DNA intercalator

奈莫霉素对 HT-29、A2780、DU145、EM-2、Jurkat 和 CEM 细胞系均表现出抗肿瘤活性，其 IC70 值分别为 578 nM、468 nM、193 nM、191 nM、68 nM 和 131 ± 9 nM[1]。
奈莫霉素是一种由 CYP3A 激活的抗癌前药，能够生成活性更强的代谢物 PNU-159682[1][2]。
奈莫霉素通过核苷酸切除修复 (NER) 系统发挥作用。与缺乏 XPG 的 L1210/0 细胞相比，保留 NER 功能的 L1210/DDP 细胞对奈莫霉素 (0-0.3 μM) 的活性更高。对耐奈莫霉素的细胞更容易受到紫外线损伤[3]。
奈莫霉素的IC50为0.2 nM，比缺乏P450的9L细胞（IC50为23.9 nM）低120倍，表明其对9L/3A/4细胞具有细胞毒性。此外，奈莫霉素的IC50为1.4 nM，能显著抑制腺病毒3A4感染的U251细胞。当P450还原酶过表达时，奈莫霉素的细胞毒性更强[4]。

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奈莫霉素在人肿瘤细胞系中的IC70值（药物处理1小时后，停药培养72小时）如下：HT-29：578 ± 137 nmol/L；A2780：468 ± 45 nmol/L； DU145：193 ± 28 nmol/L；EM-2：191 ± 19 nmol/L；Jurkat：68 ± 12 nmol/L；CEM：131 ± 9 nmol/L [1]。
奈莫霉素在体外细胞毒性仅比阿霉素高2至10倍[1]。
将奈莫霉素与补充了NADPH的肝微粒体孵育可显著增强其对培养肿瘤细胞的细胞毒性，表明其代谢转化为更具细胞毒性的物质[2]。

在人肝细胞色素P450 (CYP) 3A4的作用下，奈莫霉素在大鼠、小鼠和犬的肝微粒体中转化为PNU-159682[2]。当以静脉注射(IV)或瘤内注射(it)的方式给患有9L/3A4肿瘤的小鼠给药时，奈莫霉素(60 µg/kg)可显著抑制肿瘤生长，但对scid小鼠的9L肿瘤生长没有明显抑制作用。在患有 9L/3A4 肿瘤的小鼠中，尼莫霉素（40 µg/kg，腹腔注射）未显示抗肿瘤活性，也未显示宿主毒性[4]。
在播散性小鼠 L1210 白血病模型中，单次静脉注射 90 μg/kg 的尼莫霉素（最佳剂量）可使寿命延长 36%（与对照组相比，P < 0.0001）[1]。

诺柔比星（3'-脱氨基-3'-[2''(S)-甲氧基-4''-吗啉基]阿霉素；MMDX）是一种在研药物，目前正在进行肝细胞癌的II/III期临床试验。MMDX的生物活化产物3'-脱氨基-3'',4'-脱水-[2''(S)-甲氧基-3''(R)-氧基-4''-吗啉基]阿霉素（PNU-159682）最近在MMDX与补充NADPH的大鼠肝微粒体的孵育液中被发现。本研究旨在获得MMDX在人体内生物转化为PNU-159682的信息，并探索PNU-159682的抗肿瘤活性。实验设计：本研究采用人肝微粒体（HLM）和表达特定人细胞色素P450（CYP）的基因工程细胞系微粒体，研究MMDX的生物转化。此外，我们还分别利用体外培养的人类肿瘤细胞系和荷瘤小鼠，检测了PNU-159682的细胞毒性和抗肿瘤活性。结果：HLM将MMDX转化为一种主要代谢物，该代谢物在液相色谱中的保留时间和串联质谱中的离子碎片与合成的PNU-159682完全一致。在来自10名供体的HLM库中，PNU-159682的生成速率与三种不同的CYP3A介导的活性显著相关。CYP3A抑制剂曲罗霉素和酮康唑均能显著降低HLM中PNU-159682的生成；该反应也被CYP3A4/5单克隆抗体浓度依赖性地抑制。在所检测的10种cDNA表达的CYP中，只有CYP3A4生成PNU-159682。此外，PNU-159682在体外表现出比MMDX和阿霉素显著更强的细胞毒性，并且在所测试的两种体内肿瘤模型（即播散性小鼠L1210白血病和MX-1人乳腺癌异种移植瘤）中均有效。结论：CYP3A4是人肝脏中的主要CYP，它将MMDX转化为细胞毒性更强的代谢物PNU-159682，后者在体内保留了抗肿瘤活性。[1]\n

