| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
KLF5 (IC50 = 29 nM)
ML264 potently halts DLD-1 viability (IC50 = 29 nM) with high maximal effect (>90%). Human colorectal adenocarcinoma cells are DLD-1 cells. Other cell types, such as HCT116 (human colorectal carcinoma), HT29 (human colorectal adenocarcinoma), and SW620 (human colorectal adenocarcinoma), are also significantly affected by ML264 at submicromolar doses. With inhibition below 50% at the highest dose, the IEC-6 anti-target (a nontransformed rat intestinal epithelial cell line) is largely unaffected[1]. Through changes to the cell cycle profile, this substance effectively prevents the proliferation of CRC cells in vitro[2]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ML264 可有效终止 DLD-1 活性 (IC50 = 29 nM)，且最大效果较高 (>90%)。人结直肠腺癌细胞是DLD-1细胞。其他细胞类型，如 HCT116（人结直肠癌）、HT29（人结直肠腺癌）和 SW620（人结直肠腺癌），也受到亚微摩尔剂量的 ML264 的显着影响。在最高剂量下抑制率低于 50%，IEC-6 抗靶标（一种未转化的大鼠肠上皮细胞系）基本上不受影响[1]。通过改变细胞周期特征，该物质可有效阻止体外 CRC 细胞的增殖[2]。
ML264 (10 µM) 在 24 小时内显著抑制 DLD-1 和 HCT116 结直肠癌细胞系的增殖，与溶剂对照组相比，72 小时后活细胞数量减少 15 至 30 倍。[2] MTS 实验证实，用 10 µM ML264 处理 72 小时，DLD-1 和 HCT116 细胞的代谢活性/存活率降低。[2] 用 10 µM ML264 处理可在 24、48 和 72 小时显著减少 DLD-1 细胞中的有丝分裂象数量。[2] 细胞周期分析显示，10 µM ML264 处理导致 DLD-1 和 HCT116 细胞的 G0/G1 期群体显著减少，S 期群体增加，表明发生了 S 期阻滞。G2/M 期群体的变化具有细胞系依赖性。[2] Annexin V/PI 染色表明，用 10 µM ML264 处理的 DLD-1 和 HCT116 细胞中，凋亡细胞（早期和晚期凋亡）有适度但显著的增加，在 48-72 小时效果更明显。[2] 蛋白质印迹分析显示，10 µM ML264 处理在 72 小时内降低了 DLD-1 和 HCT116 细胞中 KLF5 和 EGR1 的蛋白水平。[2] ML264 处理 (10 µM) 调节了 MAPK、PI3K 和 WNT 通路组分：它降低了 HCT116 细胞中的 p-EGFR 和 EGFR 水平，但增加了 DLD-1 细胞中的 p-EGFR；降低了两种细胞系中的总 ERK 但增加了 p-ERK；降低了两种细胞系中的 AKT、pAKT、GSK3β、pGSK3β 和 Ser552 位点磷酸化的 β-连环蛋白水平。在 HCT116 细胞中，总 β-连环蛋白和 Thr41/Ser45 位点磷酸化的 β-连环蛋白也减少了。[2] ML264 处理 (10 µM) 在 72 小时内下调了 DLD-1 和 HCT116 细胞中细胞周期蛋白 E1、A2 和 B1 的蛋白和 mRNA 水平。细胞周期蛋白 D1 的蛋白在 HCT116 细胞中下调，但在 DLD-1 细胞中不显著，其 mRNA 水平基本无变化。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在成熟的小鼠结肠癌异种移植模型中，ML264 在给药五天后有效抑制肿瘤生长。由于 ML264 有效抑制 KLF5 和 EGR1（KLF5 的转录激活剂）的表达，因此这种效应是通过增殖显着减少而产生的[2]。
在裸鼠 DLD-1 异种移植瘤模型中，腹腔注射 ML264，每日两次、每次 10 mg/kg 或每日两次、每次 25 mg/kg，连续 10 天，与溶剂对照组相比，能显著抑制肿瘤生长，效果最早在治疗后 2 天即可检测到。每日单次 10 mg/kg 剂量无效。[2] 对经 ML264 (25 mg/kg，每日两次) 处理的小鼠异种移植瘤进行组织学分析，显示有丝分裂象显著减少。[2] 异种移植瘤的免疫组织化学和蛋白质印迹分析显示，ML264 处理 (10 和 25 mg/kg，每日两次) 后，KLF5 和 EGR1 蛋白水平显著降低。[2] ML264 处理 (25 mg/kg，每日两次) 的小鼠，其异种移植瘤中 Ki-67（增殖标记物）染色显著减少。[2] 与溶剂对照组相比，ML264 处理的小鼠的异种移植瘤显示出纤维化（波形蛋白染色增加）和炎症（Mac-3 阳性的单核吞噬细胞增加）。[2] |
| 酶活实验 |
