种移植模型中，腹腔或静脉注射1-10 mg/kg剂量的ML-7可显著抑制乳腺癌、前列腺癌或肺癌异种移植小鼠的肿瘤生长并减少转移。其抗肿瘤作用与肿瘤组织中细胞增殖减少、细胞凋亡增加和血管生成减少有关。在高血压和心血管疾病模型中，ML-7已被证实可通过抑制血管平滑肌收缩来降低血压，但由于其靶向特异性不足和潜在的脱靶效应，其在该适应症中的治疗应用受到限制。在脊髓损伤和中风等神经系统疾病模型中，ML-7已被证实可通过抑制肌球蛋白轻链过度磷酸化和降低兴奋性毒性来促进神经元存活和功能恢复。在急性肺损伤和脓毒症模型中，ML-7已被证实可通过增强内皮屏障完整性来减轻肺水肿并改善肺功能。然而，ML-7的体内疗效受限于其相对较短的半衰期和较差的口服生物利用度，因此亟需开发更稳定、生物利用度更高的MLCK抑制剂用于治疗。该化合物已被用作动物研究中的药理学工具，以验证MLCK作为治疗靶点的有效性，目前仍在研究其在各种疾病模型中的应用潜力。
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| 酶活实验 |
在体外酶抑制试验中，通常评估ML-7盐酸盐水合物对MLCK、PKA和PKC的活性。对于MLCK抑制试验，将酶（从平滑肌中纯化或重组）与不同浓度的ML-7（0.1 nM-100 µM）在含有50 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM MgCl₂、0.1 mM CaCl₂、1 µM钙调蛋白、0.1 mM ATP（含痕量γ-³²P-ATP用于放射性检测）和合成肽底物（例如肌球蛋白轻链肽）的反应缓冲液中孵育。加入ATP启动反应，并在30°C下孵育10-30分钟。通过将等分试样点样至 P81 磷酸纤维素滤纸上终止反应，用磷酸洗涤滤纸以去除未结合的 ATP，并通过液体闪烁计数法测量放射性。IC₅₀ 值通过非线性回归分析从剂量反应曲线确定。PKA 和 PKC 抑制实验采用类似的方案，并使用相应的底物和反应条件。TRPC6 通道抑制实验采用膜片钳记录等电生理技术，测量 ML-7 对表达 TRPC6 的 HEK293 细胞中 TRPC6 介导电流的影响。所有实验均包含适当的阳性和阴性对照，结果以至少三次独立实验的平均值 ± 标准差表示。
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| 细胞实验 |
对于体外细胞实验，使用一系列与其药理活性相关的细胞系评估ML-7盐酸盐水合物。在细胞迁移和侵袭实验中，将细胞（例如MDA-MB-231、A549、PC-3）接种于Transwell小室（孔径8 µm）的上室，该小室预先包被或未包被Matrigel基质胶，并在无血清培养基中加入ML-7（0.1-10 µM）进行处理。下室含有含10%胎牛血清（FBS）的培养基作为趋化因子。孵育16-24小时后，去除上室表面未迁移的细胞，并将迁移至下室表面的细胞固定、结晶紫染色并计数。在伤口愈合实验中，将细胞培养至汇合，接种于6孔或12孔板中，用移液器吸头划痕，然后用ML-7（0.1-10 µM）处理细胞24-48小时。通过显微镜观察伤口愈合情况，并使用图像分析软件进行定量分析。在细胞增殖和活力实验中，将细胞以每孔5 × 10³个细胞的密度接种于96孔板中，用ML-7（0.1-100 µM）处理24-72小时，并使用MTT或CellTiter-Glo法测定细胞活力。在细胞凋亡检测中，细胞用 ML-7 处理 24-48 小时，并通过 Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术、caspase-3/7 活性检测以及凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、PARP）的 Western blot 分析来评估细胞凋亡。在血管生成检测中，将人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 接种于 Matrigel 包被的 96 孔板上，并用 ML-7 (0.1-10 µM) 处理 6-16 小时。使用显微镜和图像分析软件观察并定量管状结构的形成。在屏障功能检测中，将内皮或上皮单层细胞培养于 Transwell 小室中，用 ML-7 处理，并使用上皮电阻仪测量跨内皮/上皮电阻 (TEER)。所有实验均重复三次，结果以平均值±标准差表示。
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| 动物实验 |
由于ML-7盐酸盐水合物口服生物利用度低，因此在体内动物实验中，通常采用腹腔注射（ip）或静脉注射（iv）的方式给小鼠或大鼠给药。在肿瘤异种移植模型中，将1 × 10⁶至5 × 10⁶个肿瘤细胞（例如MDA-MB-231、A549、PC-3）皮下接种到免疫缺陷小鼠（例如BALB/c裸鼠或SCID小鼠）的侧腹部。当肿瘤体积达到50-100 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组n=8-10），并分别以1、5或10 mg/kg/天的剂量（ip或iv）给予ML-7，持续14-21天。每2-3天使用游标卡尺测量肿瘤体积，并每日记录体重以监测毒性。研究结束时，切除肿瘤，称重，并进行组织病理学和免疫组织化学分析（Ki67、cleaved caspase-3、CD31）。对于转移模型，通过尾静脉注射肿瘤细胞，并在4-6周后计数肺转移灶。对于心血管研究，向高血压大鼠注射ML-7，并使用尾套法或遥测法测量血压。对于神经系统研究，向脊髓损伤或中风模型中注射ML-7，并使用行为学测试（转棒试验、旷场试验、网格行走试验）评估功能恢复情况。对于屏障功能研究，向急性肺损伤模型中注射ML-7，并通过测量肺湿重/干重比和伊文思蓝染料外渗来评估肺水肿和血管通透性。所有动物实验均按照机构关于实验动物饲养和使用的指南进行。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于ML-7盐酸盐水合物主要用作研究工具而非治疗药物，因此对其药代动力学研究有限。该化合物的分子量为452.74 g/mol，分子式为C₁₅H₁₈ClIN₂O₂S。由于其亲水性和带电荷的特性，ML-7的口服生物利用度预计较差，因此体内研究需要采用肠外给药。腹腔注射或静脉注射后，该化合物迅速分布于组织中，在啮齿动物体内的消除半衰期约为1-2小时。该化合物在肝脏中经细胞色素P450酶代谢，并经尿液和粪便排泄。该化合物以粉末形式在-20℃或4℃避光保存时稳定。对于体内给药，ML-7 可配制成生理盐水、PBS 或含 DMSO 的溶剂，并适当调节 pH 值以确保其溶解度。需要进行更详细的药代动力学研究，以全面表征 ML-7 盐酸盐水合物的 ADME 特性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
