| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Chloride channels (specifically, outwardly rectifying chloride channel (ORCC) and voltage-gated chloride channel 3 (CLC-3) in glioma cells) NPPB blocks these channels. [1][2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
NPPB (0.1 mM) 可使通道开放概率从 0.89±0.06 降低至 0.11±0.04[1]。NPPB 的浓度（IC50=125 μM）取决于电流。NPPB 本身对神经胶质瘤细胞也表现出细胞毒性，其 GI50 约为 500 μM [2]。NPPB 以剂量依赖的方式阻断 U373MG 人胶质瘤细胞中的氯离子电流，抑制 +120 mV 峰值电流的 IC50 为 125 μM。它是一种非特异性氯离子通道阻滞剂。 [2] 在急性分离的大鼠海马CA1锥体神经元中，向浴液中添加NPPB（0.1 mM）可使外向整流氯离子通道（ORCC）的开放概率从0.89 ± 0.06降低至0.11 ± 0.04（n=5，P<0.01）（膜片钳记录）。[1] NPPB本身对人胶质瘤细胞（U373MG、U87MG、LN18）和小鼠小胶质细胞BV-2具有细胞毒性。U373MG、U87MG、LN18和BV-2细胞的GI50值分别约为542 μM、653 μM、571 μM和423 μM。 [2] NPPB抑制U373MG人胶质瘤细胞的迁移和侵袭。在伤口愈合实验中，NPPB降低了细胞迁移率。在Matrigel侵袭实验中，NPPB显著减少了侵袭细胞的数量。[2] 彗星试验表明，NPPB本身不会诱导DNA双链断裂，彗星尾DNA百分比或彗星尾矩均未显著增加。[2] 与TMZ-NPPB相比，单独使用NPPB（287 μM，48 h）诱导的U373MG细胞死亡比例较低，主要发生在早期和晚期凋亡阶段，这通过流式细胞术（FITC-Annexin V/PI染色）检测得到。[2]
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| 酶活实验 |
共价DNA修饰检测：为了检测NPPB是否烷基化DNA，将DNA片段用1 mM NPPB处理10小时。然后将处理后的DNA与FAM标记的引物进行线性扩增反应。所得DNA样品在变性尿素聚丙烯酰胺凝胶上进行分离。将NPPB处理的DNA片段化模式与对照组和TMZ处理的样品进行比较。与TMZ不同，NPPB没有产生指示DNA甲基化的特征性片段化模式。[2]
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| 细胞实验 |
电生理学（氯离子电流记录）：使用U373MG细胞。采用全细胞膜片钳技术记录氯离子电流。钳制电位为-40 mV，电压脉冲以20 mV的增量从-60 mV递增至+120 mV。外液成分为130 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM CaCl₂、10.55 mM葡萄糖和32.5 mM HEPES（pH 7.4）。内液成分为140 mM CsCl、2 mM MgCl₂、4.9 mM CaCl₂、10 mM EGTA和10 mM HEPES（pH 7.2）。在抑制实验中，向记录室施加NPPB（125或300 μM）。抑制率通过+120 mV时的最大外向电流计算得出。 [2]
细胞增殖（MTT）检测：将细胞（U373MG、U87MG、LN18、BV-2）以每孔 5×10³ 个细胞的密度接种于 96 孔板中，培养 24 小时。然后更换培养基，加入含有不同浓度 NPPB 的新鲜培养基，继续培养 24 小时。加入 MTT 溶液（0.5 mg/mL），孵育 1 小时。将生成的甲臜晶体溶解于 DMSO 中，并在 570 nm 波长处测定吸光度。将浓度-反应曲线拟合到 Hill 方程，得到 GI50 值。[2] 流式细胞术（细胞凋亡）检测：用 287 μM NPPB 处理 U373MG 细胞 48 小时。未处理的细胞作为对照。收集细胞，洗涤后重悬于Annexin V结合缓冲液中。在室温下避光，用FITC标记的Annexin V和碘化丙啶(PI)染色15分钟。立即使用流式细胞仪分析染色后的细胞，以定量分析活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞的百分比。[2]彗星试验（单细胞凝胶电泳）：用287 μM NPPB处理U373MG细胞24小时。孵育后，收集细胞并与LM琼脂糖混合，然后滴加到CometSlide载玻片上。将载玻片置于碱性裂解液（200 mM NaOH，1 mM EDTA，pH >13）中，然后用Tris-硼酸EDTA缓冲液洗涤。电泳在45 V电压下进行5分钟。将载玻片洗涤后，浸入70%乙醇中，并用SYBR Green染色。使用荧光显微镜以10倍放大倍率采集图像。使用CASP图像分析软件，每个样本取30个彗星，计算彗尾DNA百分比和彗尾矩。[2] 伤口愈合实验（迁移）：将U373MG细胞以每孔5×10⁵个细胞的密度接种于聚赖氨酸包被的6孔板中，并过夜培养。用移液器吸头在细胞单层上划痕以形成伤口。洗去脱落的细胞后，将细胞与浓度为GI50（约542 μM）的NPPB孵育24小时。在孵育前后拍摄划痕区域的图像。使用Image J软件根据迁移面积计算迁移率。 [2] Matrigel侵袭实验：将Matrigel侵袭小室（孔径8.0 μm）复水。将U373MG细胞悬液（每孔1×10⁵个细胞）加入含有浓度为GI₅₀（约542 μM）的NPPB的培养基中。孵育24小时后，用甲醛和甲醇固定细胞，并用台盼蓝染色。去除残留在膜上表面的细胞，并计数侵袭细胞的数量。[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