ML264 具有高活性（在基于细胞的 DLD-1 细胞增殖测定中，IC50=29 nM；在基于细胞的荧光素酶测定中，IC50=81 nM）。 ML264 在 IEC-6 对照细胞系中缺乏细胞毒性（IC50>50 μM，在 100 μM 时观察到<50% 抑制）。在其他几种表达 KLF5 的细胞类型中也观察到了强大的活性（例如，HCT116，IC50=560 nM；HT29，IC50=130 nM；SW620，IC50=430 nM）。 Western blot 分析显示 ML264 显着降低 KLF5 表达。
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| 细胞实验 |
在测试细胞增殖的实验中，使用 10 μM ML264 或 DMSO 处理 DLD-1 和 HCT116 细胞。处理后24小时、48小时和72小时收集活细胞，并使用库尔特计数器对每个细胞的数量进行计数。在 MTS 测定中，用 10 μM ML264 或对照 (DMSO) 处理 DLD-1 和 HCT116 细胞。孵育 24、48 和 72 小时后，每个孔接受 20 μL MTS 溶液。然后根据制造商的说明进行分析。
细胞增殖和活力实验: 将 DLD-1 和 HCT116 细胞接种于含 DMSO（溶剂）或 10 µM ML264 培养基的板中。在处理后 24、48 和 72 小时使用细胞计数器进行活细胞计数。对于 MTS 实验，类似地处理细胞，孵育相应时间后，向每孔加入 MTS 溶液，按照标准方案测量吸光度。[2] 细胞周期分析: 将 DLD-1 和 HCT116 细胞接种于板中，用 DMSO 或 10 µM ML264 处理。在 24、48 和 72 小时后，收集细胞，固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析以确定细胞周期分布。[2] 细胞凋亡实验: 用 DMSO 或 10 µM ML264 处理 DLD-1 和 HCT116 细胞。在 24、48 和 72 小时后，按照试剂盒说明使用 Alexa Fluor 488 Annexin V 和 PI 对细胞进行染色，并通过流式细胞术分析以量化凋亡细胞。[2] 有丝分裂象计数 (体外): 将 DLD-1 细胞接种于含 DMSO 或 10 µM ML264 培养基的载玻片上，在 24、48 和 72 小时后固定，并用 Hoechst 染料对 DNA 进行染色。在五个视野（每个视野约 100 个细胞）中计数处于有丝分裂的细胞数量。[2] 蛋白质印迹分析: 使用 Laemmli 裂解液从在不同时间点经 DMSO 或 10 µM ML264 处理的 DLD-1 和 HCT116 细胞中提取总蛋白。通过 SDS-PAGE 分离蛋白，转移至膜上，用特异性一抗孵育，再用相应的二抗进行检测。[2] 定量 PCR (qPCR): 使用 TRIzol 试剂从处理的 DLD-1 和 HCT116 细胞中提取总 RNA。合成 cDNA，使用 SYBR Green 化学法和针对 KLF5、EGR1、CTNNB1、CCND1、CCNE1、CCNA2、CCNB1 和 GAPDH 基因的特异性引物进行 qPCR。使用 2-ΔΔCt 方法计算相对基因表达量，以 GAPDH 作为内参基因。[2] |
| 动物实验 |
小鼠：裸鼠饲养于通风、过滤、正压的笼子中，并保持无病原体环境。将5×10⁶个DLD-1人结直肠癌细胞皮下注射至6-7周龄雄性裸鼠的右侧腹部，以建立异种移植瘤模型。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并根据既定公式计算肿瘤体积。当肿瘤体积达到约100 mm³时，分别以10 mg/kg/天、10 mg/kg/天两次和25 mg/kg/天两次的剂量腹腔注射ML264，共10天。对照组注射溶剂。每隔两天观察并称量小鼠。当肿瘤最大直径达到2 cm时，实验结束。肿瘤被切除并保存用于后续研究[2]。
异种移植疗效研究：将5×10^6个DLD-1人结直肠癌细胞皮下注射到裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分组，并进行为期10天的腹腔注射（ip）治疗，治疗方案如下：载体（对照组）、ML264（10 mg/kg，每日一次）、ML264（10 mg/kg，每日两次）或ML264（25 mg/kg，每日两次）。载体溶液由80%去离子水、10%二甲基亚砜和10%吐温80组成。定期使用游标卡尺测量肿瘤大小并计算体积。每两天称量小鼠体重。当肿瘤最大直径达到2 cm时，研究终止，此时切除肿瘤进行分析。 [2] 组织分析：切除的肿瘤组织经固定、石蜡包埋和切片处理。切片用于苏木精-伊红 (H&E) 染色、KLF5、EGR1、波形蛋白和 Mac-3 的免疫组织化学 (IHC) 染色以及 Ki-67 的免疫荧光染色。对 H&E 染色切片中的有丝分裂象进行计数。同时提取肿瘤组织中的蛋白质进行蛋白质印迹分析。[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外药物代谢和药代动力学 (DMPK) 研究表明，ML264 在肝微粒体中具有较高的稳定性，提示其对首过代谢具有较高的稳定性。[2] ML264 不抑制细胞色素 P450 同工酶的活性。[2] 小鼠体内 DMPK 研究显示，ML264 的血浆半衰期约为 2 小时。[2] 小鼠口服 ML264 的生物利用度为 47%。[2]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
据报道，ML264 对 47 种激酶和 67 种具有治疗/毒理学意义的蛋白质靶点均无活性，提示其可能具有选择性。[2] ML264 不抑制细胞色素 P450 同工酶，表明其在这方面的药物相互作用风险较低。[2] 与载体对照组相比，裸鼠每日两次、每次剂量高达 25 mg/kg 的 ML264 治疗 10 天后，体重未见显著变化。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
