Nitecapone   中文名称: 硝替卡朋

Catechol-O-methyltransferase (COMT) inhibitor [1]
Xanthine oxidase (competitive inhibitor, \(K_i = 8.8 \mu M\)) [1]

当使用尼替卡朋（1–100 μM）时，ROO诱导的GSH（还原型谷胱甘肽）消耗量降低11–38%，氧化为氧化型谷胱甘肽（GSSG）的量降低32–45%[1]。

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以2的化学计量比清除溶液中的过氧自由基（ROO•）（使用AAPH作为自由基引发剂和B-藻红蛋白作为报告剂，通过荧光法测定）[1]
清除DOPC脂质体膜中的过氧自由基（使用AMVN作为自由基引发剂的鲁米诺增强化学发光测定；半数抑制浓度为0.5 μM）[1]
抑制AMVN诱导的大鼠心脏微粒体脂质过氧化（TBARS测定；TBARS生成量呈浓度依赖性降低）[1]
清除超氧阴离子自由基(O₂⁻•) 的二级动力学速率常数为 \(1.0 \times 10^4 \mathrm{M}^{-1}\mathrm{s}^{-1}\)（通过在 DMSO/NaOH 体系中与细胞色素 c 还原竞争测定）[1]
清除羟基自由基 (HO•)（用 DMPO 进行 ESR 自旋捕获；在 Fenton 反应体系中，300 μM 时 DMPO-OH 信号抑制 50%）[1]
与抗坏血酸氧化产物相互作用，参与维生素 E 的循环利用：不直接还原紫外线照射产生的维生素 E 自由基（色满氧自由基），但当抗坏血酸耗尽时，可由抗坏血酸氧化产物生成半脱氢抗坏血酸自由基；抗坏血酸可保护尼替卡朋免受强紫外线照射下的氧化降解[1]

接受脊神经结扎术（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续13天）的大鼠，其神经性疼痛的发生和症状均有所减轻[3]。

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在雄性Wistar大鼠的脊神经结扎（SNL）神经性疼痛模型中：
- 术前治疗（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，术前1小时开始，持续14天）显著降低了同侧爪的机械性痛觉过敏（缩爪阈值比对照组高80-95%）和冷痛觉过敏（对丙酮的反应减少）[3]
- 术后治疗（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，术后第2天开始，持续20天）也显著降低了机械性痛觉过敏（从第6天开始）和冷痛觉过敏，与溶媒组相比[3]
- 术后第14天单次腹腔注射尼卡朋（30 mg/kg）未接受过尼卡朋治疗的动物，其机械性痛觉过敏症状在给药后180分钟和240分钟时阈值升高，但对冷觉痛觉过敏无影响；术后第2天未观察到急性效应[3]
- 停止14天预处理后，抗痛觉过敏作用持续数天（直至术后第19天）[3]

