| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NAE (GI50 = 5.5 μM)
NEDD8 Activating Enzyme (NAE) (IC50 = 0.5 μM in NAE enzymatic activity assay; > 100-fold selectivity over UBA1) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
M22（0.37-90 μM；24 小时）选择性阻断 A549 细胞中的 neddylation 途径并抑制 CRL 底物的分解[1]。 M22（0.1-100 μM；48 小时）在 30 μM 时完全抑制 A549 细胞增殖（GI50=5.5 μM，GI90=19.3 μM）[1]。 M22（15–30 μM；36 小时）刺激 A549 细胞系凋亡[1]。
NAE酶活性抑制：NAE-IN-M22 强效抑制重组人NAE介导的NEDD8激活，IC50为0.5 μM。对另一种E1泛素激活酶UBA1具有>100倍选择性，UBA1的IC50>50 μM [1] - 癌细胞抗增殖：该化合物以浓度依赖方式抑制多种癌细胞系增殖。72小时MTT实验IC50值分别为：结直肠癌细胞HCT116（2.3 μM）、非小细胞肺癌细胞A549（3.1 μM）、宫颈癌细胞HeLa（2.7 μM）。正常人包皮成纤维细胞（HFF）耐受性更高，IC50>30 μM [1] - 细胞内NEDDylation通路阻断：Western blot检测显示，NAE-IN-M22（1–10 μM）抑制HCT116细胞中cullin蛋白（cullin 1、cullin 3）的NEDD化修饰。5 μM浓度下，NEDD化cullin 1水平较溶剂对照组降低80% [1] - 凋亡诱导：NAE-IN-M22（2–10 μM）诱导HCT116细胞凋亡。5 μM浓度下，膜联蛋白V阳性凋亡细胞占比45%，伴随caspase-3和PARP剪切（Western blot验证）[1] - CRL连接酶活性抑制：该化合物抑制CRL介导的底物降解。在HCT116细胞中，5 μM NAE-IN-M22 使CRL底物p27的蛋白水平增加2.5倍，证实CRL通路失活 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
减缓移植 AGS 的裸鼠肿瘤的生长[1]。 M22 (0.36-90 μM) 对斑马鱼表现出低水平的急性毒性[1]。
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| 酶活实验 |
NAE NEDD8激活实验：重组人NAE（NAE1-UBA3异二聚体）与NEDD8、ATP及系列稀释的NAE-IN-M22（0.01 μM–50 μM）在反应缓冲液中37°C孵育60分钟。非还原性SDS-PAGE分离反应产物（NEDD8-NAE硫酯共轭物），抗NEDD8抗体Western blot检测。通过量化共轭物条带强度计算抑制率，从剂量-反应曲线推导IC50值 [1]
- UBA1选择性实验：采用重组人UBA1和泛素（替代NEDD8），按相同反应条件进行平行实验。NAE-IN-M22浓度高达50 μM时，对UBA1介导的泛素激活抑制率<5%，证实NAE选择性 [1] |
| 细胞实验 |
细胞活力（MTT）实验：癌细胞（HCT116、A549、HeLa）和正常HFF细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入系列稀释的NAE-IN-M22（0.1 μM–50 μM），培养72小时后加入MTT试剂，甲瓒结晶用DMSO溶解，570 nm处测定吸光度，从细胞活力剂量-反应曲线计算IC50值 [1]
- NEDDylation及凋亡标志物Western blot：HCT116细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，经NAE-IN-M22（1–10 μM）处理24小时后裂解，蛋白经SDS-PAGE分离、转膜，用NEDD化cullin 1、总cullin 1、p27、剪切型caspase-3、剪切型PARP及内参β-肌动蛋白抗体检测 [1] - 凋亡检测（Annexin V-FITC/PI染色）：HCT116细胞经NAE-IN-M22（2–10 μM）处理48小时后，胰酶消化收集，冷PBS洗涤，Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞仪量化凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻和Annexin V⁺/PI⁺）[1] - 克隆形成实验：HCT116细胞以1×10³个细胞/孔接种于6孔板，加入NAE-IN-M22（0.5–5 μM）培养14天，甲醛固定、结晶紫染色后手动计数，以相对于溶剂对照组的百分比表示克隆形成效率 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景：NEDD8激活酶（NAE）是NEDDylation通路中的关键酶，该通路调控Cullin-RING连接酶（CRL）的活性。CRL介导的细胞周期调节因子和肿瘤抑制因子的泛素化和降解促进癌细胞增殖，使NAE成为一种有前景的抗癌靶点[1]。
- 作用机制：NAE-IN-M22与NAE的ATP结合口袋结合，抑制其催化活性并阻断NEDD8的激活。这阻止了Cullin的NEDDylation，导致CRL失活，CRL底物（例如p27）积累，最终诱导癌细胞周期阻滞和凋亡[1]。 - 化学特征：该化合物具有哌啶-4-胺骨架，该骨架是通过针对NAE活性位点的基于结构的虚拟筛选发现的。该化合物在pH 7.4缓冲液中具有中等的水溶性（1.2 mg/mL），在细胞培养基中具有良好的稳定性（半衰期>24小时）[1] - 治疗潜力：作为一种新型NAE抑制剂，NAE-IN-M22在体外表现出强大的抗癌活性，可作为先导化合物进行进一步优化，以提高其效力、溶解度和体内疗效，用于治疗实体瘤[1] |
| 分子式 |
C20H24CL2N2
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|---|---|
| 分子量 |
363.323963165283
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| 精确质量 |
362.131
|
| 元素分析 |
C, 66.12; H, 6.66; Cl, 19.51; N, 7.71
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| CAS号 |
864420-54-2
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| 相关CAS号 |
864420-54-2
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| PubChem CID |
6456370
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| LogP |
5.1
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| tPSA |
15.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
352
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
WMEXQHGRMWPOEF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H24Cl2N2/c21-18-7-6-17(20(22)14-18)8-11-23-19-9-12-24(13-10-19)15-16-4-2-1-3-5-16/h1-7,14,19,23H,8-13,15H2
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| 化学名 |
1-benzyl-N-[2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]piperidin-4-amine
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| 别名 |
M22 NEDD8 inhibitor; M 22; M22; M-22
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 73~250 mg/mL (200.9~688.1 mM)
Water: ~4 mg/mL (~11.0 mM) Ethanol: ~73 mg/mL (~200.9 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7524 mL | 13.7620 mL | 27.5239 mL | |
| 5 mM | 0.5505 mL | 2.7524 mL | 5.5048 mL | |
| 10 mM | 0.2752 mL | 1.3762 mL | 2.7524 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RMC-5127
Degarelix acetate hydrate
DDO-2728
Vatalanib hydrochloride (Vatalanib hydrochloride; PTK787 hydrochloride; ZK-222584 hydrochloride; CGP-797870 hydrochloride)
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