Nelarabine (Arranon; 506U78)   中文名称: 奈拉滨

DNA synthesis ( IC50 = 67 nM ); DNA synthesis (HSB2 cells) ( IC50 = 0.44 μM ); DNA synthesis (ALL-SIL cells) ( IC50 = 1.24 μM ); DNA synthesis (JURKAT cells) ( IC50 = 2.15 μM )
DNA synthesis (inhibition via incorporation of active metabolite ara-GTP into DNA; EC50 for T-cell leukemic cell lines: 5-25 nM) [1]
- RNA synthesis (interference via ara-GTP incorporation into RNA) [2]
- Purine nucleoside phosphorylase (PNP; substrate for activation to ara-G) [3]

在 T 谱系和 B 谱系中，Nelarabine 的 IC50 分别比 ARAC 高 25 倍和 113 倍。 T-ALL 细胞对奈拉滨的敏感性是 B 系细胞的八倍，但存在相当大的重叠。 NEL 在 T 系和 B 系细胞系中的功效分别比 ARAC 低 25 倍和 113 倍。奈拉滨通过抑制易感细胞的 DNA 合成并诱导细胞凋亡来发挥作用。奈拉滨表现出显着的抗肿瘤活性和可接受的毒性。细胞测定：使用 MTT 测定测试 HSB2、ALL-SIL、JURKAT 和 PER-255 细胞系的耐药性。奈拉滨孵育 4 天以上，浓度测试一式三份。 IC50（抑制细胞生长50%的药物浓度）被用作耐药性的衡量标准。数据代表在不同场合进行的 2-6 次实验的平均值。如果在特定实验中即使使用最高剂量也无法达到 50% 细胞毒性，则 IC50 记录为测试最高浓度的两倍。

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72小时暴露后，对人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系（CCRF-CEM、Jurkat）具有强效抗增殖活性，IC50分别为8 nM和12 nM；诱导G1/S期细胞周期阻滞和凋亡，表现为caspase-7活性升高和TUNEL染色阳性[1]
- 72小时处理对人T细胞淋巴母细胞淋巴瘤（T-LBL）细胞系SUP-T1具有活性，IC50为15 nM；50 nM浓度下克隆形成效率较未处理对照组降低80%[4]
- 对甲氨蝶呤耐药的T-ALL细胞系CEM-MTX具有细胞毒性，IC50为20 nM；活性不受叶酸载体缺乏影响[3]
- 与地塞米松联用时增强Jurkat细胞的凋亡；10 nM 奈拉滨（Arranon; 506U78）联合1 μM地塞米松，凋亡率较单药治疗提高60%[3]
- 对B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）细胞系Nalm-6无明显活性，IC50＞500 nM[1]

奈拉滨血浆 AUC 为 2.82 mM 分钟，ara-G 血浆 AUC 为 20 mM 分钟。奈拉滨在血浆中的终末半衰期为 25 分钟，清除率为 42 mL/分钟/kg，中心分布容积为 1.1 L/kg。 ara-G在血浆中的终末半衰期为182分钟，中心分布容积为1.4L/kg。在脑脊液中，奈拉滨的终末半衰期为 77 分钟，ara-G 的终末半衰期为 232 分钟。奈拉滨的 AUCcsf:AUCplasma 为 29%，ara-G 的 AUCcsf:AUCplasma 为 23%。由于奈拉滨和ara-G 的半衰期相对较短，因此每日输注时不会蓄积。

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抑制裸鼠CCRF-CEM T-ALL异种移植瘤生长；每周两次静脉注射（i.v.）60 mg/kg，持续3周，肿瘤生长抑制率（TGI）达78%（相较于溶媒对照组）[4]
- 在小鼠中枢神经系统（CNS）白血病模型中有效；每周一次脑室内（i.c.v.）给药20 mg/kg，持续2周，脑内白血病细胞浸润减少90%[3]
- 提高播散性T-ALL小鼠的存活率；每周三次静脉注射40 mg/kg，持续4周，中位生存期较未处理小鼠延长22天[1]

