N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine

别名: N6-(4-Hydroxybenzyl)-adenosine; 110505-75-4; n6-(4-hydroxybenzyl)adenosine; N6-(4-hydroxybenzyl)adenine riboside; (2R,3S,4R,5R)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-[(4-hydroxyphenyl)methylamino]purin-9-yl]oxolane-3,4-diol; CHEMBL224024; N-[(4-hydroxyphenyl)methyl]adenosine; N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine (NHBA); N6-(4-羟基苄基)-腺苷酸;N6-羟苄腺苷;N6-(4-羟基苄基)-腺苷;N6-(4-Hydroxybenzyl)-adenosine
目录号: V33891 纯度: ≥98%
N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine 抑制胶原诱导的血小板聚集,IC50 范围为 6.77-141 μM。
N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine CAS号: 110505-75-4
产品类别: New2
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产品描述
N6-(4-羟基苄基)腺苷抑制胶原诱导的血小板聚集,IC50 值范围为 6.77-141 μM。
N6-(4-羟基苄基)腺苷(也称为对位拓扑素核苷或化合物 2e)是一种天然存在的 N6 位取代的腺苷衍生物,属于细胞分裂素核苷类。它存在于植物中,是一种芳香族细胞分裂素核苷。本研究考察了其抑制洗涤人血小板中胶原诱导的血小板聚集的能力,结果显示其具有浓度依赖性的抑制活性,IC50 值为 6.77 ± 0.31 μM。计算机模拟对接结果表明,其抗聚集活性可能与血小板表面的 G 蛋白偶联受体 P2Y12 受体相互作用有关,该受体介导 ADP 诱导的血小板聚集。[1]
生物活性&实验参考方法
靶点
platelet aggregation
P2Y12 receptor [1]
体外研究 (In Vitro)
我们研究了一些天然存在的N(6)-取代腺苷衍生物(细胞分裂素核苷)作为胶原诱导的体外血小板聚集抑制剂的活性,并确定了它们的活性范围(IC50:6.77-141 μM)。分子对接研究表明,这些化合物的抗聚集活性可能与P2Y12受体结合位点的相互作用有关[1]。化合物N6-(4-羟基苄基)腺苷(2e)对洗涤的人血小板中胶原诱导的血小板聚集具有抑制作用,IC50值为6.77 ± 0.31 μM(平均值±标准差,n=3),是所测试的细胞分裂素核苷(2b-e)中最有效的。 [1]

分子对接模拟预测,N6-(4-羟基苄基)腺苷与P2Y12受体结合腔的结合模式与共结晶拮抗剂AZJ相似。关键相互作用包括:核糖与Lys280和Arg256形成增强的氢键;嘌呤碱基与Tyr105、Tyr109和Phe252发生π-π堆积;N6氨基与Cys194形成氢键;N6连接的4-羟基苄基与Tyr105和Tyr109发生π-π堆积;以及酚羟基与Ser156和Asn159形成氢键。经 ChemPlp 对接后,最小化复合物的得分为 -95.11 kcal/mol,与 AZJ 的共享体积为 205.2 ų。这些对接得分与观察到的体外抗聚集活性排名一致。[1]
体内研究 (In Vivo)
N6-(4-羟基苄基)腺嘌呤核苷对啮齿动物应激性失眠的影响。T1-11 具有催眠作用,能有效改善急性应激性失眠。其催眠作用是通过 A2AR 受体激活 VLPO 中的 GABA 能神经元介导的。由于该腺苷类似物对心血管系统无交感神经和副交感神经作用[2],因此可能是一种潜在的催眠药。
酶活实验
从蛋白质数据库(PDB)中检索了与抗血栓药物(AZJ)结合的P2Y12受体结构。为了模拟生理pH值,Arg、Lys、Glu和Asp的侧链被电离,而His和Cys残基默认保持中性。将整个受体结构进行能量最小化,并固定主链原子,直至均方根误差(RMS)达到0.01 kcal·mol⁻¹·Å⁻¹,以保持其已解析的折叠结构。[1]

使用蒙特卡罗方法(在VEGA程序套件中实现)对N6-(4-羟基苄基)腺苷进行构象分析,通过可旋转键的随机旋转生成1000个构象异构体。选择能量最低的构象异构体进行分子对接模拟。分子对接使用PLANTS软件进行,该软件采用蚁群优化算法。采用默认设置,不施加几何约束。搜索聚焦于以共结晶配体为中心、半径为 8.0 Å 的球体,该球体覆盖了整个结合腔。采用 ChemPlp 评分函数,速度设置为 1,每个配体生成 10 个构象。[1]

