Nimbolide   中文名称: 印苦楝内酯

NF-κB; CDK4; CDK6
Nimbolide directly inhibits the kinase activity of Cyclin-dependent kinase 4/6 (CDK4/6), leading to hypophosphorylation of the retinoblastoma (RB) protein. [2]
Nimbolide also inhibits the phosphorylation/activation of Akt, Erk1/2, and STAT3, which are key components of growth factor signaling pathways hyperactivated in glioblastoma. [2]

印楝素（Nimbolide）是一种从印楝叶和花中提取的三萜类化合物，在传统医学中广泛用于治疗多种人类疾病。印楝素具有多种药理作用，其中抗癌活性最为显著。数十年来开展的临床前和机制研究表明，印楝素能够抑制肿瘤发生和转移，且无毒性和不良副作用。印楝素通过选择性调节与炎症、存活、生长、侵袭、血管生成和转移相关的多种细胞信号通路发挥抗癌活性。本综述重点介绍了目前关于印楝素抗癌活性相关分子靶点的最新研究进展，这些靶点包括：(i)抑制致癌物活化并诱导抗氧化酶和致癌物解毒酶的表达；(ii)诱导细胞生长停滞和凋亡。 (iii)抑制与癌症进展相关的促炎信号通路。[1]

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印楝素或印楝叶的乙醇可溶性组分（Azt）以印楝素为主要细胞毒性成分，在体外对多形性胶质母细胞瘤具有高度细胞毒性。Azt可导致细胞周期阻滞，尤其是在表达EGFRvIII（一种存在于约20%至25%多形性胶质母细胞瘤中的癌基因）的多形性胶质母细胞瘤细胞中，阻滞主要发生在G1-S期。Azt/印楝素直接抑制CDK4/CDK6激酶活性，导致视网膜母细胞瘤蛋白磷酸化不足、细胞周期阻滞于G1-S期以及细胞死亡。除了视网膜母细胞瘤低磷酸化外，Azt 还通过下调 Bcl2 并阻断生长因子诱导的 Akt、细胞外信号调节激酶 1/2 和 STAT3 的磷酸化，显著降低了体外胶质母细胞瘤细胞的增殖和存活优势。这些作用具有特异性，因为 Azt 不影响 mTOR 或其他细胞周期调节因子。[2] 本研究旨在探讨印楝素对 MCF-7 和 MDA-MB-231 乳腺癌细胞系中 IGF 信号通路和细胞周期阻滞的影响。采用蛋白质印迹法检测 IGF 信号分子和细胞周期相关蛋白的表达水平。为了研究印楝素对 IGF-1 信号通路的影响，使用 IGF-1 和磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 抑制剂 (LY294002) 处理 MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞。此外，采用流式细胞术分析了细胞周期阻滞情况。在尼姆博利德处理的乳腺癌细胞中，IGF信号分子的蛋白表达显著降低。PI3K抑制剂和IGF-I联合尼姆博利德处理显著抑制了磷酸化Akt的表达。在尼姆博利德处理的乳腺癌细胞系中观察到细胞周期阻滞于G0/G1期，并观察到凋亡细胞的积累。尼姆博利德还增加了两种细胞系中p21蛋白的表达，并降低了细胞周期蛋白的表达。尼姆博利德通过调节IGF信号分子来降低乳腺癌细胞的增殖，这可能对乳腺癌的治疗非常有价值。[3]