溶液中过氧自由基清除（荧光法）：使用水溶性偶氮引发剂（AAPH）生成过氧自由基。在40℃的Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中监测β-藻红蛋白的荧光（激发波长540 nm，发射波长575 nm）。测量尼替卡朋抑制荧光损失的滞后期，以计算其相对于Trolox的化学计量因子（已知因子为2）。[1]
- 膜中过氧自由基清除（化学发光法）：将AMVN与尼替卡朋一起包封于DOPC脂质体中。在40℃下监测鲁米诺增强的化学发光。测定抑制50%化学发光所需的尼替卡朋浓度。 [1]
- 脂质过氧化（TBARS 法）：将大鼠心脏微粒体（2.5 mg 蛋白/mL）在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中与 AMVN（2.5 mM）和不同浓度的尼特卡朋于 42°C 孵育。取等分试样与 TCA/TBA 和丁基羟基甲苯混合，于 100°C 加热 20 分钟，离心，并在 535 nm 处测定吸光度。摩尔消光系数为 \(1.56 \times 10^{-5} \mathrm{M}^{-1}\mathrm{cm}^{-1}\)。[1]
- 黄嘌呤氧化酶活性测定：在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中，于 25°C 下，通过监测 295 nm 处的尿酸生成量来测定黄嘌呤氧化酶活性。在有无尼卡朋 (10 μM) 存在下测定米氏常数，采用 Lineweaver-Burk 双倒数作图法。抑制常数 (K_i) 使用公式 K_m(有抑制剂) = K_m(无抑制剂) × (1 + [I] · K_i^-1) 计算。[1]
- 超氧自由基清除活性（细胞色素 c 竞争）：超氧自由基由碱性 DMSO 产生（DMSO 含 1% 水和 5 mM NaOH，25°C 孵育 30 分钟）。将不同浓度的尼卡朋、20 μM 细胞色素 c 和 100 μM EDTA 溶于磷酸盐缓冲液 (pH 8.6) 中，4°C 孵育 20 分钟，然后加入碱性 DMSO。在 550 nm 处测定细胞色素 c 的还原情况。利用已知的细胞色素c与O₂⁻•的速率常数（\(2.6 \times 10^{5} \mathrm{M}^{-1}\mathrm{s}^{-1}\)），计算了尼特卡朋与O₂⁻•的双分子动力学速率常数。[1]
- 羟基自由基清除（ESR自旋捕获）：在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中，通过Fenton反应（200 μM FeSO₄ + 2 mM H₂O₂）生成羟基自由基。使用DMPO（150 μM）作为自旋捕获剂。反应开始3分钟后记录ESR谱。DMPO-OH加合物的超精细分裂常数为\(a^H = 14.8\) G（两者）。测定了尼特卡朋的抑制百分比。 [1]
- 维生素E循环利用（ESR检测色满氧自由基）：将色满醇-α-C6（维生素E同系物，20 mM）溶于DOPC脂质体（20 mg/mL）中，置于磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中，并在25°C下用紫外光（310 nm，1.5 mW/cm²）照射。在氧气氛围下记录ESR谱图。单独或与色满醇一起加入尼替卡朋（2 mM）。为测试与抗坏血酸的相互作用，在色满氧自由基生成后加入抗坏血酸（20 μM），然后再加入尼替卡朋（20 μM）。监测半脱氢抗坏血酸自由基的信号。 [1]
- 尼替卡朋光氧化（分光光度法）：将尼替卡朋 (15 μM) 或抗坏血酸 (15 μM) 单独或共同溶于含有 DETAPAC (20 μM) 的磷酸盐缓冲液 (pH 7.4) 中，并在氧饱和条件下暴露于紫外光 (310 nm，29.4 mW/cm²)。在不同时间点记录 200 至 600 nm 的吸收光谱。[1]
COMT 活性测定：解剖组织（纹状体、肝脏、前额叶皮层、脊髓节段 L1-2、L3-4、L5-6 和腰椎感觉神经节），并储存于 -80°C。将酶制剂在含有 5 mM MgCl₂、200 μM S-腺苷-L-蛋氨酸和 500 μM 3,4-二羟基苯甲酸的 100 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中于 37°C 孵育。反应产物（香草酸和异香草酸）采用高效液相色谱-电化学检测法进行分析。流动相：0.1 M Na₂HPO₄（pH 3.3）、0.15 mM EDTA、25% 甲醇，流速 0.8 mL/min。COMT 活性以每分钟每毫克蛋白质生成的香草酸皮摩尔数表示。[3]

动物/疾病模型： 86只雄性Wistar大鼠，体重140-350克[3]。
剂量： 30毫克/公斤（3.3毫升/公斤）。
给药方式： 腹腔注射，每日一次，连续13天。
实验结果： 选择性且特异性地抑制外周组织以及一定程度的中枢神经系统（CNS）中的COMT，抑制作用持续约10分钟至3小时。提高机械刺激阈值，从而减轻机械性痛觉过敏。与基线相比，接受尼卡朋预处理的大鼠同侧爪的阳性反应数量减少。