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\n相关性研究。 [1] 将Nemorubicin/MMDX (20 μmol/L) 与来自 10 个不同人肝脏的微粒体组分孵育；孵育方案与上述相同。在这些实验中获得的 PNU-159682 生成速率与在相同微粒体样品中评估的几种已知的 CYP 形式选择性催化活性相关（数据由 BD Gentest 提供，硝苯地平氧化和红霉素 N-去甲基化除外）。决定系数 (r2) 和 P 值通过线性回归分析确定。\n

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化学和免疫化学抑制研究。[1] 在不存在（即对照）和存在已知 CYP 形式选择性化学抑制剂的情况下，评估了混合 HLM 由 20 μmol/L Nemorubicin/MMDX 生成 PNU-159682 的情况。我们考察了以下抑制剂，其浓度均已确定为能够对人肝微粒体（HLM）中的CYP酶进行选择性抑制：7,8-苯并黄酮（1 μmol/L，CYP1A2选择性）、磺胺苯唑（20 μmol/L，CYP2C9选择性）、奎尼丁（5 μmol/L，CYP2D6选择性）、二乙基二硫代氨基甲酸酯（25 μmol/L，CYP2A6/E1选择性）、曲罗霉素（100 μmol/L，CYP3A选择性）和酮康唑（1 μmol/L，CYP3A选择性）。在使用可逆抑制剂（即7,8-苯并黄酮、奎尼丁、磺胺苯唑和酮康唑）的实验中，将抑制剂与底物共同孵育；孵育方案与上述相同。在基于机制的抑制剂（即二乙基二硫代氨基甲酸酯和曲罗霉素）的实验中，将抑制剂与肝微粒体和 NADPH (0.5 mmol) 在 37°C 下预孵育 15 分钟，然后再加入底物和额外的 0.5 mmol NADPH。反应按上述方法进行。
\n免疫化学抑制研究使用含有抑制性单克隆抗体的鼠腹水进行，这些单克隆抗体已被证明对不同的人类 CYP 酶具有特异性。将混合的 HLM（0.25 mg 微粒体蛋白/mL；20 pmol 总 CYP）与指定量的含有抗 CYP 单克隆抗体 (20-140 μg) 的鼠腹水在 0.3 mol/L Tris (pH 7.4) 中于 37°C 下预孵育 5 分钟；然后加入 MMDX（终浓度 20 μmol/L）和 NADPH（终浓度 0.5 mmol/L），总体积为 0.2 mL，启动反应，并按上述方法进行。这些试验中使用的每种单克隆抗体的最高浓度（即 7 μg 腹水蛋白/pmol 总 CYP）此前已被证明在人肝微粒体 (HLM) 中可达到适当的 CYP 形式特异性反应的饱和浓度。对照孵育在不添加单克隆抗体的情况下进行。\n

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\n奈莫比星/MMDX 与 cDNA 表达的人细胞色素 P450 酶的孵育 [1]\nMMDX 与含有 cDNA 表达的 CYP 酶的微粒体的孵育方法与 HLM 的孵育方法相同，只是酶的用量为 50 pmol/mL，孵育在 60 分钟后终止；底物浓度为 20 μmol/L。所有孵育实验均进行重复。取各样品上清液等分试样，采用高效液相色谱-荧光检测法分析 PNU-159682 的含量。\n