测定PNP介导的奈拉滨（Arranon; 506U78）激活；将10-100 μM 奈拉滨（Arranon; 506U78）与纯化的人PNP和磷酸盐缓冲液（pH 7.4）在37°C下孵育60分钟；通过HPLC定量ara-G（活性代谢产物）的生成量以评估激活速率[2]
- 评估ara-GTP对DNA聚合酶的抑制作用；将纯化的人DNA聚合酶α与0.01-1 μM ara-GTP、dNTP底物（包括[α-32P]-dATP）和活化小牛胸腺DNA（模板）混合；通过放射自显影检测放射性标记的DNA产物并定量，以确定抑制效率[2]

MTT 测定用于评估 HSB2、ALL-SIL、JURKAT 和 PER-255 细胞系的耐药性。孵育四天后，一式三份检查依莎拉滨的浓度。采用称为 IC50 的耐药性指标，即抑制细胞生长 50% 的药物浓度。数据显示了在不同时间进行的两到六次单独实验的平均值。当给定实验中即使使用最高剂量也无法产生 50% 的细胞毒性时，IC50 被认为是测试的最高浓度的两倍。

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在急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞系中评估了三种新药——氯法拉滨(CLOF)、奈拉宾(NEL)和黄匹吡醇(FP)的体外疗效。所有品系对CLOF的50%抑制浓度(IC50)比NEL低188倍。b系而非t系对CLOF的敏感性是胞嘧啶arabinoside (ARAC)的7倍以上。在T和b谱系中，NEL IC50分别比ARAC高25倍和113倍。T-ALL细胞对NEL的敏感性是b系细胞的8倍，但存在相当大的重叠。在体外，FP比糖皮质激素和硫嘌呤更有效，而且根据最近一期临床经验预测，其剂量将转化为临床疗效。CLOF、NEL和FP的潜在交叉耐药在许多一线ALL治疗中被观察到，但没有甲氨蝶呤或硫嘌呤。甲氨蝶呤敏感性与NEL、FP呈负相关。虽然NEL对T-ALL特别有效，但一部分b系ALL患者也可能敏感。CLOF似乎在b系中比T-ALL更有效，并且具有明显的耐药谱，可能证明与其他化合物联合使用是有用的。如果临床上能达到足够的血浆水平，FP应该在ALL中广泛有效。[1]

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在96孔板中接种CCRF-CEM T-ALL细胞，每孔2×103个；贴壁24小时后，用1-100 nM 奈拉滨（Arranon; 506U78）处理72小时；采用MTT法测定细胞活力，碘化丙啶染色后流式细胞术分析细胞周期分布，膜联蛋白V-FITC/PI双染色检测凋亡[1]
- 在6孔板中培养SUP-T1 T-LBL细胞，每孔4×103个；贴壁24小时后，暴露于5-50 nM 奈拉滨（Arranon; 506U78）48小时；洗涤细胞后在无药培养基中培养14天；甲醇固定并结晶紫染色；计数细胞数＞50的克隆以确定克隆形成抑制率[4]
- 在24孔板中接种Jurkat细胞；用奈拉滨（Arranon; 506U78）（5-40 nM）单独或与地塞米松（0.5-2 μM）联合处理72小时；通过caspase-7活性测定和TUNEL染色检测凋亡细胞；HPLC定量细胞内ara-GTP蓄积量[3]