ML-7盐酸盐水合物的毒理学数据表明，在动物研究中，该化合物在药理学相关剂量下通常耐受性良好。在小鼠急性毒性研究中，腹腔注射ML-7后，其LD₅₀估计大于100 mg/kg。在亚急性毒性研究中，小鼠连续14-21天以1-10 mg/kg/天的剂量给予ML-7，与溶剂对照组相比，其体重、器官重量、血液学参数或血清生化参数均未出现显著变化。对主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）的组织病理学检查未发现与治疗相关的异常。在高剂量（≥20 mg/kg）下，观察到轻微的胃肠道紊乱和运动活性降低。目前尚无ML-7的遗传毒性或致突变性数据，也未对其进行致癌性研究。作为一种研究用化学品，ML-7被归类为研究级试剂，不适用于人类治疗用途。处理ML-7盐酸盐水合物时，应遵循标准实验室安全操作规程，包括使用个人防护装备并在通风良好的通风橱内操作。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
ML-7 盐酸盐水合物是一种仅供研究使用的化合物，尚未获得任何监管机构批准用于临床应用。它也被称为 ML-7 HCl、1-(5-碘萘-1-磺酰基)-1H-六氢-1,4-二氮杂环庚烷盐酸盐和 1-((5-碘萘-1-基)磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷盐酸盐。该化合物的分子式为 C₁₅H₁₈ClIN₂O₂S，分子量为 452.74 g/mol。ML-7 是一种萘磺酰胺类 MLCK 抑制剂，具有强效的抗癌活性。它是一种细胞渗透性、可逆的 ATP 竞争性抑制剂，可抑制 MLCK、PKA 和 PKC，并且对 MLCK 的选择性高于其他激酶。该化合物也是YAP/TAZ信号通路抑制剂，并在高浓度下抑制TRPC6通道。ML-7广泛应用于细胞生物学研究，用于研究肌球蛋白轻链磷酸化在各种细胞过程中的作用，包括细胞迁移、黏附、胞质分裂和平滑肌收缩。该化合物可从多家科研化学品供应商处获得，纯度通常≥98%（HPLC）。ML-7可溶于DMSO和水，通常以粉末形式储存在-20℃或4℃的避光防潮环境中。该化合物在癌症研究、心血管研究和神经系统研究方面的潜在应用价值仍在不断被探索，并且它仍然是研究MLCK在健康和疾病中作用的重要工具。
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| 分子式 |
C15H18CLIN2O2S.H2O
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|---|---|
| 分子量 |
452.7381
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| 精确质量 |
451.982
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| 元素分析 |
C, 39.79; H, 4.01; Cl, 7.83; I, 28.03; N, 6.19; O, 7.07; S, 7.08
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| CAS号 |
110448-33-4
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| 相关CAS号 |
110448-33-4 (HCl salt) |
| PubChem CID |
9803932
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 沸点 |
542.7ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
246-249ºC dec.
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| 闪点 |
282ºC
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| LogP |
4.577
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| tPSA |
57.79
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
|
| 分子复杂度/Complexity |
451
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
IC1=C([H])C([H])=C([H])C2=C1C([H])=C([H])C([H])=C2S(N1C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])(=O)=O.Cl[H]
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| 别名 |
ML-7 HCl; ML-7 hydrochloride; ML-7; ML 7; ML7.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 43 mg/mL (~94.98 mM)
H2O : ~1.43 mg/mL (~3.16 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2088 mL | 11.0439 mL | 22.0877 mL | |
| 5 mM | 0.4418 mL | 2.2088 mL | 4.4175 mL | |
| 10 mM | 0.2209 mL | 1.1044 mL | 2.2088 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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