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\n\n\n新柔比星（3'-脱氨基-3'-[2''(S)-甲氧基-4''-吗啉基]阿霉素；MMDX）是一种在研药物，目前正在进行肝细胞癌的 II/III 期临床试验。MMDX 的一种生物活化产物，3'-脱氨基-3'',4'-脱水-[2''(S)-甲氧基-3''(R)-氧基-4''-吗啉基]阿霉素 (PNU-159682)，最近在药物与补充 NADPH 的大鼠肝微粒体的孵育液中被鉴定出来。本研究旨在获取MMDX在人体内生物转化为PNU-159682的信息，并探索PNU-159682的抗肿瘤活性。\n
\n实验设计：本研究采用人肝微粒体（HLM）和表达特定人细胞色素P450（CYP）的基因工程细胞系微粒体来研究MMDX的生物转化。此外，我们还分别使用体外培养的人类肿瘤细胞系和荷瘤小鼠模型检测了PNU-159682的细胞毒性和抗肿瘤活性。\n
\n结果：HLM将奈柔比星/MMDX转化为一种主要代谢物，该代谢物在液相色谱中的保留时间和串联质谱中的离子碎片与合成的PNU-159682相同。在来自10名供体的人肝微粒体（HLM）库中，PNU-159682的生成速率与三种不同的CYP3A介导的活性显著相关。CYP3A抑制剂曲罗霉素和酮康唑均显著降低了HLM中PNU-159682的生成；该反应也被CYP3A4/5单克隆抗体浓度依赖性地抑制。在所检测的10种cDNA表达的CYP中，只有CYP3A4能够生成PNU-159682。此外，PNU-159682 在体外表现出比 MMDX 和阿霉素更显著的细胞毒性，并且在所测试的两种体内肿瘤模型（即播散性小鼠 L1210 白血病和 MX-1 人乳腺癌异种移植瘤）中均有效。\n
\n结论：CYP3A4 是人肝脏中的主要 CYP，可将 MMDX 转化为更具细胞毒性的代谢物 PNU-159682，后者在体内保留了抗肿瘤活性。[1]

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\n \n研究人员最近证实，在研抗肿瘤药物奈柔比星 (MMDX) 可通过人肝脏细胞色素 P450 (CYP) 3A4 转化为活性代谢物 PNU-159682。本研究的目标是：(1) 研究实验动物（雌雄小鼠、大鼠和犬）肝微粒体对MMDX的代谢，以确定PNU-159682是否也存在于这些动物体内，并鉴定负责其生成的CYP酶；(2) 比较动物和人肝微粒体(HLM)对MMDX的代谢，以确定哪种动物与人类最为接近；(3) 探讨PNU-159682生成的差异是否是先前报道的MMDX宿主毒性存在物种和性别差异的原因。结果表明，动物对MMDX的代谢与HLM的代谢在性质上相似，因为在所有测试物种中，MMDX主要通过单一的CYP3A酶转化为PNU-159682。然而，不同物种间和同一物种内的代谢动力学参数存在显著的定量差异。小鼠和雄性大鼠的 V(max) 和固有代谢清除率 (CL(int)) 值与人类最为接近，表明这些物种是研究 MMDX 生物转化的最合适动物模型。MMDX CL(int) 与先前报道的本研究中测试的物种、性别和品系动物的 MMDX LD(50) 值之间存在密切的负相关性，表明 MMDX 体内毒性的差异很可能是由于 PNU-159682 生成程度的性别和物种相关差异所致。[2]

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柔红霉素 (CAS#: 108852-90-0) 酶活性测定：
1) 宿主细胞再激活试验 (NER 活性)：用紫外线 (140 J) 损伤 pGL2 质粒。将 L1210 亲代细胞和抗性细胞分别转染 5 μg 经紫外线处理的 pGL2 和 0.5 μg 未经处理的 pRL-SV40（用于标准化）。使用双荧光素酶系统在 6、24 和 48 小时检测报告基因活性。抗性细胞的修复能力显著降低。[7]
2) CYP3A4 代谢活性（IFA 4-羟基化）：将细胞与异环磷酰胺 (IFA) 和 5 mM 氨基脲孵育 4 小时。将丙烯醛衍生化为 7-羟基喹啉后，通过 C18 高效液相色谱法分析培养基中的 4-OH-IFA 含量。CHO/3A4/HR 细胞中 4-OH-IFA 的产量比 CHO/3A4 细胞高 28 倍。 [8] 3) 活化的奈莫柔比星代谢物测定：将表达CYP3A4的细胞与奈莫柔比星孵育2小时；然后将培养上清液加入指示9L细胞中培养4天，并测量细胞存活率以量化细胞毒性代谢物的生成。[8]