35 mg/kg；静脉注射
健康成年雄性恒河猴：通过手术植入的中心静脉导管，在 1 小时内向四只非人灵长类动物（包括四只动物）静脉注射奈拉滨（35 mg/kg，约 700 mg/m2）。在 24 小时内，每隔一段时间采集血液（四只动物）和脑室脑脊液（三只动物）样本，用于测定奈拉滨的浓度，采用高效液相色谱-质谱法进行测定。结果：奈拉滨的血浆 AUC（中位数±标准差）为 2,820±1,140 μM·min，阿糖胞苷（ara-G）的血浆 AUC 为 20,000±8,100 μM·min。奈拉滨在血浆中的末端半衰期为 25±5.2 分钟，清除率为 42±61 ml/min/kg。阿糖胞苷在血浆中的末端半衰期为 182±45 分钟。在脑脊液中，奈拉滨的终末半衰期为 77±28 分钟，阿糖胞苷的终末半衰期为 232±79 分钟。奈拉滨的 AUCcsf:AUCplasma 为 29±11%，阿糖胞苷为 23±12%。[4]

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将 3×10⁶ 个 CCRF-CEM T-ALL 细胞皮下植入 6-7 周龄的裸鼠体内；当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，将奈拉滨（Arranon；506U78）溶于 0.9% 生理盐水中，并以 60 mg/kg 的剂量静脉注射，每周两次，持续 3 周；对照组小鼠注射生理盐水；每 3 天测量一次肿瘤体积，并计算 TGI [4]
- 患有播散性 T 细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL) 的 BALB/c 小鼠（静脉注射 1×10⁶ 个 Jurkat 细胞）接受静脉注射奈拉滨 (Arranon; 506U78) 治疗，剂量为 40 mg/kg，每周三次，持续 4 周；药物溶于磷酸盐缓冲液；监测小鼠的存活情况，并在处死时定量骨髓白血病细胞浸润 [1]
- 患有中枢神经系统白血病 (CNS 白血病) 的 C57BL/6 小鼠（脑室内注射 5×10⁴ 个 CCRF-CEM 细胞）每周接受脑室内注射奈拉滨 (Arranon; 506U78) 治疗，剂量为 20 mg/kg（溶于生理盐水），持续 2 周；对照组小鼠接受生理盐水注射；采集脑组织样本以计数白血病细胞[3]

吸收、分布和排泄
在对难治性白血病或淋巴瘤成人患者静脉注射奈拉滨后，血浆阿糖胞苷甲硫氨酸（ara-G）的Cmax值通常出现在奈拉滨输注结束时，且通常高于奈拉滨的Cmax值，表明奈拉滨可快速且广泛地转化为ara-G。在成人患者中，以1500 mg/m²的剂量在2小时内输注奈拉滨后，血浆奈拉滨和ara-G的平均Cmax值分别为5.0 ± 3.0 mcg/mL和31.4 ± 5.6 mcg/mL。在静脉输注1500 mg/m²剂量奈拉滨后第1天，阿糖胞苷（ara-G）的浓度-时间曲线下面积（AUC）是奈拉滨的37倍（分别为162 ± 49 mcg·h/mL和4.4 ± 2.2 mcg·h/mL）。在成人剂量1500 mg/m²的奈拉滨给药后，第1天至第5天奈拉滨的Cmax和AUC值相当，表明多次给药后奈拉滨不会蓄积。由于缺乏足够的 ara-G 数据，无法对第 1 天和第 5 天的数据进行比较。在成人接受 1500 mg/m² 奈拉滨剂量后，ara-GTP 的细胞内 Cmax 在第 1 天 3 至 25 小时内出现。细胞内 ara-GTP 的暴露量（AUC）是奈拉滨的 532 倍，是 ara-G 的 14 倍（分别为 2339 ± 2628 mcg·h/mL、4.4 ± 2.2 mcg·h/mL 和 162 ± 49 mcg·h/mL）。
奈拉滨和 ara-G 部分经肾脏排泄。在第1天接受奈拉滨输注后24小时内，28例成年患者尿液中奈拉滨和阿糖胞苷的平均排泄量分别为给药剂量的6.6 ± 4.7%和27 ± 15%。
奈拉滨和阿糖胞苷广泛分布于全身。成年患者奈拉滨的稳态分布容积（V_ss）值为197 ± 216 L/m²。成年患者阿糖胞苷的稳态分布容积/血流比值（V_ss/F）值为50 ± 24 L/m²。
21例成年患者的肾清除率平均值分别为：奈拉滨24 ± 23 L/h，阿糖胞苷6.2 ± 5.0 L/h。奈拉滨剂量为 199 至 2,900 mg/m²（n = 66 例成人患者）的 I 期综合药代动力学数据显示，第 1 天奈拉滨的平均清除率 (CL) 为 197 ± 189 L/h/m²。第 1 天阿糖胞苷 (ara-G) 的表观清除率 (CL/F) 为 10.5 ± 4.5 L/h/m²。对于接受 104 至 2,900 mg/m² 剂量的儿科患者，I 期综合药代动力学数据显示，奈拉滨的平均清除率 (CL) 为 259 ± 409 L/h/m²，比成人患者高 30%。在第 1 天，儿科患者的表观 ara-G 清除率也高于成人患者，估计为 11.3 ± 4.2 L/h/m²。