ML264 是一种第三代小分子化合物，它是通过超高通量筛选 (uHTS) 发现的，旨在寻找用于结直肠癌治疗的 KLF5 表达抑制剂。[2] KLF5 是一种在肠道肿瘤中过度表达的转录因子，也是 RAS/MAPK 和 WNT 信号通路的介质。ML264 被认为通过下调 KLF5 及其激活因子 EGR1 发挥抗肿瘤作用。[2] ML264 抑制 KLF5 表达的机制尚未完全阐明；它可能直接或间接地影响转录。[2] 目前正在进行研究，以确定 ML264 的直接分子靶点，并在肠道腺瘤发生的基因小鼠模型中测试其疗效。[2]
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| 分子式 |
C17H21CLN2O4S
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|---|---|---|
| 分子量 |
384.88
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| 精确质量 |
384.091
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| 元素分析 |
C, 53.05; H, 5.50; Cl, 9.21; N, 7.28; O, 16.63; S, 8.33
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| CAS号 |
1550008-55-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
51003603
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
701.0±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
377.7±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.2 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.599
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| LogP |
0.46
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| tPSA |
91.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
601
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=CC=CC(=C1)/C=C/C(NCC(N(C)C1CCS(CC1)(=O)=O)=O)=O
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| InChi Key |
AJCDZIDKYKCOMZ-AATRIKPKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H21ClN2O4S/c1-20(15-7-9-25(23,24)10-8-15)17(22)12-19-16(21)6-5-13-3-2-4-14(18)11-13/h2-6,11,15H,7-10,12H2,1H3,(H,19,21)/b6-5+
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| 化学名 |
(E)-3-(3-chlorophenyl)-N-[2-[(1,1-dioxothian-4-yl)-methylamino]-2-oxoethyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (8.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5982 mL | 12.9911 mL | 25.9821 mL | |
| 5 mM | 0.5196 mL | 2.5982 mL | 5.1964 mL | |
| 10 mM | 0.2598 mL | 1.2991 mL | 2.5982 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ML264 inhibits proliferation of colorectal cancer cell lines.Mol Cancer Ther.2016 Jan;15(1):72-83. |
ML264 inhibits the growth of DLD-1-derived tumor xenografts in nude mice model.Mol Cancer Ther.2016 Jan;15(1):72-83. |
ML264 treatment reduced the expression levels of KLF5 and EGR1 in DLD-1-derived tumor xenografts.Mol Cancer Ther.2016 Jan;15(1):72-83. |
Sp1-IN-1
SR15006
SR18662
CID-5951923
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COA
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463611831
