Mocetinostat (MGCD0103)   中文名称: 莫塞替诺特

HDAC1 ( IC50 = 0.15 μM ); HDAC2 ( IC50 = 0.29 μM ); HDAC11 ( IC50 = 0.59 μM ); HDAC3 ( IC50 = 1.66 μM )

体外活性：MGCD0103 在纳摩尔或低微摩尔浓度下以剂量依赖性方式仅抑制九种人类重组 HDAC 的子集，包括 HDAC1、HDAC2、HDAC3 和 HDAC11。 MGCD0103 在体外显示出对人 HDAC1 和 HDAC2 酶最有效的抑制活性，并且不抑制 II 类 HDAC。 MGCD0103 中的环外氨基对于酶抑制活性是必需的，因为针对 HDAC1 和 HDAC2 的 HDAC 抑制活性被脱氨基类似物完全消除。 MGCD0103 的抑制活性在 6 μM 时达到最大平台，并且 MGCD0103 影响的最大可抑制酶库是 HCT116 细胞中总酶活性的 75%，而 NVP-LAQ824 抑制这些细胞中几乎 100% 的酶活性。在 A549 细胞中，MGCD0103 还表现出对全细胞 HDAC 活性的剂量依赖性抑制。激酶测定：脱乙酰酶测定基于均相荧光释放测定。将纯化的重组 HDAC 酶与以不同浓度稀释的 MGCD0103 在测定缓冲液 [25 mM HEPES (pH 8.0)、137 mM NaCl、1 mM MgCl2、2.7 mM KCl] 中室温孵育 10 分钟。将底物 Boc-Lys(ε-Ac)-AMC 添加到反应中，在 37 °C 下进一步孵育。不同同种型的 HDAC 酶的底物浓度和孵育时间有所不同。在室温下用胰蛋白酶孵育 20 分钟，可以从脱乙酰基底物中释放荧光团。通过荧光计在 360 nm 激发、470 nm 发射和 435 nm 截止处检测荧光信号。细胞测定：将 96 孔板中的人乳腺上皮细胞 (HMEC) 和人包皮成纤维细胞 (MRHF) 细胞与不同浓度的 MGCD0103 在 37°C、5% CO2 下孵育 72 小时。添加终浓度为 0.5 mg/ml 的 MTT，并与细胞一起孵育 4 小时，然后添加等体积的溶解缓冲液 [50% N,N-二甲基甲酰胺，20% SDS (pH 4.7)]。过夜孵育后，通过使用 630 nm 处的参考在 570 nm 处读数来定量溶解的染料。根据相关细胞系的标准生长曲线将吸光度值转换为细胞数。相对于经DMSO处理的细胞，将细胞数量减少至50%的浓度被确定为MTT IC5。

MGCD0103 显着抑制裸鼠体内人类肿瘤异种移植物的生长，其抗肿瘤活性与诱导肿瘤中组蛋白乙酰化相关。每天口服 MGCD0103（2HBr 盐）13 天后，以剂量依赖性方式显着降低裸鼠体内植入的晚期 A549 肿瘤的生长。与单独的载体治疗相比，MGCD0103（2HBr 盐为 170 mg/kg，相当于 120 mg/kg 游离碱）显着阻止肿瘤生长，且体重没有变化。此外，MGCD0103 不会降低 WBC 计数，且耐受性良好。 MGCD0103 在包括 NSCLC H1437 在内的许多其他人类肿瘤异种移植模型中也具有口服活性。每日口服给药 13 天后，80 mg/kg（游离碱）的 MGCD0103 几乎完全阻断 H1437 肿瘤的生长，且动物体重没有减少。 MGCD0103 比他达拉非更能显着降低肺动脉压，他达拉非是一种治疗人类肺动脉高压的标准疗法，具有血管扩张剂的作用。此外，MGCD0103 改善了肺动脉加速时间并减少了肺动脉血流包络的收缩期切迹，这表明 HDAC 抑制剂对肺血管重塑和硬化具有积极影响。

