| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mps1 (Kd = 12 nM); GAK (Kd = 140 nM); CLK4 (IC50 = 15 nM)
Mps1 (IC50 = 145 nM) Plk1 (significant activity, consistent with being a ring-expanded version of the potent Plk1 inhibitor BI-2536)[1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Mps1-IN-2 是一种 ATP 竞争性、有效且选择性的 Mps1 激酶抑制剂，IC50 和 Kd 值分别为 145 nM 和 12 nM。 Mps1-IN-2 对其余 352 个成员激酶几乎没有抑制作用，但它对 PLK1 和 GAK 具有很强的亲和力，Kd 分别为 61 和 140 nM。 Mps1-IN-2 能够导致 U2OS 细胞绕过检查点介导的有丝分裂停滞[1]。
Mps1-IN-2 在1 μM ATP条件下抑制Mps1激酶活性，IC50为145 nM。针对352种激酶组的选择性分析表明，该化合物具有高度选择性，其主要脱靶活性针对Plk1。总体而言，它比其类似物Mps1-IN-1选择性更高，但其显著的Plk1活性限制了其作为选择性Mps1抑制剂的使用。它可作为研究Plk1和Mps1联合抑制的独特工具。[1] 用5-10 μM Mps1-IN-2 处理HCT116结直肠癌细胞96小时后，其增殖能力降至DMSO对照组的33%，在克隆形成实验中导致细胞活力和克隆存活率严重下降，并诱导严重的非整倍体化和DNA含量<2c的细胞积累。[1] 化合物处理导致的活力丧失与细胞凋亡诱导相关，证据是48小时后开始出现PARP剪切。[1] Mps1-IN-2 处理（类似于Mps1-IN-1）导致被阻滞在分裂期的U2OS细胞中cyclin B蛋白水平呈剂量依赖性下降，表明纺锤体检查点功能被 override。此效应可被蛋白酶体抑制剂MG132逆转。[1] 在用表达荧光标记组蛋白H2B的U2OS细胞进行的实验中，Mps1-IN-2 处理导致细胞提前退出分裂期、染色体错误分离和非整倍体化。[1] 表达抑制剂抗性Mps1 M602Q突变体，可在高达10 μM Mps1-IN-2 存在下，使pHistone H3阳性水平恢复至野生型水平，证实了其靶向作用。[1] |
| 酶活实验 |
使用基于Lanthascreen技术的检测方法评估了Mps1-IN-2对Mps1的体外激酶活性。反应体系包含约40 nM Mps1激酶、1 μM ATP（ATP的表观Km < 1 μM）和200 nM AF-647 E4Y底物。测定其半数抑制浓度（IC50）为145 nM。[1]
进行了放射性酶学免疫沉淀激酶实验，以评估野生型与突变型Mps1对抑制剂的敏感性。免疫沉淀野生型或M602Q突变型LAP-Mps1，并在抑制剂存在下测量激酶活性。M602Q突变体对Mps1-IN-2的敏感性比野生型Mps1低19倍。[1] 使用体外ATP位点竞争结合实验进行激酶选择性分析。在10 μM浓度下，对约400种化合物针对352种不同激酶组进行了分析，以生成选择性注释库（SAL）。Mps1-IN-2对Mps1的选择性相对于大多数激酶组成员高于1000倍，主要例外是Gak和Plk1。[1] |
| 细胞实验 |
为评估纺锤体检查点（SAC）功能废除，使用胸苷和诺考达唑组合处理将U2OS细胞阻滞在分裂期。然后用诺考达唑单独处理或与Mps1-IN-2（联合或不联合蛋白酶体抑制剂MG132）共处理4小时。收集细胞并通过免疫印迹分析cyclin B水平。[1]
为进行分裂期时长和染色体分离分析，用Mps1-IN-2或DMSO处理表达组蛋白H2B-GFP的U2OS细胞。使用延时荧光显微镜成像，记录从核膜破裂到分裂中期启动的时间，并观察染色体的排列和分离。[1] 为生成抑制剂抗性细胞系，通过同时表达Mps1特异性shRNA质粒和一种RNAi不敏感的、LAP标签的Mps1 M602Q等位基因，取代U2OS细胞中的内源性Mps1，从而建立稳定细胞系（UTRM10 Mps1 M602Q）。这些细胞用于通过评估抑制剂处理后的pHistone H3水平和非整倍体化情况，来确认Mps1-IN-2的靶向效应。[1] 对于增殖实验，用不同浓度的Mps1-IN-2处理HCT116细胞，并使用荧光核酸染料（Syto60）在4天的时间内分析细胞数量。[1] 对于克隆形成实验，将HCT116细胞以低密度（每皿200个细胞）铺板，用Mps1-IN-2或DMSO处理，使其生长10天，然后固定并用结晶紫染色以观察和计数克隆。[1] 对于细胞周期和非整倍体分析，收集经Mps1-IN-2或DMSO处理指定时间的细胞，固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析DNA含量。[1] 为评估细胞凋亡，在不同时间点收集经Mps1-IN-2处理的细胞，对细胞裂解物进行免疫印迹以检测PARP的剪切。[1] |
| 动物实验 |
ATP位点定向激酶抑制剂Kinase Tracer 236经荧光标记，在激酶结合实验中监测其从激酶活性位点的置换情况，以评估化合物与TTK的结合。每个15 μL的实验体系包含五种不同浓度的测试化合物（Mps1-IN-2）、30 nM Kinase Tracer 236、2 nM Eu-anti-GST抗体以及1% DMSO（化合物稀释后的剩余物），溶于激酶缓冲液A中。激酶缓冲液A还包含50 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA和0.01% Brij-35。结合实验的起始步骤为：将5 μL测试化合物（来自2倍稀释系列）加入5 μL激酶/抗体混合物中，然后加入5 μL抗体。使用标准的基于Eu的TR-FRET设置来读取检测板，激发波长为340 nm，发射波长分别为615 nm（供体）和665 nm（受体）。激发后延迟100 µs，随后有200 µs的时间窗口用于测量发射强度[1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Mps1-IN-2 属于哌啶类化合物。