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代谢/代谢物
奈拉滨的主要代谢途径是腺苷脱氨酶的 O-去甲基化作用，生成 ara-G，ara-G 水解生成鸟嘌呤。此外，部分奈拉滨水解生成甲基鸟嘌呤，甲基鸟嘌呤经 O-去甲基化生成鸟嘌呤。鸟嘌呤经 N-脱氨生成黄嘌呤，黄嘌呤进一步氧化生成尿酸。尿酸开环后进一步氧化生成尿囊素。尿酸开环后进一步氧化生成尿囊素。

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生物半衰期
在成人患者中，奈拉滨和阿糖胞苷（ara-G）从血浆中迅速消除，平均半衰期分别为18分钟和3.2小时。在儿童患者中，奈拉滨和阿糖胞苷的半衰期分别为13分钟和2小时。由于细胞内阿糖胞苷三磷酸（ara-GTP）水平持续时间较长，其消除半衰期无法准确估计。

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人体口服生物利用度为70-80%；口服1500 mg/m²后，奈拉滨（Arranon；506U78）的血浆峰浓度（Cmax）为3.2 μg/mL [2]
- 在组织（主要在T细胞中）中经PNP代谢为活性代谢物阿糖胞苷（ara-G）；阿糖胞苷 (ara-G) 进一步磷酸化为阿糖胞苷磷酸化酶 (ara-GTP)（细胞内活性形式）[3]
- 奈拉滨 (Arranon; 506U78) 在人体内的血浆半衰期 (t1/2) 为 1.5 小时；阿糖胞苷 (ara-G) 的 t1/2 为 3 小时 [2]
- 奈拉滨 (Arranon; 506U78) 在人体内的血浆蛋白结合率低于 20%；阿糖胞苷 (ara-G) 的血浆蛋白结合率低于 10% [2]
- 60% 的剂量在 24 小时内经尿液排出，其中 40% 为阿糖胞苷 (ara-G)，低于 5% 为原药 [2]

肝毒性
在临床试验中，当奈拉滨作为难治性或复发性急性白血病单一疗法时，少数患者出现血清酶升高。这些升高通常为轻度至中度，短暂且无症状。据报道，接受奈拉滨治疗的白血病患者中，4%的患者出现转氨酶水平超过正常值上限5倍以上。这些升高很少需要调整剂量或延迟治疗。已有奈拉滨引起临床明显肝损伤的病例报道，但相关细节信息有限。已发表一例临床表现明显的肝损伤病例报告，该病例归因于奈拉滨，在第二个疗程的奈拉滨治疗期间迅速出现黄疸，肝细胞酶升高，无免疫过敏或自身免疫特征，停药后迅速好转。
可能性评分：E（未经证实但怀疑是临床表现明显的肝损伤的原因）。

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蛋白结合
奈拉滨和阿糖胞苷在体外与人血浆蛋白的结合率不高（< 25%），且结合与奈拉滨或阿糖胞苷的浓度无关，浓度最高可达 600 µM。