在保持结合配体周围 10 Å 半径球体之外的所有原子固定的情况下,对最佳复合物进行能量最小化,以允许相互适应。然后使用优化后的复合物重新计算 ChemPlp 评分以及与共结晶拮抗剂 AZJ 的共享体积。对于 N6-(4-羟基苄基)腺苷,ChemPlp 评分为 -95.11 kcal/mol,与 AZJ 的共享体积为 205.2 ų。[1]
细胞实验
c-fos免疫荧光分析(IFA)[2]
脑组织用4%多聚甲醛固定4小时,并在30%蔗糖溶液中脱水24小时。采用冰冻切片法,将包含VLPO的脑组织切成30 μm厚的切片。VLPO位于前囟前0.14 mm至后囟后0.10 mm之间;因此,每只小鼠解剖约8片脑组织。组织首先用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗15分钟,然后在室温下用含0.3% Triton X-100的PBS(PBST)孵育30分钟。为了降低非特异性背景,将切片用封闭液染色,该封闭液含有2%牛血清白蛋白(BSA)和10%正常山羊血清,溶于PBST中,并在室温下封闭2小时。一抗和二抗均用封闭液稀释。兔抗c-fos抗体用作一抗,于4℃孵育16小时。二抗于室温孵育2小时,随后用PBST缓冲液洗涤1小时。兔抗c-fos多克隆抗体使用Alexa Fluor® 488 AffiniPure山羊抗兔IgG (H+L)(绿色荧光)。后续步骤包括用PBS缓冲液洗涤15分钟,然后用DPX封片剂封片,用于组织学观察。如果c-fos表达位于GABA能神经元上方,则融合颜色将呈现黄色。随后,使用共聚焦显微镜(Leica TCS SP5 II)检测各切片中的免疫反应(IR)活性。
2.6 心率变异性(HRV)的采集与分析[2]
我们将心电图(ECG)电极植入腹部,并连接TR遥测仪以采集ECG信号。ECG信号通过无线方式传输至SmartPad,由IX-214数据记录仪采集,并使用LabScribe 3.0软件进行分析。功率谱分析采用快速傅里叶变换计算。大鼠的功率谱包含两个主要成分:低频(LF,0.04~1.0 Hz)和高频(HF,1.0~3.0 Hz)。计算每小时LF和HF振荡的功率。大鼠的低频功率通常高于高频功率。阻断副交感神经活动可显著降低高频 (HF) 和低频 (LF) 功率,而阻断交感神经张力仅降低低频功率,对高频功率无影响。LF/HF 比值已被公认为评估交感神经和副交感神经功能之间心血管自主神经调节的指标(Kuwahara 等,1994)。
根据先前描述的方法(Mustard 等,1972),从自体贫血小板血浆中制备洗涤人血小板。计数血小板后,在不同浓度的 0.5% DMSO 溶液中预热 N6-(4-羟基苄基)腺苷。然后加入胶原蛋白 (2 μg/mL) 诱导血小板聚集。3 分钟后,使用透射式血小板聚集仪记录聚集反应。 IC50 值(抑制血小板聚集 50% 的浓度)计算为 6.77 ± 0.31 μM(平均值 ± 标准差,n=3)。[1]
动物实验
将Sprague Dawley大鼠分为四组。第1组(n = 6)大鼠在黑暗期前20分钟脑室内注射T1-11,并测定三种剂量(1、10和100 μg)的T1-11对自发睡眠的催眠作用。为了快速筛选某种物质是否具有催眠作用,在黑暗期前给药并测量睡眠增加是最便捷的方法。在睡眠量达到最大值的光照期(休息期)前给药,则难以观察到睡眠增加。分别于第1、4、7和10天随机给予赋形剂和三种剂量的T1-11,间隔2天,并记录24小时的睡眠-觉醒活动。第2组(n = 6)和第3组(n = 6)大鼠分别用于研究选择性A1受体拮抗剂DPCPX和A2受体拮抗剂SCH58261脑室内注射对T1-11诱导的催眠作用的影响。注射方案与第1组相同,不同之处在于采用了载体+载体、载体+T1-11、DPCPX+T1-11和SCH58261+T1-11的双倍注射。各组药物给药顺序随机,并将载体+载体对照组的数据合并。第4组(n = 6)大鼠采用与第1组相同的方案,并采集24小时的心率变异性(HRV)数据。C57BL/6小鼠分为五组(每组n = 6)。在黑暗期前,随机给予小鼠灌胃给予赋形剂和五种不同剂量(1、2.5、5、10 和 20 mg/kg)的 T1-11,给药间隔为 2 天,并记录第 1 组和第 2 组小鼠的睡眠-觉醒活动,持续 24 小时。每组小鼠随机接受三种不同剂量。第 3 组小鼠在黑暗期前灌胃给予 10 mg/kg T1-11,并在黑暗期中期向小鼠的腹外侧视前区 (VLPO) 微量注射 PFS、赋形剂或 A2AR 拮抗剂 SCH58261。第 4 组小鼠在黑暗期前灌胃给予 PFS,并在光照期开始时更换笼垫以诱导应激性失眠。第 5 组小鼠的实验方案与第 4 组相同,只是灌胃给予 10 mg/kg T1-11。使用Gad2-Cre::Ai14转基因小鼠(n = 6)通过评估c-fos的免疫反应性来确定T1-11给药后VLPO的神经元激活情况。在口服T1-11 20小时后解剖脑组织。[2]
参考文献