在96孔板中，每孔接种3000个细胞，每个处理设置三个复孔，接种的细胞包括9L细胞和CHO细胞，接种时间为用药前24小时。连续四天，用不同浓度的IFA或奈莫霉素处理细胞。用结晶紫（A595）染色后，计算细胞的相对存活率。使用Prism 4软件，根据数据点的半对数图计算IC50值[4]。对于贴壁肿瘤细胞系（HT-29、A2780、DU145），采用磺基罗丹明B法评估细胞毒性。在处理前24小时接种处于指数生长期的细胞，用奈莫霉素处理1小时，然后在无药培养基中培养72小时。对照组细胞不接触药物。每个实验设置六个复孔。 IC70 值通过半对数浓度-效应曲线的线性插值计算得出 [1]。
对于非贴壁肿瘤细胞系（CEM、Jurkat、EM-2），采用细胞计数器在治疗结束时计数存活细胞来评估细胞毒性。细胞暴露于奈莫霉素 1 小时后，在无药培养基中培养 72 小时。每个实验重复 6 次 [1]。

雄性ICR/Fox Chase SCID小鼠用于培养9L和9L/3A4细胞形成实体瘤。细胞在DMEM培养基中培养至75%汇合度后，用胰蛋白酶消化，PBS缓冲液洗涤，并调整细胞浓度至2 × 10⁷个细胞/mL（DMEM培养基不含胎牛血清）。将4 × 10⁶个细胞/0.2 mL细胞悬液皮下注射到4周龄SCID小鼠（18-20 g）的后侧腹部，移植9L或9L/3A4肿瘤细胞。从移植后第7天开始，每周两次使用游标卡尺测量肿瘤大小（长度和宽度）。当平均肿瘤大小达到 300 至 400 mm³ 时，将溶于 PBS 的奈莫霉素通过静脉注射 (IV) 或瘤内注射 (it) 给药（间隔 7 天，共注射 3 次，每次剂量为 60 µg/kg 体重）。瘤内注射使用 30 号针头和设定流速为 1 µL/s 的注射泵。瘤内注射治疗中，每个肿瘤注射 3 次，每只 25 g 小鼠每个肿瘤注射 50 µL。换句话说，对于一只 30 g 的小鼠，注射 120 µL 浓度为 15 µg/mL 的奈莫霉素溶液，每个注射点注射 20 µL × 每个肿瘤 3 个注射点 × 每只小鼠 2 个肿瘤。相同体积的 PBS 腹腔注射到未用药的对照组小鼠中。在某些实验中，腹腔注射（ip）奈莫霉素，剂量为40或60 µg/kg体重。在研究期间，每周测量两次体重和肿瘤大小。肿瘤体积的计算公式为V = π/6 (L × W)^3/2。肿瘤消退百分比的计算公式为100 × (V₁ - V₂)/V₁，其中V₁代表给药当日的肿瘤体积，V₂代表给药后观察到肿瘤体积最大缩小当日的肿瘤体积。肿瘤在药物治疗后体积翻倍所需的时间称为肿瘤倍增时间[4]。

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播散性L1210白血病。 [1]
使用 8 周龄的近交系雌性 CD2F1 (BALB/c × DBA/2) 小鼠评估 PNU-159682 的治疗效果，并与 Nemorubicin /MMDX 进行比较。通过静脉注射 105 个 L1210 细胞诱导播散性肿瘤；1 天后，将动物随机分为实验组 (n = 10)，分别接受单次静脉注射 MMDX、PNU-159682 或生理盐水（对照组）。通过比较治疗组和对照组的中位生存时间来评估治疗效果，并以寿命增加百分比表示，计算公式如下：寿命增加百分比 = (100 × 药物治疗组小鼠的中位生存时间 / 对照组小鼠的中位生存时间) − 100。组间统计学比较采用非参数Mann-Whitney检验。

