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NSC117079

别名: NSC117079; NSC-117079; NSC 117079
目录号: V5022 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
NSC117079 是一种新型、有效的 PHLPP1（Pleckstrin 同源结构域和富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶 1）抑制剂。
NSC117079 CAS号: 500363-63-3
产品类别: Phosphatase
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

COA
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产品说明书
产品描述
NSC117079 是一种新型高效的 PHLPP1（Pleckstrin 同源结构域和富含亮氨酸重复序列的蛋白磷酸酶 1）抑制剂。PHLPP1 可抑制神经元中的蛋白激酶 B (AKT) 存活信号通路。小分子泛 PHLPP 抑制剂（选择性抑制 PHLPP1 和 PHLPP2）可能为诱导 AKT 神经保护作用提供一种可转化的方法。30 μM 的 NSC-117079 可将中性粒细胞对铺板纤维蛋白原的黏附率从 9.0±2.4% 提高至 27.0±8.0%，并将 50 ng/mL GM-CSF 诱导的中性粒细胞黏附率从 22.9±6.0% 提高至 47.6±10.9%。中性粒细胞黏附后，会发生跨内皮迁移。结果表明，PHLPP抑制剂NSC-117079能有效阻止中性粒细胞中Akt的去磷酸化，而Akt磷酸酶PHLPP可减弱中性粒细胞的黏附，但不影响其迁移。


NSC117079是一种实验性的泛PHLPP（pleckstrin同源结构域和富含亮氨酸重复序列蛋白磷酸酶）抑制剂，它选择性地靶向PHLPP1和PHLPP2的PP2C磷酸酶结构域，该结构域是AKT去磷酸化和失活的关键位点。研究人员在原代大鼠皮层神经元和星形胶质细胞中测试了NSC-117079激活AKT存活信号通路以及对星形孢菌素诱导的损伤提供神经保护作用的能力。该化合物还具有已知的脱靶效应，包括抑制蛋白磷酸酶 1 (PP1) 和蛋白磷酸酶 2Cα (PP2Cα)，以及与 Gβγ 亚基结合。[1]
生物活性&实验参考方法
靶点
Pan-PHLPP (PHLPP1 and PHLPP2) targeting the PP2C phosphatase domain [1].
Off-target: protein phosphatase 1 (PP1) (approx. 50% inhibition at 100 μM) [1].
Off-target: protein phosphatase 2Cα (PP2Cα) (approx. 50% inhibition at 100 μM) [1].
Off-target: Gβγ subunit (IC50 = 56 μM) [1].
体外研究 (In Vitro)
浓度为 30 μM 的 NSC-117079 可刺激中性粒细胞黏附于铺板的纤维蛋白原，使其黏附率从 9.0±2.4% 增加至 27.0±8.0%。同样，浓度为 50 ng/mL 的 GM-CSF 可诱导中性粒细胞黏附于铺板纤维蛋白原，使其黏附率从 22.9±6.0% 增加至 47.6±10.9%。中性粒细胞标记后可发生跨内皮迁移。研究结果表明，PHLPP NSC-117079 本身可以成功阻止中性粒细胞中 Akt 的去磷酸化，但 PHLPP 的 Akt 磷酸酶可以干扰中性粒细胞标志物的迁移 [2]。
NSC117079（35 分钟处理）在缺乏补充剂的条件下，以剂量依赖的方式增加原代大鼠皮层神经元中的基础神经元 AKT 磷酸化 (pAKT473)；未显著改变 pERK1/2 水平 [1]。
NSC117079（50 和 100 μM）阻断了神经元中 IGF-1 诱导的 AKT 激活，并改变了总 AKT 水平（补充图 1）[1]。
在原代大鼠星形胶质细胞中，NSC117079（50 μM，35 分钟）降低了基础 pAKT473 和 pERK1/2 水平 [1]。
NSC117079 剂量依赖性地降低了原代大鼠星形胶质细胞在孵育 24 小时后的基础活力，该活力通过 CellTiterBlue 代谢测定；诱导星形胶质细胞剂量依赖性丢失，并使细胞形态从大的弥散细胞体变为细长形状（补充图 3）[1]。
NSC117079（与星形孢菌素共同处理 24 小时）在较低的 STS 损伤水平（50 nM、100 nM、200 nM STS）下保护原代大鼠皮层神经元免受星形孢菌素诱导的细胞死亡；然而，与损伤对照组相比，用 NSC117079 预处理 35 分钟未能提高存活率[1]。
体内研究 (In Vivo)
在半月板不稳定的关节中，单次关节内注射 Phlpp twin NSC117079 可减轻机械性痛觉过敏并延缓关节损伤。损伤后七周，接受 Phlpp twin 治疗的动物保持了正常的活动水平，而关节损伤后三个月，患有心脏病的动物活动量和行走量均有所减少。超过 90% 的骨关节炎患者的人类关节软骨外植体在添加 NSC117079 后，会产生更多的软骨细胞外基质成分（葡萄糖胺抗氧化剂和聚集蛋白），并且在人类关节软骨细胞中，Phlpp1 底物可增加某些物质（AKT2、ERK1/2 和 PKC）的磷酸化水平 [1]。
细胞实验
细胞活力检测（CellTiterBlue）：对于神经元细胞，将细胞以高密度（1.5×10⁵/孔）接种于96孔板中。在培养第10-12天（DIV10-12），将维持培养基更换为含有不同浓度星形孢菌素（添加或不添加NSC117079）的药物处理培养基，培养24小时。然后加入20 μl CellTiterBlue试剂，孵育后使用酶标仪检测颜色变化。对于星形胶质细胞，使用第三代细胞，接种于聚赖氨酸包被的96孔板中，培养至汇合，然后在DMEM/F12/10% FBS培养基中用递增剂量的NSC117079处理24小时，随后用CellTiterBlue试剂孵育30-60分钟并进行分析[1]。
钙黄绿素AM活细胞染色：对于混合神经元/星形胶质细胞培养物，将细胞接种于玻璃腔室载玻片上，用DMSO或50 nM星形孢菌素±200 μM NSC117079处理24小时，然后用DPBS洗涤，用2 μM钙黄绿素AM孵育约10分钟，并在荧光显微镜下采集活细胞图像。对于星形胶质细胞，将细胞接种于玻璃腔室载玻片上，用指定浓度的NSC117079孵育24小时，然后洗涤并用钙黄绿素AM染色，拍摄图像[1]。
蛋白质印迹：对于神经元，将细胞培养于6孔板中，饥饿培养2小时，然后用递增剂量的NSC117079处理35分钟。用含EDTA、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液提取蛋白质。将样品超声处理、离心，并通过BCA法测定蛋白质浓度。每个样品上样 20 μg 蛋白，上样至 7.5% 或 4-15% 梯度 SDS-PAGE 凝胶，200V 电泳 2 小时，转移至 PVDF 膜，用 7.5% 脱脂奶粉封闭，4°C 下与一抗（pAKT473、AKT 总蛋白、pERK1/2、ERK1/2 总蛋白、GAPDH）孵育过夜，然后与二抗孵育，用 ECL-2 Plus 检测试剂显色，曝光胶片，使用 UN-SCAN-IT 软件进行密度分析 [1]。
对于星形胶质细胞，将细胞在 6 孔板上培养至汇合，用 50 μM NSC117079 处理 35 分钟，然后进行蛋白质印迹实验，方法类似 [1]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
NSC117079 降低了原代大鼠星形胶质细胞在 24 小时孵育后的基础活力，诱导了星形胶质细胞的剂量依赖性损失，并改变了细胞形态（细长形状）[1]。
参考文献

