Notoginsenoside Fc

目录号: V34350 纯度: ≥98%
三七皂苷 Fc 是从三七叶中提取的原卟啉二醇 (PPD-) 型皂苷,可有效对抗血小板聚集。
Notoginsenoside Fc CAS号: 88122-52-5
产品类别: Natural Products
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
三七皂苷Fc是从三七叶中提取的一种原卟啉二醇(PPD)型皂苷,能够有效抑制血小板聚集。三七皂苷Fc可通过促进自噬,促进糖尿病大鼠血管损伤后的内皮细胞再生。
三七皂苷Fc是一种从三七叶中分离得到的新型原人参二醇(PPD)型皂苷,能够有效抑制血小板聚集。其他源自三七的皂苷也与心血管病理生理学有关。三七皂苷Fc作为一种民间药物或膳食补充剂,具有多种药理活性。然而,关于其对内皮再生的影响及其潜在机制的信息仍然有限。[1]
生物活性&实验参考方法
靶点
Autophagy-related proteins (Beclin 1, LC3B, p62). [1]
体外研究 (In Vitro)
人参皂苷Fc(20 μM;处理24小时)可显著增加RAOECs中Beclin 1和LC3B的表达,同时降低p62的表达[1]。在高糖(HG,30 mM D-葡萄糖)条件下,人参皂苷Fc(20 μM,处理24小时)可抑制大鼠主动脉内皮细胞(RAOECs)中高糖诱导的自噬减少。Western blot和RT-qPCR分析显示,高糖处理降低了LC3B和Beclin 1的蛋白和mRNA表达,并增加了p62的水平。与高糖组相比,Fc处理显著上调了LC3B和Beclin 1的表达,并下调了p62的表达。 [1]
利用mRFP-eGFP-LC3B质粒转染和共聚焦显微镜观察,高糖(HG)处理降低了黄色斑点(自噬体)和红色斑点(自溶酶体)的数量。预先用三七皂苷Fc(20 µM)处理后再进行高糖处理,可增加黄色斑点的数量,而红色斑点的数量与单独进行高糖处理相比无明显差异。[1]
透射电镜观察显示,高糖处理的RAOEC细胞中出现小液泡;预先用Fc(20 µM)处理细胞后,自噬体的数量增加。[1]
细胞周期进程分析表明,高糖导致更多RAOEC细胞停滞在G1期;三七皂苷Fc(20 µM)通过逆转这一变化促进细胞增殖。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mM,2 h)预处理可降低这种效应。增殖细胞核抗原(PCNA)的Western blot分析显示,高糖(HG)处理组细胞中PCNA表达降低;三七皂苷Fc可增加PCNA表达,而3-MA可降低PCNA表达。[1]
伤口愈合实验表明,高糖显著降低了RAOEC细胞的迁移能力;三七皂苷Fc(20 µM)在高糖条件下可促进细胞迁移。加入3-MA(5 mM,2 h)后,细胞迁移能力降低。NG组、NG+Fc组和NG+Fc+3-MA组的细胞增殖和迁移能力无显著差异。[1]
体内研究 (In Vivo)
在糖尿病Sprague-Dawley大鼠(200±20 g)颈动脉损伤后,三七皂苷Fc(3.5 mg/kg/天)可防止新生内膜过度增生并加速内皮再生[1]。
在链脲佐菌素(60 mg/kg,腹腔注射)诱导的糖尿病Sprague-Dawley大鼠中,颈动脉钢丝损伤后,灌胃给予三七皂苷Fc(3.5 mg/kg/天)可加速内皮再生。损伤后14天和28天的伊文思蓝染色显示内皮再生率:糖尿病组第14天为47.8±9.2%,第28天为64.4±4.8%; DM+Fc组在第14天和第28天的新生内膜形成率分别为75.9±8.7%和85±9.3%。对照组(非糖尿病损伤)大鼠在第14天和第28天的新生内膜形成率分别为80.5±5.8%和90.2±3.5%。[1]
三七皂苷Fc抑制了过度新生内膜的形成。损伤后14天的苏木精-伊红染色显示,糖尿病显著增加了新生内膜增生。与对照组相比,DM组的新生内膜面积和新生内膜/中膜面积比值显著增加;Fc治疗(DM+Fc组)减轻了这些变化。各组间中膜面积无显著差异。新生内膜增生面积与内皮再生率呈负相关。 [1]
损伤后14天的免疫组织化学结果显示,Beclin 1蛋白主要存在于内膜中。与对照组相比,DM组中Beclin 1阳性细胞数量减少;人参皂苷Fc治疗显著改善了受损动脉中Beclin 1的表达。[1]
细胞实验
细胞培养:将RAOECs细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃、5% CO2培养箱中培养。使用传代4-6代细胞。细胞分为以下几组:正常葡萄糖组(NG,5.6 mM D-葡萄糖);NG+Fc组(20 µM Fc,处理24 h);高葡萄糖组(HG,30 mM D-葡萄糖,处理24 h);HG+Fc组(30 mM D-葡萄糖 + 20 µM Fc,处理24 h)。为抑制自噬,细胞预先用5 mM 3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理2 h。[1]