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皮下MX-1人乳腺癌异种移植瘤。[1]
使用4至6周龄的雌性CD-1无胸腺裸鼠评估PNU-159682对MX-1人乳腺癌异种移植瘤的活性。第0天，将MX-1肿瘤碎片皮下移植到动物（n = 14）的右侧腹部。8天后，将它们随机分为药物治疗组或对照组（每组n = 7只小鼠），并开始治疗。 PNU-159682 按照 q7dx3（每 7 天一次，共三次）方案静脉注射（4 μg/kg）；对照组动物注射生理盐水。肿瘤体积通过游标卡尺测量，并使用以下公式估算：肿瘤体积 (mm³) = D × d² / 2；其中 D 和 d 分别为肿瘤的最长直径和最短直径。出于伦理考虑，对照组动物在第 21 天处死，此时该组的平均肿瘤体积约为 2,500 mm³；接受药物治疗的动物监测至第 50 天，然后处死。

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对于播散性 L1210 白血病模型：将 10⁵ 个 L1210 细胞静脉注射到 8 周龄的 CD2F1 近交系雌性小鼠体内。一天后，将动物随机分配到治疗组（n=10），并分别接受单次静脉注射90 μg/kg的奈莫柔比星或生理盐水（对照组）。通过比较治疗组和对照组的中位生存时间来评估治疗效果，结果以寿命延长百分比表示[1]。

目的：奈莫柔比星（3'-脱氨基-3'-[2''(S)-甲氧基-4''-吗啉基]阿霉素；MMDX）是一种正在进行肝细胞癌II/III期临床试验的在研药物。MMDX的一种生物活性衍生物，3'-脱氨基-3'',4'-脱水-[2''(S)-甲氧基-3''(R)-氧基-4''-吗啉基]阿霉素（PNU-159682），最近在MMDX与添加NADPH的大鼠肝微粒体的孵育培养基中被发现。本研究旨在了解MMDX在人体内向PNU-159682的生物转化过程，并探讨PNU-159682的抗肿瘤活性。实验设计：本研究采用人肝微粒体（HLM）和表达特定人细胞色素P450（CYP）的基因工程细胞系，研究MMDX的生物转化。此外，我们分别利用体外培养的人肿瘤细胞系和荷瘤小鼠，研究了PNU-159682的细胞毒性和抗肿瘤活性。结果：HLM将MMDX转化为一种主要代谢物，其在液相色谱中的保留时间和串联质谱中的离子碎片与合成的PNU-159682完全一致。在来自10名供体的HLM文库中，PNU-159682的生成速率与三种不同CYP3A亚群介导的活性显著相关。CYP3A抑制剂曲克霉素和酮康唑显著降低了HLM中PNU-159682的生成；CYP3A4/5单克隆抗体以浓度依赖的方式抑制了该反应。在测试的10种cDNA表达的CYP酶中，只有CYP3A4能够生成PNU-159682。此外，PNU-159682在体外表现出比MMDX和阿霉素更强的细胞毒性，并且在所测试的两种体内肿瘤模型（即播散性小鼠L1210白血病和MX-1人乳腺癌异种移植瘤）中均有效。结论：CYP3A4是人肝脏中的主要CYP酶，它可以将MMDX转化为细胞毒性更强的代谢物PNU-159682，后者在体内保留了其抗肿瘤活性。[5]我们最近证明，在研抗肿瘤药物奈莫霉素（MMDX）可以通过人肝细胞色素P450（CYP）3A4转化为活性代谢物PNU-159682。本研究的目标是：(1) 研究MMDX在实验动物（雄性和雌性小鼠、大鼠和犬）肝微粒体中的代谢，以确定这些物种是否也会产生PNU-159682，并鉴定负责其生成的CYP酶；(2) 比较MMDX在动物和人肝微粒体(HLM)中的代谢，以确定哪种动物物种与人类最为相似；(3) 探究PNU-159682生成量的差异是否是先前报道的MMDX宿主毒性存在物种和性别差异的原因。动物体内MMDX的代谢与人肝微粒体(HLM)中的代谢性质相似，因为在所有测试物种中，MMDX主要通过单一的CYP3A酶转化为PNU-159682。然而，不同物种之间以及同一物种内部的动力学参数存在显著的定量差异。小鼠和雄性大鼠的V(max)和固有代谢清除率(CL(int))值与人类最为接近，表明这些物种是研究MMDX生物转化的最适宜动物模型。MMDX的CL(int)与先前报道的同种、同性别、同品系MMDX的LD(50)值呈显著负相关，提示MMDX体内毒性的差异可能源于PNU-159682产生程度的性别和物种差异。 [6]在混合人肝微粒体中，Nemorubicin转化为其主要代谢物PNU-159682遵循米氏动力学，Km为16.20 ± 1.18 μM，Vmax为2.29 ± 0.07 nmol/min/mg蛋白[1]。
在人肝微粒体（男性和女性）中，Nemorubicin生成PNU-159682的动力学参数为：男性Km = 9.15 ± 0.25 μM，Vmax = 0.925 ± 0.005 nmol/min/mg蛋白，CLint = 101.10 ± 2.27 μl/min/mg蛋白；女性 Km = 11.75 ± 2.97 μM，Vmax = 1.288 ± 0.146 nmol/min/mg 蛋白，CLint = 112.40 ± 16.54 μl/min/mg 蛋白 [2]。
奈莫柔比星 在人体内主要通过 CYP3A4 转化为 PNU-159682，相关性研究、化学和免疫化学抑制以及 cDNA 表达的 CYP 实验均证实了这一点 [1]。