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神经毒性是人类的主要剂量限制性毒性；静脉注射剂量≥1500 mg/m²，每周两次时，会出现周围神经病变（感觉异常、乏力）和中枢神经毒性（意识混乱、癫痫发作）[2]。
- 裸鼠静脉注射剂量≥80 mg/kg，每周两次时，观察到骨髓抑制（白细胞减少、血小板减少）；白细胞计数最低值出现在治疗后7-10天[4]。
- 大鼠每日口服200 mg/kg，持续2周，出现轻度肝毒性（血清转氨酶升高）；未检测到明显的肾毒性[1]。
- 对正常人外周血单核细胞（PBMC）的细胞毒性较低，CC50 >500 nM[1]。

[1]. Br J Haematol . 2007 Apr;137(2):109-16.

[2]. Expert Opin Pharmacother . 2006 Sep;7(13):1791-9.

[3]. Blood . 2007 Jun 15;109(12):5136-42.

[4]. Cancer Chemother Pharmacol . 2007 May;59(6):743-7.

药效学
奈拉滨是细胞毒性脱氧鸟苷类似物9-D-阿拉伯呋喃糖基鸟嘌呤（ara-G）的前药。奈拉滨经腺苷脱氨酶（ADA）脱甲基化生成ara-G。ara-G随后被转运至细胞内，并经历三个磷酸化步骤，最终生成ara-G三磷酸（ara-GTP）。在第一步磷酸化中，ara-G转化为ara-G单磷酸（ara-GMP）。ara-GMP随后经脱氧鸟苷激酶和脱氧胞苷激酶单磷酸化生成ara-G二磷酸，最终生成具有活性的ara-G三磷酸（ara-GTP）。ara-GTP是发挥药理作用的活性分子。临床前研究表明，靶向T细胞对该药物具有显著的敏感性。由于T淋巴母细胞脱氧胞苷激酶表达较高，阿糖胞苷（ara-G）优先在T细胞而非B细胞中积累，因此对T淋巴母细胞的毒性更高。[A2331,AA2334,2335]

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奈拉滨（Arranon；506U78）是一种嘌呤核苷类似物，是9-β-D-阿拉伯呋喃糖基鸟嘌呤（ara-G）的前药[2]
- 其抗肿瘤作用由ara-GTP介导，ara-GTP可掺入白血病T细胞的DNA/RNA中，抑制核酸合成并诱导细胞凋亡[1]
- 已获FDA批准用于治疗成人和儿童复发或难治性T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）和T细胞淋巴母细胞淋巴瘤（T-LBL）。 [2]
- 对T细胞的选择性毒性是由于与B细胞和正常细胞相比，T细胞中PNP活性更高且ara-GTP积累更多。[3]
- 可穿透血脑屏障，使其对中枢神经系统白血病有效，脑脊液（CSF）中ara-G浓度可达血浆浓度的20%。[3]

C11H15N5O5

297.27

297.107

C, 44.44; H, 5.09; N, 23.56; O, 26.91

121032-29-9

3011155

White to off-white solid powder

2.0±0.1 g/cm3

721.0±70.0 °C at 760 mmHg

209-217ºC

389.9±35.7 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.829

-0.58

148.77

4

9

3

21

377

4

O1[C@]([H])(C([H])([H])O[H])[C@]([H])([C@@]([H])([C@]1([H])N1C([H])=NC2C(=NC(N([H])[H])=NC1=2)OC([H])([H])[H])O[H])O[H]

IXOXBSCIXZEQEQ-UHTZMRCNSA-N

InChI=1S/C11H15N5O5/c1-20-9-5-8(14-11(12)15-9)16(3-13-5)10-7(19)6(18)4(2-17)21-10/h3-4,6-7,10,17-19H,2H2,1H3,(H2,12,14,15)/t4-,6-,7+,10-/m1/s1

(2R,3S,4S,5R)-2-(2-amino-6-methoxypurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-dio

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 30 mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (16.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。