| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mps1 (Kd = 12 nM); GAK (Kd = 140 nM); CLK4 (IC50 = 15 nM)
Mps1 (IC50 = 145 nM) Plk1 (significant activity, consistent with being a ring-expanded version of the potent Plk1 inhibitor BI-2536)[1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Mps1-IN-2 是一种 ATP 竞争性、有效且选择性的 Mps1 激酶抑制剂，IC50 和 Kd 值分别为 145 nM 和 12 nM。 Mps1-IN-2 对其余 352 个成员激酶几乎没有抑制作用，但它对 PLK1 和 GAK 具有很强的亲和力，Kd 分别为 61 和 140 nM。 Mps1-IN-2 能够导致 U2OS 细胞绕过检查点介导的有丝分裂停滞[1]。
Mps1-IN-2 在1 μM ATP条件下抑制Mps1激酶活性，IC50为145 nM。针对352种激酶组的选择性分析表明，该化合物具有高度选择性，其主要脱靶活性针对Plk1。总体而言，它比其类似物Mps1-IN-1选择性更高，但其显著的Plk1活性限制了其作为选择性Mps1抑制剂的使用。它可作为研究Plk1和Mps1联合抑制的独特工具。[1] 用5-10 μM Mps1-IN-2 处理HCT116结直肠癌细胞96小时后，其增殖能力降至DMSO对照组的33%，在克隆形成实验中导致细胞活力和克隆存活率严重下降，并诱导严重的非整倍体化和DNA含量<2c的细胞积累。[1] 化合物处理导致的活力丧失与细胞凋亡诱导相关，证据是48小时后开始出现PARP剪切。[1] Mps1-IN-2 处理（类似于Mps1-IN-1）导致被阻滞在分裂期的U2OS细胞中cyclin B蛋白水平呈剂量依赖性下降，表明纺锤体检查点功能被 override。此效应可被蛋白酶体抑制剂MG132逆转。[1] 在用表达荧光标记组蛋白H2B的U2OS细胞进行的实验中，Mps1-IN-2 处理导致细胞提前退出分裂期、染色体错误分离和非整倍体化。[1] 表达抑制剂抗性Mps1 M602Q突变体，可在高达10 μM Mps1-IN-2 存在下，使pHistone H3阳性水平恢复至野生型水平，证实了其靶向作用。[1] |
| 酶活实验 |
使用基于Lanthascreen技术的检测方法评估了Mps1-IN-2对Mps1的体外激酶活性。反应体系包含约40 nM Mps1激酶、1 μM ATP（ATP的表观Km < 1 μM）和200 nM AF-647 E4Y底物。测定其半数抑制浓度（IC50）为145 nM。[1]
进行了放射性酶学免疫沉淀激酶实验，以评估野生型与突变型Mps1对抑制剂的敏感性。免疫沉淀野生型或M602Q突变型LAP-Mps1，并在抑制剂存在下测量激酶活性。M602Q突变体对Mps1-IN-2的敏感性比野生型Mps1低19倍。[1] 使用体外ATP位点竞争结合实验进行激酶选择性分析。在10 μM浓度下，对约400种化合物针对352种不同激酶组进行了分析，以生成选择性注释库（SAL）。Mps1-IN-2对Mps1的选择性相对于大多数激酶组成员高于1000倍，主要例外是Gak和Plk1。[1] |
| 细胞实验 |
为评估纺锤体检查点（SAC）功能废除，使用胸苷和诺考达唑组合处理将U2OS细胞阻滞在分裂期。然后用诺考达唑单独处理或与Mps1-IN-2（联合或不联合蛋白酶体抑制剂MG132）共处理4小时。收集细胞并通过免疫印迹分析cyclin B水平。[1]
为进行分裂期时长和染色体分离分析，用Mps1-IN-2或DMSO处理表达组蛋白H2B-GFP的U2OS细胞。使用延时荧光显微镜成像，记录从核膜破裂到分裂中期启动的时间，并观察染色体的排列和分离。[1] 为生成抑制剂抗性细胞系，通过同时表达Mps1特异性shRNA质粒和一种RNAi不敏感的、LAP标签的Mps1 M602Q等位基因，取代U2OS细胞中的内源性Mps1，从而建立稳定细胞系（UTRM10 Mps1 M602Q）。这些细胞用于通过评估抑制剂处理后的pHistone H3水平和非整倍体化情况，来确认Mps1-IN-2的靶向效应。[1] 对于增殖实验，用不同浓度的Mps1-IN-2处理HCT116细胞，并使用荧光核酸染料（Syto60）在4天的时间内分析细胞数量。[1] 对于克隆形成实验，将HCT116细胞以低密度（每皿200个细胞）铺板，用Mps1-IN-2或DMSO处理，使其生长10天，然后固定并用结晶紫染色以观察和计数克隆。[1] 对于细胞周期和非整倍体分析，收集经Mps1-IN-2或DMSO处理指定时间的细胞，固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析DNA含量。[1] 为评估细胞凋亡，在不同时间点收集经Mps1-IN-2处理的细胞，对细胞裂解物进行免疫印迹以检测PARP的剪切。[1] |
| 动物实验 |
The ATP site-directed kinase inhibitor Kinase Tracer 236 is fluorescently labeled, and its displacement from the kinase active site is monitored in the kinase binding assay to evaluate compound binding to TTK. In every 15 μL assay, there are five different concentrations of the test compound (Mps1-IN-2), 30 nM Kinase Tracer 236; 2 nM Eu-anti-GST Antibody; and 1% DMSO (which is the leftover from the compound dilution) in Kinase Buffer A, which also contains 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, and 0.01% Brij-35. The procedure for starting binding assays involves adding 5 μL of the test compound (from the 2-fold dilution series) to 5 μL of a kinase/antibody mixture, and then adding 5 μL of the antibody. Standard Eu-based TR-FRET settings are used to read assay plates, with excitation occurring at 340 nm and emission being observed at 615 nm (donor) and 665 nm (acceptor). A 100 µs post-excitation delay is followed by a 200 µs window for measuring emission intensities[1].
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Mps1-IN-2 is a member of piperidines.