Mps1-IN-2属于二氢嘧啶并二氮杂卓酮骨架类化合物，是一种 ATP 竞争性激酶抑制剂。[1] 其结构类似物甲氧基-Mps1-IN-2 与 Mps1 激酶结构域共结晶。结构分析表明，该抑制剂结合于 ATP 口袋，与铰链区残基 G605 形成氢键，并与门控残基和 P 环残基形成疏水相互作用。[1] Mps1-IN-2 的主要研究用途是作为一种化学生物学工具，用于研究细胞中 Mps1 和纺锤体组装检查点的功能。其显著的 Plk1 活性使其特别适用于研究 Mps1 和 Plk1 的联合抑制作用。 [1] Mps1-IN-2 对 Mps1 的化学抑制作用重现了 RNAi 观察到的表型，包括 Mad1/Mad2 募集到着丝粒的缺陷、Aurora B 激酶活性降低、过早退出有丝分裂以及非整倍体的诱导。[1] |
| 分子式 |
C26H36N6O3
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|---|---|
| 分子量 |
480.6024
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| 精确质量 |
480.284
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| 元素分析 |
C, 64.98; H, 7.55; N, 17.49; O, 9.99
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| CAS号 |
1228817-38-6
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| 相关CAS号 |
1228817-38-6
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| PubChem CID |
44968267
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| 外观&性状 |
Light brown to brown solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
772.7±70.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
421.1±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.633
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| LogP |
2.05
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| tPSA |
94.06
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
699
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O([H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C2C([H])=C([H])C(=C(C=2[H])OC([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C2=NC([H])=C3C(=N2)N(C([H])([H])C([H])([H])C(N3C([H])([H])[H])=O)C2([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
WELBJLUKWAJOQV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H36N6O3/c1-3-35-23-16-19(31-13-10-20(33)11-14-31)8-9-21(23)28-26-27-17-22-25(29-26)32(18-6-4-5-7-18)15-12-24(34)30(22)2/h8-9,16-18,20,33H,3-7,10-15H2,1-2H3,(H,27,28,29)
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| 化学名 |
9-cyclopentyl-2-[2-ethoxy-4-(4-hydroxypiperidin-1-yl)anilino]-5-methyl-7,8-dihydropyrimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-one
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| 别名 |
Mps1-IN-2
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~13.3 mg/mL (~27.7 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 13.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 13.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0807 mL | 10.4037 mL | 20.8073 mL | |
| 5 mM | 0.4161 mL | 2.0807 mL | 4.1615 mL | |
| 10 mM | 0.2081 mL | 1.0404 mL | 2.0807 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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TTK-IN-5
ONCOII
Mps1-IN-10
Mps1-IN-8
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