细胞增殖实验:将RAOECs细胞接种于96孔板(1×10⁴个细胞/孔)。待细胞汇合度达到70-80%后,用相应的药物处理24 h。使用细胞周期测定试剂盒进行细胞周期分析。每个实验至少独立重复三次。[1]
伤口愈合实验:将RAOECs接种于6孔板(5×10⁵个细胞/孔),培养24小时至70-80%汇合度。停止血清培养12小时后,使用P-20移液器划出三道划痕。细胞在指定处理条件下孵育24小时,并拍照以测量间隙变化。[1]
使用mRFP-eGFP-LC3B质粒监测自噬通量:将RAOECs接种于玻璃底培养皿中。在细胞汇合度达到80%时,将4 µg质粒溶解于Opti-MEM低血清培养基中,并使用Lipofectamine 2000与脂质体混合。将混合物加入细胞中,4-6小时后更换为含血清培养基。 48 小时后,用 4% 多聚甲醛固定细胞 20 分钟,PBS 洗涤,并用 DAPI 染色 15 分钟。使用共聚焦显微镜观察样品。每个实验随机选取至少 8 个细胞计数红色和黄色斑点。[1]
透射电镜:将 RAOEC 细胞在 4°C 下用戊二醛固定。经乙醇脱水和环氧树脂包埋后,制备超薄切片,用醋酸铀和柠檬酸铅染色,并在电子显微镜下观察。[1]
RT-qPCR:使用 TRIzol 试剂提取总 RNA。测定 RNA 浓度后,使用 PrimeScript RT 试剂盒将其反转录为 cDNA。使用 SYBR Premix Ex Taq 和针对 LC3B、Beclin 1、p62 和 GAPDH(内参)的引物进行 PCR。 mRNA 相对表达量以 GAPDH 为内参进行标准化,并以 2^(-ΔΔCt) 值表示。[1]
Western blot 分析:将颈动脉或细胞用含 0.5 mM 苯甲基磺酰氟 (PMSF) 的细胞裂解缓冲液裂解。离心(12,000 rpm,15 分钟,4°C)后,采用 BCA 蛋白定量法测定蛋白浓度。取等量蛋白进行 SDS-PAGE 电泳分离,并将蛋白转移至 PVDF 膜上。室温下,用 5% 脱脂奶粉(溶于 TBST 缓冲液)封闭膜 2 小时;4°C 下,用一抗(1:500-1:1000 稀释)孵育过夜;随后,室温下,用 HRP 标记的二抗(1:5000)孵育 1 小时。采用增强化学发光法检测蛋白条带。使用了针对 LC3B、p62、Beclin 1、PCNA 和 β-actin 的抗体。[1]
动物实验
动物模型:雄性Sprague-Dawley大鼠(200±20 g)随机分为四组:假手术组、对照组(损伤后非糖尿病组)、糖尿病组(DM组)和DM+Fc组(每组n=12)。糖尿病模型通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg诱导,注射前禁食12小时。分别于第3天和第7天从尾静脉采集空腹血糖进行检测;空腹血糖>16.7 mmol/L表明糖尿病模型构建成功。[1]
颈动脉损伤:模型构建成功后,动物禁食12小时,然后进行导丝损伤。将2F球囊导管经左侧颈外动脉插入颈总动脉,并以2个大气压的压力充气三次。损伤后,结扎颈外动脉,恢复血流。 DM+Fc组开始灌胃给予3.5 mg/kg/d的三七皂苷Fc,直至处死。其他三组给予相同剂量的生理盐水。[1]
伊文思蓝染色:损伤后14天和28天,麻醉后向左侧股静脉注射0.5%伊文思蓝染料,评估内皮再生情况。将组织纵向切开,用PBS洗涤,用4%多聚甲醛固定,并拍照。使用ImageJ软件测量去内皮区域(蓝色染色)。分别于损伤前(0天)、损伤后14天和28天测量大鼠的血糖水平。[1]
HE染色:损伤后28天,取出大鼠动脉,用4%多聚甲醛固定24-48小时,然后进行石蜡包埋。将厚度为 3-5 mm 的切片脱蜡、染色、显微镜检查并拍照。计算新生内膜和中膜面积:新生内膜面积 = 内弹力膜面积 - 管腔面积;中膜面积 = 外弹力膜面积 - 内弹力膜面积。[1]
免疫组织化学:损伤后 14 天,取出动脉,包埋于 OCT 化合物中,液氮速冻,储存于 -80°C。从损伤的颈动脉(4 mm)上每隔 500 μm 切取 7 µm 厚的切片,并用 HE 染色进行免疫组织化学染色。样本先用兔抗 Beclin 1 抗体进行免疫染色,然后用 HRP 标记的抗兔 IgG 聚合物进行免疫染色,最后用 3,3-二氨基联苯胺显色。[1]
参考文献

[1]. Notoginsenoside Fc Accelerates Reendothelialization following Vascular Injury in Diabetic Rats by Promoting Endothelial Cell Autophagy. J Diabetes Res. 2019 Sep 3;2019:9696521.