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尼姆博利德抑制结直肠癌细胞的增殖，诱导其凋亡，并抑制NF-κB的激活和NF-κB调控的致瘤蛋白的表达。尼姆博利德对NF-κB活化的抑制是通过依次抑制IκB激酶（IKK）活化、IκBα磷酸化和p65核转位实现的。此外，尼姆博利德对IKK活性的影响是直接的。[5] 尼姆博利德在处理20小时后，对一系列人胶质母细胞瘤（GBM）细胞系（包括T98G、A172、U87、U87EGFR、U87EGFRvIII、P9神经球、G2）表现出强效且剂量依赖性的细胞毒性。[2] 表达EGFRvIII癌基因的GBM细胞对尼姆博利德尤其敏感，在10 µM浓度下比其他细胞表现出更高的敏感性。 [2]
尼姆博利德对U87EGFRvIII细胞的IC50值为3.0 µM。[2]
尼姆博利德（作为Azt提取物的一部分）可导致细胞周期阻滞，尤其是在G1/S期，U87EGFRvIII细胞中更为显著。24小时后，超过90%的Azt/尼姆博利德处理的U87EGFRvIII细胞积累在G1期。[2]
尼姆博利德可诱导GBM细胞凋亡，Annexin V染色（U87EGFRvIII细胞中约70%呈阳性）和PARP裂解证实了这一点。[2]
尼姆博利德（和Azt）以时间依赖性方式显著下调抗凋亡蛋白Bcl2的表达。 [2]
尼姆博利德 以剂量依赖的方式强效抑制软琼脂克隆形成实验中胶质母细胞瘤 (GBM) 细胞的锚定非依赖性生长。在 20 µM 浓度下，克隆形成几乎检测不到。[2]
GBM 细胞急性暴露于 Azt/尼姆博利德 1-2 小时后，导致不可逆的生长抑制，即使洗涤后重新接种于无药培养基中，细胞也无法增殖。[2]
尼姆博利德（作为 Azt 的一部分）强烈抑制血清刺激的 GBM 细胞中 Akt、Erk1/2、STAT3 和 RB 的磷酸化，而不影响 mTOR 通路（S6 和 4EBP1 的磷酸化水平不变）。[2]

尼姆博利德在体内抑制胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤生长[2]
\n目前我们已证实，尼姆博利德在体外可显著降低GBM细胞的活力。为了验证尼姆博利德是否能在体内抑制肿瘤生长，我们采用了三种不同的方法。所有体内实验均符合机构和动物护理与使用委员会（IACUC）的指导原则。第一种方法是，我们使用U87EGFRvIII细胞构建侧腹异种移植瘤，并将Azt或EtoH（对照）直接注射到肿瘤床中。第二种方法是，在构建U87EGFRvIII细胞侧腹异种移植瘤后，通过尾静脉（iv）注射尼姆博利德或DMSO（对照）。第三种方法是，将U87EGFRvIII细胞原位接种到Nu/Nu小鼠的皮层中，然后注射尼姆博利德或DMSO（对照）。在第一个模型中，肿瘤生长7天后，分别向小鼠左侧和右侧的肿瘤床内注射62.5 μl的95%乙醇或Azt（0.34 μg/g体重），每隔一天注射一次，持续8天。除肿瘤负荷外，注射乙醇或Azt的小鼠健康状况良好，未出现嗜睡、运动或行为异常。乙醇暴露导致皮肤发红（图6A中肿瘤旁的红色区域）。Azt是从叶片中提取的乙醇溶液，呈深绿色，注射到肿瘤后，肿瘤呈现深绿色（图6A），但组织学分析显示，Azt并未引起肿瘤坏死（图6E、G）。然而，Azt显著抑制了胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤的生长（p = 0.00013）（图6AC）。经过三次注射后，Azt注射组的肿瘤体积比对照组肿瘤体积减少了50%，而在研究结束时，Azt治疗组的肿瘤体积不到对照组肿瘤体积的10%（图6C）。[2]接下来，研究人员检测了全身给药的尼姆博利德是否具有足够的生物利用度，从而对侧腹胶质母细胞瘤（GBM）异种移植瘤的生长产生影响。事实上，与DMSO治疗（对照组）相比，尼姆博利德（10μg/kg体重）对GBM肿瘤的生长具有显著的抑制作用（p < 0.0001）（图7A、B）。在研究结束时（第11天），我们观察到尼姆博利德治疗组动物的肿瘤体积减少了三到四倍。许多临床前药物试验失败的原因在于它们无法以足够的剂量穿过血脑屏障，从而无法对颅内肿瘤产生影响。因此，我们研究了印楝素是否对原位胶质母细胞瘤异种移植瘤有影响。我们使用了三组动物——第一组，我们注射了用慢病毒荧光素酶标记的U87EGFRvIII细胞，每隔一天用DMSO或印楝素（静脉注射）治疗小鼠（每组n=4），并在第14天测量肿瘤生长情况（图7C）。第二组，我们注射了用DsRed标记的U87EGFRvIII细胞，每隔一天用DMSO或印楝素（静脉注射）治疗小鼠（每组n=3），在第14天处死小鼠，并通过测量2 mm厚冠状脑切片中的肿瘤面积来监测肿瘤生长情况（图7D、E）。第三组，我们注射了未标记的U87EGFRvIII细胞，每隔一天用DMSO或印楝素（静脉注射）治疗小鼠（每组n=5），并观察小鼠的生存情况（图7F）。所有动物最终均死亡；然而，生物发光检测（图7C）和脑切片荧光显微镜观察（图7D）显示，印楝素可抑制肿瘤生长并延长小鼠生存期（图7E；Log Rank检验p值为0.017）。通过测量肿瘤面积（图D中黄色轮廓线内的总面积），我们发现印楝素处理组的肿瘤比DMSO处理组的肿瘤小约40%（p值为0.018）。胶质母细胞瘤（GBM）的过度增殖会导致代谢应激，进而导致坏死。印楝素注射组的肿瘤不仅体积更小，而且在对照组肿瘤出现广泛坏死的同一时间点（图7D中的星号所示）未出现坏死。未来的研究需要确定是否可以提高印楝素的剂量以提高其脑生物利用度，以及印楝素的结构修饰是否可以使其更稳定、更具生物利用度并更容易穿过脑组织。我们三种不同的体内研究方法的综合结果表明，术后通过贴片将尼姆博利德应用于肿瘤床，和/或全身性给予安全、优化剂量的尼姆博利德，可能对胶质母细胞瘤（GBM）具有治疗效果。[2]