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大鼠脊神经结扎（SNL）模型：雄性Wistar大鼠（140-350 g）用异氟烷（诱导浓度4.5%，维持浓度2-3%）麻醉。切除一小块椎旁肌肉和部分L5椎体左侧棘突，暴露左侧L5和L6脊神经，小心地将其与L4神经分离，并用6-0丝线紧密结扎。肌肉和筋膜用缝线缝合，皮肤用金属夹固定。出现运动并发症或体重减轻的动物被处死。 [3]
- 药物给药 - 术前研究：术前1小时开始，腹腔注射（ip）尼特卡朋（30 mg/kg）或赋形剂（0.5%羧甲基纤维素，CMC），剂量为3.3 mL/kg，之后每日一次，持续13天。术后第14天，两组均接受单次尼特卡朋给药。在一个亚组中，治疗方案交叉4天（尼特卡朋→CMC，CMC→尼特卡朋）。术前及术后每隔一天进行行为学测试，测试时间为给药前1小时。[3]
- 药物给药 - 术后研究：术后第2天开始，腹腔注射（ip）尼特卡朋（30 mg/kg）或赋形剂（0.5% CMC），每日一次，持续20天。术前及术后每隔一天进行行为学测试，测试时间为给药前1小时。 [3]
- 急性效应评估：术后第2天（未接受过尼特卡朋治疗的大鼠）和术后第14天（尼特卡朋预处理组和未接受过尼特卡朋治疗的大鼠），在单次腹腔注射尼特卡朋（30 mg/kg）前以及注射后1、2、3和4小时进行行为学测试。[3]
- 机械性痛觉过敏测试（von Frey）：将大鼠置于透明塑料笼下的金属网格上。将连接数字测力计的金属单丝（尖端直径0.5 mm）施加于大鼠足底1秒。记录足以引起反应（快速缩足、抬脚或舔舐）的力。双爪分别测量两次阈值，间隔1分钟。 [3]
- 冷觉过敏试验（丙酮试验）：将一滴丙酮滴在爪底。记录五次试验中快速缩爪反应的次数。每隔一分钟测量一次，分别测量双侧后爪。[3]

辛醇/水分配系数：log P = 1.21 [1]
雄性Wistar大鼠腹腔注射30 mg/kg尼特卡朋后：肝脏和纹状体中的COMT活性在30、60和180分钟时显著降低；抑制作用在30-60分钟之间达到峰值。末次给药后24小时，COMT活性恢复至对照水平（各治疗组之间无差异）。[3]

[1]. Antioxidant properties of nitecapone (OR-462). Free Radic Biol Med. 1992 Nov;13(5):517-25.

[2]. Nitecapone: a nitric oxide radical scavenger. Biochemistry and Molecular Biology International, 01 Oct 1994, 34(3):531-541.

[3]. Nitecapone reduces development and symptoms of neuropathic pain after spinal nerve ligation in rats. Eur J Pain. 2011 Aug;15(7):732-40.

尼替卡朋是一种羟基肉桂酸。

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尼替卡朋[3-(3,4-二羟基-5-硝基苯基)亚甲基-2,4-戊二酮] (OR-462) 是一种新型儿茶酚-O-甲基转移酶 (COMT) 抑制剂，具有胃保护作用。其抗氧化特性是近期发现的。[1]
- 尼替卡朋具有显著的抗氧化能力：清除过氧自由基，抑制脂质过氧化，抑制黄嘌呤氧化酶（竞争性抑制，K_i = 8.8 μM），清除超氧自由基和羟自由基，并通过与抗坏血酸相互作用参与维生素E的循环利用。这些特性表明，它可能是一种有效的治疗性抗氧化剂，或许可以与其他抗氧化剂联合使用。 [1]
在SNL模型中，尼特卡朋的抗痛觉过敏作用持续时间长，远远超过COMT抑制的持续时间（停药后作用仍持续数天）。这提示其作用机制可能不仅限于COMT抑制，还可能涉及抗氧化特性或长效的有益过程。尼特卡朋的近缘衍生物恩他卡朋已在临床上用于治疗帕金森病，且耐受性良好，血脑屏障穿透性差。有必要对COMT抑制剂在神经性疼痛治疗中的应用进行进一步研究。[3]

C12H11NO6

265.221

265.059

116313-94-1

5464105

Light yellow to yellow solid powder

1.451g/cm3

495.3ºC at 760 mmHg

211.6ºC

1.95E-10mmHg at 25°C

1.645

2.09

120.42

2

6

3

19

408

0

UPMRZALMHVUCIN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H11NO6/c1-6(14)9(7(2)15)3-8-4-10(13(18)19)12(17)11(16)5-8/h3-5,16-17H,1-2H3

3-(3,4-Dihydroxy-5-nitrobenzylidene)-2,4-pentanedione

Nitecapone OR 462 OR462OR-462

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~188.52 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。