均相荧光释放测定是脱乙酰酶测定的基础。将纯重组 HDAC 酶与 MGCD0103 稀释液一起在测定缓冲液（25 mM HEPES (pH 8.0)、137 mM NaCl、1 mM MgCl₂ 和 2.7 mM KCl）中室温孵育 10 分钟。不同的浓度。为了在 37 °C 下额外孵育，将底物 Boc-Lys(ε-Ac)-AMC 添加到反应中。对于不同同种型的 HDAC 酶，底物浓度和孵育时间存在差异。室温胰蛋白酶孵育 20 分钟后，荧光团可从脱乙酰基底物中释放出来。荧光计用于检测激发波长 360 nm、发射波长 470 nm 和截止波长 435 nm 处的荧光信号。

将莫西替他添加到 96 孔板中的细胞中，并在 37°C、5% CO₂ 下以不同浓度孵育 72 小时。将细胞以 0.5 mg/mL MTT 终浓度孵育 4 小时后，添加等体积的溶解缓冲液（50% N,N-二甲基甲酰胺和 20% SDS，pH 4.7））。过夜孵育后，使用 630 nm 处的参考值在 570 nm 处测量溶解的染料。相关细胞系的标准生长曲线用于将吸光度值转换为细胞数。 MTT IC50 是与 DMSO 处理的细胞相比，细胞数量减少 50% 的浓度。[1]

[1]. MGCD0103, a novel isotype-selective histone deacetylase inhibitor, has broad spectrum antitumor activity in vitro and in vivo. Mol Cancer Ther. 2008 Apr;7(4):759-68.

[2]. The Effect of MGCD0103 on CYP450 Isoforms Activity of Rats by Cocktail Method. Biomed Res Int. 2015;2015:517295.

Mocetinostat has been used in trials studying the treatment of Lymphoma, Urothelial Carcinoma, Relapsed and Refractory, Myelodysplastic Syndrome, and Metastatic Leiomyosarcoma, among others.
Mocetinostat is a rationally designed, orally available, Class 1-selective, small molecule, 2-aminobenzamide HDAC inhibitor with potential antineoplastic activity. Mocetinostat binds to and inhibits Class 1 isoforms of HDAC, specifically HDAC 1, 2 and 3, which may result in epigenetic changes in tumor cells and so tumor cell death; although the exact mechanism has yet to be defined, tumor cell death may occur through the induction of apoptosis, differentiation, cell cycle arrest, inhibition of DNA repair, upregulation of tumor suppressors, down regulation of growth factors, oxidative stress, and autophagy, among others. Overexpression of Class I HDACs 1, 2 and 3 has been found in many tumors and has been correlated with a poor prognosis.

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Mechanism of Action
Mocetinostat is a novel isotypic-selective inhibitor of the enzyme histone deacetylase (HDAC). HDAC inhibitors act by turning on tumour suppressor genes that have been inappropriately turned off. Tumour suppressor genes are a natural defense against cancer. It is therefore hypothesized that specifically inhibiting those HDACs involved in cancer with Mocetinostat may restore normal cell function and reduce or inhibit tumour growth.

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Pharmacodynamics
All HDAC inhibitors induce histone H3 hyperacetylation, correlating with inhibition of proliferation, induction of cell differentiation and apoptosis.

C23H20N6O

396.44

396.169

C, 69.68; H, 5.08; N, 21.20; O, 4.04

726169-73-9

726169-73-9; 944537-89-7 (HBr)

9865515

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.730

1.88

105.82

3

6

6

30

538

0

O=C(C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C([H])([H])N([H])C1=NC([H])=C([H])C(C2=C([H])N=C([H])C([H])=C2[H])=N1)N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N([H])[H]

HRNLUBSXIHFDHP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H20N6O/c24-19-5-1-2-6-21(19)28-22(30)17-9-7-16(8-10-17)14-27-23-26-13-11-20(29-23)18-4-3-12-25-15-18/h1-13,15H,14,24H2,(H,28,30)(H,26,27,29)

N-(2-aminophenyl)-4-[[(4-pyridin-3-ylpyrimidin-2-yl)amino]methyl]benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。