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\n\n体内实验表明，在肿瘤接种后腹腔注射尼姆博利德（剂量分别为5和20 mg/kg体重）可显著降低结直肠癌异种移植瘤的体积。经柠檬苦素处理的异种移植瘤中，参与肿瘤细胞存活（Bcl-2、Bcl-xL、c-IAP-1、survivin和Mcl-1）、增殖（c-Myc和cyclin D1）、侵袭（MMP-9、ICAM-1）、转移（CXCR4）和血管生成（VEGF）的蛋白表达显著下调。研究发现，柠檬苦素在经治疗小鼠的血浆和肿瘤组织中具有生物利用度。\n\n结论：我们的研究表明，印楝素可通过调节促炎微环境抑制人结直肠癌的生长。[5]

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印楝素（10 µg/kg 体重，静脉注射，每日一次，连续 7 天）与 DMSO 处理的对照组相比，显著抑制了裸鼠侧腹 U87EGFRvIII 异种移植瘤的生长。到第 11 天，观察到肿瘤体积减少了三到四倍。[2]
印楝素（200 µg/kg 体重，腹腔注射，隔日一次）在表达荧光素酶或 DsRed 的 U87EGFRvIII 细胞的原位颅内胶质母细胞瘤异种移植模型中，可减少肿瘤生长并延长生存期。生物发光和荧光成像显示，经治疗的小鼠肿瘤信号和肿瘤面积均有所降低（缩小约40%）。经治疗的小鼠生存期也延长（Log Rank检验p值为0.017）。[2] 每隔一天向小鼠瘤内注射0.34 µg/g体重的Azt提取物（主要成分为印楝素），持续8天，可显著抑制已建立的侧腹胶质母细胞瘤（GBM）的生长，在研究结束时肿瘤体积缩小超过90%。此外，该提取物还降低了肿瘤细胞密度和增殖（Ki67+细胞），并诱导细胞凋亡（cleaved Caspase 3+细胞），同时抑制肿瘤中Akt、Erk1/2和STAT3的磷酸化。[2]

印楝素在人类疾病治疗中发挥着重要作用。近年来，印楝素的抗癌特性日益受到关注。然而，印楝素在非小细胞肺癌（NSCLC）中的作用尚不明确。本研究发现，印楝素以剂量依赖的方式抑制NSCLC细胞的侵袭和迁移。此外，印楝素以剂量依赖的方式抑制ERK1/2的激活，降低Snail和MMP-3的表达，并增加E-cadherin的表达。进一步研究发现，印楝素上调DUSP4的表达。DUSP4敲低减弱了印楝素对细胞侵袭、迁移和ERK1/2激活的抑制作用。我们还发现，DUSP4敲低抑制了印楝素对MMP-3、Snail和E-cadherin表达的影响。综上所述，我们的研究表明，印楝素处理可上调DUSP4的表达，从而抑制ERK1/2的激活。印楝素对ERK1/2通路的抑制作用可降低MMP-3和Snail的表达，并增加E-钙黏蛋白的表达，最终抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞的侵袭和迁移。因此，印楝素可能通过调控ERK1/2信号通路和DUSP4的表达，成为抑制NSCLC侵袭和转移的新型药物。[4]