Mps1-IN-2 belongs to the dihydropyrimidodiazepinone scaffold class and is an ATP-competitive kinase inhibitor. [1] A close analog, methoxy-Mps1-IN-2, was co-crystallized with the Mps1 kinase domain. The structure revealed that the inhibitor binds to the ATP pocket, forming a hydrogen bond with the hinge residue G605 and making hydrophobic contacts with gatekeeper and P-loop residues. [1] The primary research use of Mps1-IN-2 is as a chemical biology tool to probe Mps1 and spindle assembly checkpoint function in cells. Its significant Plk1 activity makes it particularly useful for studying the combined inhibition of Mps1 and Plk1. [1] Chemical inhibition of Mps1 by Mps1-IN-2 recapitulates phenotypes seen with RNAi, including defects in Mad1/Mad2 recruitment to kinetochores, decreased Aurora B kinase activity, premature mitotic exit, and induction of aneuploidy. [1] |
| 分子式 |
C26H36N6O3
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|---|---|
| 分子量 |
480.6024
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| 精确质量 |
480.284
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| 元素分析 |
C, 64.98; H, 7.55; N, 17.49; O, 9.99
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| CAS号 |
1228817-38-6
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| 相关CAS号 |
1228817-38-6
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| PubChem CID |
44968267
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| 外观&性状 |
Light brown to brown solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
772.7±70.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
421.1±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.633
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| LogP |
2.05
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| tPSA |
94.06
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
699
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O([H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C2C([H])=C([H])C(=C(C=2[H])OC([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C2=NC([H])=C3C(=N2)N(C([H])([H])C([H])([H])C(N3C([H])([H])[H])=O)C2([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
WELBJLUKWAJOQV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H36N6O3/c1-3-35-23-16-19(31-13-10-20(33)11-14-31)8-9-21(23)28-26-27-17-22-25(29-26)32(18-6-4-5-7-18)15-12-24(34)30(22)2/h8-9,16-18,20,33H,3-7,10-15H2,1-2H3,(H,27,28,29)
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| 化学名 |
9-cyclopentyl-2-[2-ethoxy-4-(4-hydroxypiperidin-1-yl)anilino]-5-methyl-7,8-dihydropyrimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-one
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| 别名 |
Mps1-IN-2
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~13.3 mg/mL (~27.7 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 13.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 13.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.33 mg/mL (2.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0807 mL | 10.4037 mL | 20.8073 mL | |
| 5 mM | 0.4161 mL | 2.0807 mL | 4.1615 mL | |
| 10 mM | 0.2081 mL | 1.0404 mL | 2.0807 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ONCOII
Mps1-IN-10
Mps1-IN-8
Mps1-IN-6
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