奈莫霉素的急性宿主毒性表现出性别和物种相关的差异。在雄性和雌性比格犬以及雌性Sprague-Dawley大鼠中，单次静脉注射奈莫霉素的LD50值比雄性Sprague-Dawley大鼠或雌雄CD-1小鼠高2至3倍[2]。体外PNU-159682生成量与奈莫霉素体内LD50值之间存在显著的负相关性（r = -0.936，P = 0.006），这种相关性存在于不同物种和性别（雄性大鼠、雌性大鼠、雄性小鼠、雌性小鼠、雄性犬、雌性犬）中，表明PNU-159682生成程度的差异可能是导致急性宿主毒性变异的原因[2]。

[1]. Formation and antitumor activity of PNU-159682, a major metabolite of nemorubicin in human liver microsomes. Clin Cancer Res. 2005 Feb 15;11(4):1608-17.

[2]. In vitro hepatic conversion of the anticancer agent nemorubicin to its active metabolite PNU-159682 in mice, rats and dogs: a comparison with human liver microsomes. Biochem Pharmacol. 2008 Sep 15;76(6):784-95.

[3]. Down-regulation of the nucleotide excision repair gene XPG as a new mechanism of drug resistance in human and murine cancer cells. Mol Cancer. 2010 Sep 24;9:259.

[4]. Potentiation of methoxymorpholinyl doxorubicin antitumor activity by P450 3A4 gene transfer. Cancer Gene Ther. 2009 May;16(5):393-404.

[5]. Formation and antitumor activity of PNU-159682, a major metabolite of nemorubicin in human liver microsomes. Clin Cancer Res. 2005 Feb 15;11(4):1608-17.

[6]. In vitro hepatic conversion of the anticancer agent nemorubicin to its active metabolite PNU-159682 in mice, rats and dogs: a comparison with human liver microsomes. Biochem Pharmacol. 2008 Sep 15;76(6):784-95.

[7]. Down-regulation of the nucleotide excision repair gene XPG as a new mechanism of drug resistance in human and murine cancer cells. Mol Cancer. 2010 Sep 24;9:259.

[8]. Lu H, et al. Potentiation of methoxymorpholinyl doxorubicin antitumor activity by P450 3A4 gene transfer. Cancer Gene Ther. 2009 May;16(5):393-404.