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ELISA检测[4]
将细胞与印楝素或不与印楝素孵育12小时。将细胞悬液在4℃下以1000 rpm离心10分钟。根据制造商的说明，使用MMP-3 ELISA试剂盒进行ELISA检测。简而言之，将抗MMP-3抗体预先包被于96孔板的每个孔中，然后加入50 μl细胞悬液或参考标准溶液。与二抗孵育2小时后，加入HRP溶液。最后，加入稳定的显色剂，并使用Bio-Rad 680型微孔板读数仪在595 nm处检测OD值。通过与参考标准进行比较来确定MMP-3的浓度。

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CDK4/6活性的非放射性体外激酶活性测定：使用Cyclin D1抗体从U87EGFRvIII细胞裂解液中免疫沉淀CDK4/6。将免疫沉淀物洗涤后，悬浮于激酶测定缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5，5 mM β-甘油磷酸钠，2 mM DTT，0.1 mM Na3VO4，10 mM MgCl2）中。反应在 30°C 下进行 45 分钟，反应体系中加入 GST-RB 融合蛋白（氨基酸残基 736-840）和 250 µM ATP。反应通过加入 Laemmli 缓冲液并煮沸终止。使用磷酸化 RB (Ser807/811) 抗体，通过 Western blot 分析检测 GST-RB 底物的磷酸化。向反应体系中加入 Nimbolide (5, 10, 20 µM) 或 Azt 以检测抑制作用。[2]

非锚定生长[2]
对于非锚定生长实验，将 2 × 10⁴ 个 GBM 细胞与 0.7% 的上层琼脂混合，并铺在含有 20% FCS 和抗生素的 2× DMEM 培养基中配制的 1% 下层琼脂上。每隔三天用含有 EtOH、DMSO（对照）或 Azt、nimbolide（购自 Bio Vision）的培养基喂养细胞，并使其生长两周。用结晶紫染色并成像。使用 ImageJ 软件进行克隆定量。[2]

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Western blot 分析[3]
将细胞（每皿 1 × 10⁶ 个）培养在含有生长培养基的 100 mm 培养皿中，24 小时后，细胞（汇合度 70-80%）用无血清培养基洗涤两次，并在 5 ml 无血清培养基中饥饿培养。饥饿处理后，MCF-7 细胞分别用二甲基亚砜（DMSO，溶剂对照）、2 μM 和 4 μM 的尼姆博利德处理，MDA-MB-231 细胞则用 4 μM 和 6 μM 的尼姆博利德处理。处理 24 小时后，用含有 1X 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的放射免疫沉淀分析 (RIPA) 缓冲液裂解细胞，并采用 Lowry 法测定蛋白浓度。²² 取 50 µg 细胞裂解液进行 12% SDS-PAGE 电泳，然后转移至 PVDF 膜上。将膜与针对 IGF 信号分子、PCNA、c-Myc、p21、细胞周期蛋白和 β-肌动蛋白的一抗在 Tris 缓冲盐溶液中孵育。洗涤后，将膜与HRP标记的抗小鼠IgG（1:5000）和山羊抗兔IgG（1:5000）孵育。使用化学发光系统（ECL试剂盒）检测蛋白条带并进行定量。

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生长因子（IGF-I）、PI3K抑制剂（LY294002）和印楝素处理[3]
将细胞（每皿1 × 10⁶个）培养于含有生长培养基的100 mm培养皿中，24小时后，将细胞（汇合度70-80%）用无血清培养基洗涤两次，并在5 ml无血清培养基中饥饿培养。细胞预先用或不用IGF-I（50 ng ml⁻¹）²³或LY294002（50 μM）处理1小时。预处理后，分别用 2 μM 和 4 μM 的尼姆博利德处理 MCF-7 细胞，用 4 μM 和 6 μM 的尼姆博利德处理 MDA-MB-231 细胞。24 小时后，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞，并进行蛋白质定量。采用蛋白质印迹法分析 pAkt。