其他信息
已有报道指出,人参皂苷Fc存在于日本人参和三七中,相关数据可供参考。
三七皂苷Fc(分子式C58H98O26,分子量1211.4 Da,纯度≥98%)是从三七叶中分离得到的一种新型皂苷,属于原人参二醇(PPD)型皂苷。本研究首次报道了Fc在体外高糖条件下促进内皮细胞增殖和迁移,并通过促进自噬加速糖尿病大鼠体内内皮再生。研究结果表明,Fc可能对糖尿病相关血管疾病(例如外周血管疾病)干预后的早期内皮损伤和再狭窄具有治疗作用。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C58H98O26
分子量
1211.3831
精确质量
1210.634
CAS号
88122-52-5
PubChem CID
75412556
外观&性状
Off-white to light yellow solid
密度
1.47±0.1 g/cm3
折射率
1.631
LogP
6.6
tPSA
415.98
氢键供体(HBD)数目
16
氢键受体(HBA)数目
26
可旋转键数目(RBC)
17
重原子数目
84
分子复杂度/Complexity
2210
定义原子立体中心数目
33
SMILES
C[C@@]12CC[C@H]([C@](C)(CC/C=C(\C)/C)O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]4OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)O3)[C@H]1[C@H](O)C[C@@H]1[C@]3(CC[C@H](O[C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O[C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O[C@@H]4OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)C(C)(C)[C@@H]3CC[C@@]21C)C
InChi Key
XBGLCVZQMWKHFC-NMQALWILSA-N
InChi Code
InChI=1S/C58H98O26/c1-24(2)10-9-14-58(8,84-51-46(74)41(69)40(68)31(80-51)23-77-49-44(72)36(64)27(62)21-75-49)25-11-16-57(7)35(25)26(61)18-33-55(5)15-13-34(54(3,4)32(55)12-17-56(33,57)6)81-52-47(42(70)38(66)29(19-59)78-52)83-53-48(43(71)39(67)30(20-60)79-53)82-50-45(73)37(65)28(63)22-76-50/h10,25-53,59-74H,9,11-23H2,1-8H3/t25-,26+,27+,28+,29+,30+,31+,32-,33+,34-,35-,36-,37-,38+,39+,40+,41-,42-,43-,44+,45+,46+,47+,48+,49-,50-,51-,52-,53-,55-,56+,57+,58-/m0/s1
化学名
(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2S)-2-[(3S,5R,8R,9R,10R,12R,13R,14R,17S)-3-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-6-methylhept-5-en-2-yl]oxy-6-[[(2S,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxymethyl]oxane-3,4,5-triol
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~82.55 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.8255 mL 4.1275 mL 8.2550 mL
5 mM 0.1651 mL 0.8255 mL 1.6510 mL
10 mM 0.0826 mL 0.4128 mL 0.8255 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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