| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ERK2/1; PKCβII
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| 体外研究 (In Vitro) |
当 10 μM L-α 溶血磷脂磷酸肌醇 (LPI) 或 1 μM ML186 触发时，ML192 和 1 μM ML186 均抑制 β-arrestin 转运，IC50 值分别为 0.70 μM 和 0.29 μM [1]。在表达 GPRSS 的 U2OS 细胞中，ML192 强烈抑制 ERK1/ML192（0、10、30 和 100 µM），而在野生型 GPR55 拦截细胞中，ML192 破坏 PKCβII 易位 [1]。 [1] 二磷酸化。
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| 酶活实验 |
Chemical Library Screening/化合物库筛选[1]
本研究使用β-抑制素(见下文方法)、高通量、高含量筛选(HCS) 30万种化合物来鉴定有效的GPR55选择性拮抗剂。这项工作是与分子文库探针生产中心网络项目合作完成的。有关该化合物库的更多详细信息，请参阅http://mli.nih.gov/mli/compound-repository/mlsmr-compounds/。筛选化合物对GPR55(使用LPI作为激动剂)具有拮抗作用(PubChem AID 2026)，以及对GPR35 (PubChem AIDs 2809, 2815)、CB1 (PubChem AIDs 2814, 2835)和CB2 (PubChem AIDs 2822, 2836)具有拮抗和激动作用。永久表达β-抑制素GFP生物传感器和增强受体(即GPR55, GPR35, CB1或CB2)的细胞系被用于高含量成像试验。检测方案说明(根据AID编号)可在PubChem网站(http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)访问。对GPR35、CB1或CB2缺乏激动或拮抗作用的强效GPR55拮抗剂化合物进行进一步评估，以抑制GPR55激动剂、LPI或ML186产生的pERK激活和PKCβII易位(见下文方法)。从筛选的ML191 (CID23612552)、ML192 (CID1434953)和M193(CID1261822)中选择了一组新型GPR55拮抗剂分子支架，利用GPR55失活状态的计算机模型探讨了每种化合物的结合情况。 |
| 细胞实验 |
细胞实验[1]
化合物LPI、ML191、ML192ML193和ML186 (MolPort)在DMSO中溶解至10mM。10mM原液在Hanks平衡盐溶液(HBSS)中溶解至工作浓度。 β-Arrestin易位[1] 以前已经报道过永久表达HA-GPR55E和βarr2-GFP的U2OS细胞。细胞以80-85%的合流率接种于玻璃罩上，置于24孔板(BD Falcon™)中。细胞保存在37°C, 5% CO2中过夜。在给药前用HBSS短暂清洗细胞。实验采用HBSS作为实验缓冲液。在室温(RT)药物治疗40分钟后，评估激动剂刺激的βarr2-GFP再分布。然后用4%多聚甲醛在室温下固定细胞25分钟，然后用PBS洗涤三次，用双倍蒸馏水洗涤一次。拮抗剂方案包括与拮抗剂共孵育15分钟，然后与激动剂共应用40分钟。 GPR55激活的pkc - β ii易位分析[1] 用含有1.5 μg/ml PKCβ ii - gfp cDNA或PKC质粒和5 μg/ml人GPR55 cDNA的175 μl溶液在pCMV-Sport6中瞬时转染HEK 293细胞，采用标准磷酸钙方案。转染24 h后利用表达GPR55和PKCβII-GFP的细胞。给药后，用温MEM清洗细胞，并在37°C 5% CO2中保存30-45分钟。室温下药物治疗后，评估激动剂刺激的PKCβII-GFP再分布的抑制作用。 细胞外信号调节激酶1/2检测[1] 细胞外信号调节激酶1/2磷酸化通过免疫印迹测定，如前所述。表达gpr55e的U2OS细胞在60 mm板中培养至亚融合，血清饥饿过夜。细胞用HBSS冲洗一次，在使用激动剂(LPI 10 μM, 10分钟)之前，使用拮抗剂化合物30分钟。药物处理后，细胞在裂解缓冲液(50 mM Hepes, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 10%甘油，1% Triton X-100, 10 μM MgCl2, 20mM对硝基苯基磷酸，1 mM Na3VO4, 25mM NaF和蛋白酶抑制剂混合物(1:25,pH 7.5)中被破坏。裂解液立即置于冰上10分钟，然后在4°C下16000 × g离心30分钟。收集与细胞质部分相对应的上清，以牛血清白蛋白为标准，用Bradford法测定蛋白质浓度。细胞质组分(20 μg)用10%凝胶SDS-PAGE分离，然后免疫印迹。使用LI-COR Odyssey红外成像仪检测双磷酸化ERK1/2(1:5000)抗体。用抗总ERK1/2(1:1000)的多克隆抗体来确认相同的蛋白负载。使用LI-COR Odyssey红外成像仪进行密度分析。将ERK1和ERK2的值归一化为总ERK1/2水平。将数据归一化为10 μM LPI下的响应，并以百分比抑制率表示。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
2-呋喃基-[4-(2-甲基-5,6,7,8-四氢-[1]苯并硫杂环戊烯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1-哌嗪基]甲酮是一种N-芳基哌嗪。
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| 分子式 |
C20H22N4O2S
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|---|---|
| 分子量 |
382.482
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| 精确质量 |
382.146
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| 元素分析 |
C, 62.81; H, 5.80; N, 14.65; O, 8.37; S, 8.38
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| CAS号 |
460331-61-7
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| 相关CAS号 |
460331-61-7;
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| PubChem CID |
1434953
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.664
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| LogP |
3.07
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| tPSA |
90.7
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
556
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O1C=CC=C1C(N1CCN(C2C3C4CCCCC=4SC=3N=C(C)N=2)CC1)=O
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| InChi Key |
GDPDARVUXXOYAJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H22N4O2S/c1-13-21-18(17-14-5-2-3-7-16(14)27-19(17)22-13)23-8-10-24(11-9-23)20(25)15-6-4-12-26-15/h4,6,12H,2-3,5,7-11H2,1H3
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| 化学名 |
furan-2-yl-[4-(2-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-[1]benzothiolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperazin-1-yl]methanone
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| 别名 |
MLS000526305; ML192; CID1434953; ML 192; MLS-000526305; ML-192; 460331-61-7; MLS000526305; 2-furanyl[4-(5,6,7,8-tetrahydro-2-methyl[1]benzothieno[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-piperazinyl]-methanone; furan-2-yl(4-(2-methyl-5,6,7,8-tetrahydrobenzo[4,5]thieno[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperazin-1-yl)methanone; furan-2-yl-[4-(2-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-[1]benzothiolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperazin-1-yl]methanone; SMR000116779; 2-furanyl-[4-(2-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-[1]benzothiolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-piperazinyl]methanone; CID-1434953; ML192
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~261.45 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6145 mL | 13.0726 mL | 26.1452 mL | |
| 5 mM | 0.5229 mL | 2.6145 mL | 5.2290 mL | |
| 10 mM | 0.2615 mL | 1.3073 mL | 2.6145 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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