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流式细胞仪细胞周期分析[3]
将细胞（每皿 1 × 10⁶ 个）培养于含有生长培养基的 100 mm 培养皿中。饥饿处理后，分别用 2 μM 和 4 μM 的尼姆博利德处理 MCF-7 细胞，用 4 μM 和 6 μM 的尼姆博利德处理 MDA-MB-231 细胞。24 小时后，用 0.25% 胰蛋白酶消化收集细胞，并在 3000×g 下离心 5 分钟。然后，用PBS洗涤细胞。离心后，将细胞固定于100%冰甲醇中，于-20℃过夜。随后，将细胞在含有50 µg ml⁻¹碘化丙啶和1 mg m⁻¹核糖核酸酶的PBS溶液中孵育30分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪进行细胞周期分析，并使用CellQuest Pro软件分析数据。

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细胞活力/细胞毒性检测：用尼姆博利德或溶剂处理特定时间后，采用台盼蓝排除法测定GBM细胞活力。[2]
流式细胞术细胞周期分析：用尼姆博利德（作为Azt的一部分）或对照（EtOH）处理细胞，收集细胞，用70%冰乙醇固定，并重悬于碘化丙啶(PI)/RNase染色缓冲液中。使用流式细胞仪分析DNA含量，以确定细胞周期分布（G1、S、G2/M、Sub G0）。[2]
Annexin V染色凋亡检测：按照标准流程处理、收集细胞并用Annexin V染色，然后使用流式细胞仪进行分析。[2]
锚定非依赖性生长（软琼脂克隆形成）实验：将GBM细胞（2×10⁴）与0.7%上层琼脂混合，并铺于6孔板中1%下层琼脂之上。每隔三天用含印楝素或DMSO（对照）的培养基喂养细胞，并使其生长两周。用结晶紫染色克隆，成像，并使用图像分析软件进行定量。[2]
蛋白质印迹分析：用RIPA裂解缓冲液裂解胶质瘤细胞。蛋白质经SDS-PAGE分离后转移至膜上，并用特异性抗体进行检测，以检测裂解的PARP、Bcl2、磷酸化和总的RB、Akt、Erk1/2、STAT3、S6、4EBP1、细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、p21、p27和肌动蛋白。[2]

体内实验[2]
动物由饲养员每日监测。在侧腹体内异种移植实验中，将1.5 × 10⁶个U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠（nu/nu）的侧腹。在胶质瘤起始实验中，细胞预先用乙醇（EtOH，对照组）或Azt处理1小时后注射到小鼠侧腹。小鼠不再接受任何乙醇或Azt注射。在胶质瘤进展实验中，注射相同数量的未处理细胞，并允许肿瘤生长7天。之后，分别向小鼠左侧和右侧的肿瘤床内直接注射62.5 μl 95%乙醇或Azt（0.34 μg/g体重），每隔一天注射一次，持续8天。为了研究尼姆博利德的全身作用，我们将1.5 × 10⁶个U87EGFRvIII细胞注射到nu/nu小鼠的侧腹部，待肿瘤接种三天后，每天用尼姆博利德（10μg/kg体重，静脉注射）或溶剂（DMSO）治疗小鼠，连续治疗七天。每隔一天测量一次肿瘤体积，并使用公式π/6 × A × B²（A = 长径；B = 短径）来监测肿瘤生长。将肿瘤切除后，使用iPAD 3进行成像。对于颅内异种移植实验，将U87EGFRvIII细胞感染表达萤火虫荧光素酶的LeGo-Cer2慢病毒或表达DsRed荧光报告基因的慢病毒。将1 × 10⁵个细胞（未标记或已标记，取决于实验分组——见结果）通过立体定位仪注射到雄性nu/nu小鼠的大脑皮层（距前囟尾侧2 mm；中线右侧2 mm；深度3 mm）。肿瘤接种三天后，小鼠接受尼姆博利德（nimbolide，200 μg/kg体重，腹腔注射）或载体（DMSO）治疗。所有动物均进行两次成像：第一次在肿瘤接种后三天，治疗开始前，以确保它们具有相似的初始信号；第二次在第14天。成像前五分钟，小鼠麻醉后腹腔注射荧光素（150 mg/kg），并使用IVIS（Xenogen）成像系统进行成像。观察到嗜睡和/或神经系统症状后，所有小鼠均被安乐死。对于DsRed标记的肿瘤，解剖2 mm厚的冠状脑切片，并使用Image J软件测量肿瘤面积。