奈莫霉素属于吗啉类化合物，是一种蒽环类抗生素。它也是一种伯、叔α-羟基酮。在功能上，它与阿霉素相关。奈莫霉素是蒽环类抗生素阿霉素的吗啉类似物，具有抗肿瘤活性。奈莫霉素经P450 CYP3A酶代谢为一种高细胞毒性的衍生物。与大多数蒽环类抗生素不同，奈莫霉素是拓扑异构酶I抑制剂，其作用机制似乎是通过核苷酸切除修复（NER）系统介导的。此外，该药物与其他蒽环类药物不存在交叉耐药性。我们近期证实，在研抗肿瘤药物奈莫霉素 (MMDX) 可通过人肝细胞色素 P450 (CYP) 3A4 转化为活性代谢物 PNU-159682。本研究旨在：(1) 研究 MMDX 在实验动物（雄性和雌性小鼠、大鼠和犬）肝微粒体中的代谢，以确定 PNU-159682 是否也存在于这些物种中，并鉴定负责其生成的 CYP 酶；(2) 比较 MMDX 在动物和人肝微粒体 (HLM) 中的代谢，以确定哪种动物物种与人类亲缘关系最近；(3) 探讨 PNU-159682 生成差异是否是先前报道的 MMDX 宿主毒性存在物种和性别差异的原因。 MMDX在动物体内的代谢与人肝微粒体（HLM）中的代谢相似，因为在所有测试物种中，MMDX主要通过单一的CYP3A酶转化为PNU-159682。然而，不同物种之间以及同一物种内部的动力学参数存在显著的定量差异。小鼠和雄性大鼠的V_max和固有代谢清除率（CL_int）值与人类最为接近，表明这些物种是研究MMDX生物转化的最合适动物模型。MMDX的CL_int值与先前报道的同种、同性别、同品系动物的MMDX LD₅₀值之间存在显著的负相关性，提示MMDX体内毒性的差异可能是由于PNU-159682的产生程度存在性别和物种差异所致。来源：Biochem Pharmacol. 2008 Sep 15; 76(6):784-95.

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抗体药物偶联物（ADC）通常由人源化抗体和小分子药物通过化学连接子连接而成。经过数十年的临床前和临床研究，多种ADC已被广泛应用于特定类型肿瘤的临床治疗，例如用于治疗复发性霍奇金淋巴瘤和系统性间变性大细胞淋巴瘤的布伦妥昔单抗（Adcetris®）、用于治疗急性髓系白血病的吉妥珠单抗（Mylotarg®）、用于治疗HER2阳性转移性乳腺癌的ado-曲妥珠单抗（Kadcyla®）和inotuzumab ozogamicin（Besponsa®），以及近期用于治疗B细胞恶性肿瘤的polatuzumab vedotin-piiq（Polivy®）。迄今为止，已有超过80种抗体药物偶联物（ADC）在约600项临床试验中处于不同的临床试验阶段。本综述总结了抗体药物偶联物（ADC）的关键要素，重点介绍了ADC的最新进展、从临床数据中汲取的重要经验教训以及未来的发展方向。[3]

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背景：载有阿霉素和microRNA16a的EDV纳米细胞在复发性胶质瘤和间皮瘤的I期临床试验中显示出良好的安全性。本研究计划对一项正在进行的首次人体开放标签I/IIa期临床试验进行安全性分析，该试验针对难治性转移性胰腺癌患者，旨在评估携带细胞毒性药物PNU-159682（旨在克服耐药性）的EGFR靶向EDV纳米细胞与携带免疫调节佐剂α-半乳糖神经酰胺（旨在刺激抗肿瘤免疫反应）的EDV纳米细胞联合用药的安全性、生物学和临床活性。方法：在剂量递增阶段，共纳入9例晚期胰腺癌患者，以评估EDV联合用药方案的安全性。剂量从 2 × 10⁹ EDV/次逐渐增加至第 7 周的最大剂量 7 × 10⁹ EDV/次，随后以第 1 周期达到的最大剂量给药。每个周期后均采用 iRECIST 标准评估肿瘤反应，并采集血样进行细胞因子和外周血单核细胞 (PBMC) 分析。结果：EDV 联合方案耐受性良好，未出现剂量限制性毒性 (DLT) 或药物相关严重不良事件 (SAE)。少数患者出现 1 级输注反应，经支持治疗后迅速缓解。9 例患者中，8 例在 8 周时达到部分缓解 (PR) 或疾病稳定 (SD)（临床获益率为 89%），5 例可评估患者中有 4 例在 4 个月时达到确认缓解 (80%)，其中 2 例缓解持续超过 6 个月。探索性分析显示，几乎所有可评估患者（6/8）的IFN-α和IFN-γ水平均升高。此外，我们观察到CD8+ T细胞（2/8）、iNKT细胞、树突状细胞和NK细胞（3/8）水平升高，而耗竭CD8+ T细胞水平降低（3/8），提示先天性和适应性免疫反应均被激活。结论：EDV（一种载有细胞毒性药物和免疫佐剂的药物）安全且耐受性良好。早期信号表明其具有持久疗效，这可能与先天性和适应性免疫反应的产生以及对耐药肿瘤细胞的细胞毒性作用有关。一项IIa期研究计划招募另外35名患者，以进一步评估其安全性和抗肿瘤疗效。临床试验信息：ACTRN12619000385145。 [4]