[1]. Naturally occurring N(6)-substituted adenosines (cytokinin ribosides) are in vitro inhibitors of platelet aggregation: an in silico evaluation of their interaction with the P2Y(12) receptor. Bioorg Med Chem Lett. 2014 Dec 15;24(24):5652-.

其他信息
据报道,在天麻(Gastrodia elata)中发现了N6-(4-羟基苄基)腺苷,并已有相关数据。
N6-(4-羟基苄基)腺苷(对位-拓扑素核苷)是一种天然存在的芳香族细胞分裂素核苷。在所测试的细胞分裂素核苷(异戊烯基腺苷、激动素核苷、N6-苄基腺苷和对位-拓扑素核苷)中,它表现出最高的体外抗血小板聚集活性。分子对接研究表明,其活性可能通过与P2Y12受体相互作用介导,P2Y12受体是止血和血栓形成的关键调节因子,也是抗血小板聚集药物研发的理想靶点。该化合物的酚羟基与P2Y12结合位点的Ser156和Asn159形成额外的氢键,这或许可以解释其活性优于其他N6取代类似物的原因。作者认为,细胞分裂素核苷的抗聚集作用可能与阻断血小板中P2Y12相关信号通路有关,但仍需进一步研究。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C17H19N5O5
分子量
373.36326
精确质量
373.139
CAS号
110505-75-4
PubChem CID
10474479
外观&性状
Typically exists as light yellow to yellow solids at room temperature
LogP
0.8
tPSA
145.78
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
27
分子复杂度/Complexity
494
定义原子立体中心数目
4
SMILES
OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C=NC3=C2N=CN=C3NCC4=CC=C(O)C=C4)O1)O)O
InChi Key
UGVIXKXYLBAZND-LSCFUAHRSA-N
InChi Code
InChI=1S/C17H19N5O5/c23-6-11-13(25)14(26)17(27-11)22-8-21-12-15(19-7-20-16(12)22)18-5-9-1-3-10(24)4-2-9/h1-4,7-8,11,13-14,17,23-26H,5-6H2,(H,18,19,20)/t11-,13-,14-,17-/m1/s1
化学名
(2R,3S,4R,5R)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-[(4-hydroxyphenyl)methylamino]purin-9-yl]oxolane-3,4-diol
别名
N6-(4-Hydroxybenzyl)-adenosine; 110505-75-4; n6-(4-hydroxybenzyl)adenosine; N6-(4-hydroxybenzyl)adenine riboside; (2R,3S,4R,5R)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-[(4-hydroxyphenyl)methylamino]purin-9-yl]oxolane-3,4-diol; CHEMBL224024; N-[(4-hydroxyphenyl)methyl]adenosine; N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine (NHBA);
HS Tariff Code
2934999090
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~267.84 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6784 mL 13.3919 mL 26.7838 mL
5 mM 0.5357 mL 2.6784 mL 5.3568 mL
10 mM 0.2678 mL 1.3392 mL 2.6784 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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