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侧腹异种移植瘤 - 瘤内注射（含印楝素的Azt提取物）：** 将U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠侧腹。待肿瘤生长7天后，分别将62.5 µL 95%乙醇（对照）或Azt提取物（剂量为0.34 µg/g体重）直接注射到左右侧腹的肿瘤床中，每隔一天注射一次，持续8天。每隔一天使用游标卡尺测量肿瘤体积。[2]
**侧腹异种移植瘤 - 全身给药（纯化的印楝素）：** 将U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠侧腹。肿瘤接种三天后，动物每天接受**nimbolide**（10 µg/kg 体重，静脉注射）或载体（DMSO）治疗，持续七天。通过测量肿瘤体积监测肿瘤生长。[2]
**原位颅内异种移植 - 全身给药：** 使用立体定位装置将表达萤火虫荧光素酶或 DsRed 荧光蛋白的 U87EGFRvIII 细胞注射到裸鼠大脑皮层。肿瘤接种三天后，小鼠每隔一天接受**nimbolide**（200 µg/kg 体重，腹腔注射）或载体（DMSO）治疗。通过生物发光成像（注射荧光素后）或测量荧光脑切片中的肿瘤面积来监测肿瘤生长。监测生存情况。 [2]

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侧腹异种移植瘤 - 瘤内注射（含尼姆博利德的Azt提取物）：将U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠侧腹。待肿瘤生长7天后，分别向左侧和右侧肿瘤床内直接注射62.5 µL 95%乙醇（对照组）或Azt提取物（剂量为0.34 µg/g体重），每隔一天注射一次，持续8天。每隔一天使用游标卡尺测量肿瘤体积。[2]
侧腹异种移植瘤 - 全身给药（纯化尼姆博利德）：将U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠侧腹。待肿瘤接种3天后，每天对动物进行尼姆博利德（10 µg/kg体重，静脉注射）或溶剂（DMSO）治疗，持续7天。通过测量肿瘤体积来监测肿瘤生长。[2]
原位颅内异种移植 - 全身给药：使用立体定位装置将表达萤火虫荧光素酶或DsRed荧光蛋白的U87EGFRvIII细胞注射到裸鼠的大脑皮层。肿瘤接种三天后，小鼠每隔一天接受nimbolide（200 µg/kg体重，腹腔注射）或载体（DMSO）。通过生物发光成像（注射荧光素后）或测量荧光脑切片中的肿瘤面积来监测肿瘤生长。同时监测小鼠的生存情况。[2]

通过高效液相色谱法（HPLC）分析，在接受治疗的小鼠的血浆和肿瘤组织中均可检测到尼姆博利德。血浆浓度分别为222 ng/mL（5 mg/kg）和409 ng/mL（20 mg/kg）。肿瘤组织浓度分别为345 ng/g（5 mg/kg）和868 ng/g（20 mg/kg）。

[5]

在引用的文献中，印楝叶提取物（Azt）在啮齿动物急性毒性研究中的LD50为4.57 mg/g体重。[2]
在侧腹异种移植瘤试验中，瘤内注射印楝叶提取物后，小鼠外观健康，除肿瘤负荷外，未出现嗜睡、运动障碍或行为异常。乙醇注射部位出现皮肤发红，印楝叶提取物注射部位出现深绿色（来自提取物），但未引起肿瘤坏死。[2]
在所描述的小鼠研究中，全身给药的印楝素（nimbolide）在所用剂量（每日静脉注射10 µg/kg，隔日腹腔注射200 µg/kg）下未见明显毒性。[2]

[1]. Chemopreventive and therapeutic effects of nimbolide in cancer: the underlying mechanisms. Toxicol In Vitro. 2014 Aug;28(5):1026-35.

[2]. Direct inhibition of retinoblastoma phosphorylation by nimbolide causes cell-cycle arrest and suppresses glioblastoma growth. Clin Cancer Res. 2014 Jan 1;20(1):199-212.