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Nemorubicin（MMDX，3'-脱氨基-3'-[2"(S)-甲氧基-4"-吗啉基]阿霉素）是一种阿霉素衍生物，其糖基部分3'位带有甲氧基吗啉基。它是一种研究性药物，目前正在进行II/III期临床试验，用于肝细胞癌的肝内动脉化疗，初步缓解率约为25% [1]。与阿霉素不同，Nemorubicin在治疗剂量下无心脏毒性，并且在多药耐药肿瘤模型中仍保持抗肿瘤活性 [1]。体内实验表明，Nemorubicin的效力是阿霉素的80至120倍，而其体外细胞毒性仅比阿霉素高2至10倍 [1][2]。该药物需要通过 CYP3A4 进行代谢活化才能形成高细胞毒性代谢物 PNU-159682，而 PNU-159682 是其体内抗肿瘤活性和宿主毒性的原因 [1][2]。

C32H37NO13

643.63508

643.226

C, 59.71; H, 5.79; N, 2.18; O, 32.32

108852-90-0

Nemorubicin;108852-90-0; 108943-08-4 (HCl)

65907

Red to pink solid powder

1.6±0.1 g/cm3

852.2±65.0 °C at 760 mmHg

469.2±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.681

4.7

201.75

5

14

7

46

1160

7

COC1=C2C(C(C3=C(O)C(C[C@](C(CO)=O)(O)C[C@]4([H])O[C@H]5C[C@H](N6CCO[C@H](OC)C6)[C@H](O)[C@H](C)O5)=C4C(O)=C3C2=O)=O)=CC=C1

CTMCWCONSULRHO-UHQPFXKFSA-N

InChI=1S/C32H37NO13/c1-14-27(36)17(33-7-8-44-22(12-33)43-3)9-21(45-14)46-19-11-32(41,20(35)13-34)10-16-24(19)31(40)26-25(29(16)38)28(37)15-5-4-6-18(42-2)23(15)30(26)39/h4-6,14,17,19,21-22,27,34,36,38,40-41H,7-13H2,1-3H3/t14-,17-,19-,21-,22-,27+,32-/m0/s1

(7S,9S)-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-7-[(2R,4S,5S,6S)-5-hydroxy-4-[(2S)-2-methoxymorpholin-4-yl]-6-methyloxan-2-yl]oxy-4-methoxy-8,10-dihydro-7H-tetracene-5,12-dione

Methoxymorpholinyldoxorubicin; PNU 152243; PNU-152243A; PNU152243A; PNU-152243A; PNU 152243A; Nemorubicin; Nemorubicin; 108852-90-0; Nemorubicin [INN]; Methoxymorpholino-doxorubicin; Methoxymorpholinyl doxorubicin; FCE-23762; Nemorubicin (GMP); 3'-DESAMINO-3'-(2-METHOXY-4-MORPHOLINYL)-DOXORUBICIN; methoxymorpholinyl-doxorubicin; 3′-deamino-3′-[2″(S)-methoxy-4″-morpholinyl]doxorubicin; MMDX

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~65 mg/mL (~101 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (5.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；再将50 μL Tween-80+加入到上述溶液中，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。