[1]. Pharmacological inhibition of pleckstrin homology domain leucine-rich repeat protein phosphatase is neuroprotective: differential effects on astrocytes. J Pharmacol Exp Ther. 2013 Nov;347(2):516-28.

[2]. Regulation Of Neutrophil Adhesion And Migration By Ph Domain And Leucine Rich Repeat Protein Phosphatase. A35 RECENT ADVANCES IN PHAGOCYTE BIOLOGY / Thematic Poster Session / Sunday, May 20/8:15 AM-4:30 PM / Area G (Hall D, North Building, Lower Level), Moscone Center.
其他信息
NSC117079 是一种泛 PHLPP 抑制剂，靶向 PHLPP1 和 PHLPP2 的 PP2C 磷酸酶结构域，从而激活神经元中的 AKT，但出乎意料地抑制星形胶质细胞中的 AKT/ERK。它对 PP1、PP2Cα 和 Gβγ 具有脱靶活性。该化合物与星形孢菌素联合使用时对皮层神经元具有神经保护作用，但作为短期预处理时则无此作用。它不会增强 IGF-1 诱导的 AKT 激活；相反，在高剂量下会抑制 AKT 激活。这些发现表明，非选择性 PHLPP 抑制可能由于阻断 PHLPP2 介导的促生存信号通路而对星形胶质细胞产生有害影响。该研究得出结论，应开发选择性 PHLPP1 抑制剂，以在全脑缺血中实现最佳神经保护 [1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H15N3O7S2
分子量
473.47900223732
精确质量
473.035
CAS号
500363-63-3
PubChem CID
272572
外观&性状
Pale purple to purple solid powder
LogP
2.1
tPSA
204
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
972
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S(C1=CC(=C2C(C3C=CC=CC=3C(C2=C1N)=O)=O)NC1C=CC=C(C=1)S(N)(=O)=O)(=O)(=O)O
InChi Key
LHSBZAWDPSTOEY-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C20H15N3O7S2/c21-18-15(32(28,29)30)9-14(23-10-4-3-5-11(8-10)31(22,26)27)16-17(18)20(25)13-7-2-1-6-12(13)19(16)24/h1-9,23H,21H2,(H2,22,26,27)(H,28,29,30)
化学名
1-amino-9,10-dioxo-4-(3-sulfamoylanilino)anthracene-2-sulfonic acid
别名
NSC117079; NSC-117079; NSC 117079
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~105.60 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.28 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.28 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1120 mL 10.5601 mL 21.1202 mL
5 mM 0.4224 mL 2.1120 mL 4.2240 mL
10 mM 0.2112 mL 1.0560 mL 2.1120 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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