[3]. lumalai P, Arunkumar R, Benson CS, Sharmila G, Arunakaran J. Nimbolide inhibits IGF-I-mediated PI3K/Akt and MAPK signalling in human breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231). Cell Biochem Funct. 2014 Jul;32(5):476-84.

[4]. Lin H, Qiu S, Xie L, Liu C, Sun S. Nimbolide suppresses non-small cell lung cancer cell invasion and migration via manipulation of DUSP4 expression and ERK1/2 signaling. Biomed Pharmacother. 2017 Aug;92:340-346.

[5]. Gupta SC, Prasad S, Sethumadhavan DR, Nair MS, Mo YY, Aggarwal BB. Nimbolide, a limonoid triterpene, inhibits growth of human colorectal cancer xenografts by suppressing the proinflammatory microenvironment. Clin Cancer Res. 2013 Aug 15;19(16):4465-76.

甲基 2-[(1R,2S,4R,6R,9R,10S,11R,15R,18R)-6-(呋喃-3-基)-7,9,11,15-四甲基-12,16-二氧代-3,17-二氧杂戊烷[9.6.1.02,9.04,8.015,18]十八碳-7,13-二烯-10-基]乙酸酯已被报道，并有相关数据。

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印楝内酯是一种四降三萜类化合物（柠檬苦素类化合物），是印度楝（Azadirachta indica，又名印楝）乙醇可溶性叶提取物的主要细胞毒性成分，本研究中简称Azt。[2]
它含有一个α,β-不饱和酮体系和一个δ-内酯环，这些结构与其抗癌特性相关。 [2]
该研究揭示了一种新的机制，即尼姆博利德直接抑制 CDK4/6 激酶活性，导致 RB 低磷酸化和 G1/S 细胞周期阻滞，尤其是在表达 EGFRvIII 癌基因的胶质母细胞瘤 (GBM) 细胞中。[2]
除 RB 外，尼姆博利德还能下调 Bcl2，并抑制多种过度激活的生长因子通路（PI3K-Akt、MAPK-Erk1/2、JAK-STAT3），这些通路对 GBM 细胞的增殖和存活至关重要。[2]
尼姆博利德的细胞毒性作用在急性暴露后是不可逆的。 [2]
尼姆博利德在体外对胶质母细胞瘤细胞的细胞毒性高于几种标准化疗药物和激酶抑制剂，包括替莫唑胺、依托泊苷、喜树碱、丝裂霉素C、雷帕霉素、PP242和BEZ235。[2]
该研究表明，尼姆博利德具有进一步开发为胶质母细胞瘤治疗药物的潜力，可能通过局部应用（例如，术后使用片剂）或全身给药（如果能提高其生物利用度）。[2]

C27H30O7

466.52300

466.199

C, 69.51; H, 6.48; O, 24.01

25990-37-8

25990-37-8

12313376

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

608.6±55.0 °C at 760 mmHg

321.9±31.5 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.597

2.66

92.04

0

7

4

34

1040

9

CC1=C2C(C[C@H]1C3=COC=C3)O[C@@H]4[C@H]5C6[C@@](C)(C=CC(=O)[C@]6(C)[C@@H](CC(=O)OC)[C@]24C)C(=O)O5

JZIQWNPPBKFOPT-LSYMHUITSA-N

InChI=1S/C27H30O7/c1-13-15(14-7-9-32-12-14)10-16-20(13)27(4)17(11-19(29)31-5)26(3)18(28)6-8-25(2)22(26)21(23(27)33-16)34-24(25)30/h6-9,12,15-17,21-23H,10-11H2,1-5H3/t15-,16-,17-,21-,22+,23-,25-,26+,27-/m1/s1

methyl 2-[(1R,2S,4R,6R,9R,10S,11R,15R,18R)-6-(furan-3-yl)-7,9,11,15-tetramethyl-12,16-dioxo-3,17-dioxapentacyclo[9.6.1.02,9.04,8.015,18]octadeca-7,13-dien-10-yl]acetate

Nimbolide; 25990-37-8; Nimbolide?; NSC-309909; CHEMBL426690; N993G4LGD6; SCHEMBL2146198; DTXSID20948894;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~107.18 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。