5-硝基-2-(3-苯乙酰氨基)苯甲酸是一种硝基苯类化合物。
NPPB（5-硝基-2-(3-苯基丙基氨基)苯甲酸酯）是一种非特异性氯离子通道阻滞剂。研究表明，它通过阻断电压门控氯离子通道（如CLC-3）来抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，这些通道对于细胞迁移过程中形状和体积的变化至关重要。[2] 在海马神经元中，NPPB阻断一种外向整流氯离子通道（ORCC），该通道参与细胞凋亡和细胞体积调节。[1] NPPB具有带负电荷的羧基，这对其通道阻滞活性至关重要，它通过静电相互作用从细胞内侧阻断通道孔。 [2] NPPB 对 BV-2 小鼠小胶质细胞的 GI50 值为 423.5 ± 30.3 μM。NPPB 对胶质瘤细胞 (U373MG) 的 GI50 值与对小胶质细胞的 GI50 值之比为 1.28，表明其具有相对选择性。[2] |
| 分子式 |
C16H16N2O4
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|---|---|
| 分子量 |
300.3092
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| 精确质量 |
300.111
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| CAS号 |
107254-86-4
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| PubChem CID |
4549
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.323 g/cm3
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| 沸点 |
523.5ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
178-179ºC
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| 蒸汽压 |
8.73E-12mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.653
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| LogP |
3.933
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| tPSA |
95.15
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
377
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
WBSMIPAMAXNXFS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H16N2O4/c19-16(20)14-11-13(18(21)22)8-9-15(14)17-10-4-7-12-5-2-1-3-6-12/h1-3,5-6,8-9,11,17H,4,7,10H2,(H,19,20)
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| 化学名 |
5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~332.99 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3299 mL | 16.6495 mL | 33.2989 mL | |
| 5 mM | 0.6660 mL | 3.3299 mL | 6.6598 mL | |
| 10 mM | 0.3330 mL | 1.6649 mL | 3.3299 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04327258 | COMPLETED | Anesthesia Surgical Procedure, Operative |
Insel Gruppe AG, University Hospital Bern | 2011-01 | ||
| NCT05067231 | RECRUITING | Cardiovascular Diseases Diabetes Hypertension Natriuretic Peptides Obesity |
University of Alabama at Birmingham | 2022-01-01 | ||
| NCT05359250 | RECRUITING | COVID-19 Myocardial Injury Vaccine Reaction |
University of Colorado, Denver | 2021-05-12 | ||
| NCT00586027 | COMPLETED | Natriuretic Peptide B Cardiac Surgery Low Cardiac Output |
Klinikum Ludwigshafen | 2008-07 | ||
| NCT02792452 | COMPLETED | Aortic Valve Stenosis | London North West Healthcare NHS Trust | 2016-09 |
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