| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
描述: (8E)-女贞苷是从女贞子果实中分离得到的天然环烯醚萜类化合物。它通过抑制NF-κB和Wnt/β-catenin信号通路,抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症,从而在骨关节炎(OA)大鼠模型中发挥抗炎作用。
| 靶点 |
NF-κB p65 [1]
Wnt/β-catenin (active β-catenin) [1] HIF-1α [2] VEGFA [2] PHD-2 [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
剂量依赖性地,spencezhenide(0.2-5.0 μg/mL)显著降低ARPE-19细胞中CoCl2诱导的VEGFA mRNA表达[2]。
specnuzehneide在0-200 μM浓度下孵育24小时和48小时后,未对大鼠软骨细胞产生显著的细胞毒性(CCK-8法)。在正常条件下,它不影响胶原蛋白II、sox9、MMP-3或MMP-9的表达。[1] 在IL-1β(5 ng/ml)刺激的大鼠软骨细胞中,specnuzehneide(10-200 μM)在24小时后下调MMP-3、MMP-9、IL-6、iNOS和COX-2的mRNA表达;胶原蛋白II和sox9的mRNA水平未见显著改善。 48 小时后蛋白质水平(Western blot):COX-2 在所有浓度下均下调;MMP-3、MMP-9、IL-6 和 iNOS 在 200 μM 时显著降低;胶原蛋白 II 和 sox9 蛋白仅在 200 μM 时显著升高。[1] 在 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞(10 ng/ml LPS,24 小时)中,specnuzehneide(50–200 μM)显著下调 iNOS 和 COX-2 的 mRNA 和蛋白水平。 [1] specnuzehneide(50–200 μM,6 小时)抑制了 IL-1β(5 ng/ml)诱导的大鼠软骨细胞中 NF-κB p65(总蛋白和磷酸化蛋白)和 β-catenin(总蛋白和非磷酸化活性蛋白)的增加,Western blot 结果显示。未观察到 MAPK 通路(ERK、JNK、p38)的抑制。[1] 荧光素酶报告基因检测:specnuzehneide(50–200 μM,预处理 1 小时)降低了 IL-1β 诱导的(5 ng/ml,NF-κB-Luc 检测 6 小时;TCF-LEF RE 检测 12 小时)NF-κB 和 Wnt/β-catenin 通路的转录活性。 [1] 免疫荧光显微镜:specnuzehneide(200 μM,预处理 1 小时)降低了 IL-1β 诱导的 NF-κB p65(刺激 30 分钟)和 β-catenin(刺激 6 小时)的核转位。[1] 核/胞质组分蛋白质印迹分析:specnuzehneide(200 μM,处理 6 小时)降低了 NF-κB p65 和 β-catenin 的核蛋白水平,而对胞质水平无影响。[1] 在模拟缺氧条件(150 μM CoCl₂)下,specnuzehneide(0.2、1.0、5.0 μg/ml)在 48 小时后显著降低了 VEGFA 的分泌(ELISA)。 [2] qRT-PCR (24 小时):specnuzehneide (0.2–5.0 μg/ml) 下调了 CoCl₂ 处理的 ARPE-19 细胞中 VEGFA 和 PHD-2 的 mRNA 表达,但对 HIF-1α mRNA 的表达没有显著影响。[2] Western blot (24 小时):specnuzehneide (0.2–5.0 μg/ml) 显著降低了 CoCl₂ 处理的 ARPE-19 细胞中 HIF-1α 和 PHD-2 的蛋白水平。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在大鼠骨关节炎模型(ACL 和 MM 切断)中,每 7 天关节内注射一次 specnuzehneide(200 μM,0.14 mg/kg),持续 8 周,可显著减少软骨退变。SPN 组的平均 OARSI 评分为 2.95,而 OA 组为 4.6。免疫组织化学显示,SPN 组的 MMP-3 和 COX-2 水平降低。[1]
股骨软骨下骨的 μCT 分析:与 OA 组相比,specnuzehneide 治疗显著增加了连接密度 (Conn.D),但未显著改善 BV/TV 或 Tb.N。 [1] 在氧诱导视网膜病变 (OIR) 大鼠模型(出生后第 7 天至第 12 天吸入 80% O₂,然后恢复正常空气)中,于出生后第 12 天腹腔注射 specnuzehneide(5.0 和 10.0 mg/kg)可显著减少视网膜新生血管面积(ADPase 染色)和新生血管核/血管(H&E 染色),且呈剂量依赖性。[2] |
| 细胞实验 |
软骨细胞活力:将大鼠软骨细胞(96孔板,每孔5000个)与不同浓度的specnuzehneide(0、10、50、100、200 μM)孵育24小时和48小时,然后加入CCK-8试剂(10 μl)孵育4小时,并在450 nm处测定吸光度值。[1]
软骨细胞中mRNA的表达:将细胞用specnuzehneide(0–200 μM)预处理1小时,然后用IL-1β(5 ng/ml)刺激24小时。用TRIzol提取总RNA,合成cDNA,并用SYBR Green进行实时PCR。 MMP-3、MMP-9、IL-6、iNOS、COX-2、胶原蛋白II、sox9、GAPDH的引物。[1] 软骨细胞的蛋白质印迹分析:细胞预先用specnuzehneide(0–200 μM)处理1小时,然后用IL-1β(5 ng/ml)处理48小时。用含有蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液制备全细胞裂解液。蛋白质经 10% SDS-PAGE 电泳分离后,转移至 PVDF 膜,用 5% BSA 封闭,与一抗(抗 MMP-3、MMP-9、IL-6、iNOS、COX-2、胶原蛋白 II、Sox9、β-catenin、活性 β-catenin、NF-κB p65、磷酸化 NF-κB p65、GAPDH、β-actin、TBP)孵育,再与 HRP 标记的二抗孵育,最后用 ECL 显色。[1] NF-κB 和 Wnt/β-catenin 信号通路:软骨细胞用 specnuzehneide (0–200 μM) 处理 6 小时,处理过程中加入或不加入 IL-1β (5 ng/ml)。MAPK:预处理 2 小时,然后用 IL-1β 处理 30 分钟。Western blot 分析方法同上。 [1] 免疫荧光:将软骨细胞置于盖玻片上,用 4% 多聚甲醛固定,用 0.1% Triton X-100 透化,与一抗(NF-κB p65 或 β-catenin)于 4℃ 孵育过夜,然后与荧光染料标记的二抗孵育 2 小时,最后用含 DAPI 的封片剂封片。[1] 荧光素酶报告基因检测:将软骨细胞稳定转染 NF-κB-Luc 或 TCF-LEF RE 构建体。转染细胞用 specnuzehneide(0–200 μM)预处理 1 小时,然后用 IL-1β(5 ng/ml)刺激 6 小时(NF-κB)或 12 小时(TCF-LEF)。测定荧光素酶活性。 [1] ARPE-19 细胞培养和 VEGFA 分泌:将 ARPE-19 细胞接种于 96 孔板(8×10³/孔),培养基为含 10% FBS 的 DMEM/F12。24 小时后,更换为不含 FBS 的培养基。用 specnuzehneide(0.2、1.0、5.0 μg/ml)或 YC-1(1.0 μg/ml)处理细胞。24 小时后,加入 CoCl₂(150 μM)模拟缺氧。48 小时后收集条件培养基,离心,将上清液储存于 -80 °C。采用 ELISA 法测定 VEGFA 水平。 [2] ARPE-19 细胞的 RNA 分离和 qRT-PCR:将细胞接种于 6 孔板(1×10⁵/孔),按上述方法处理 24 小时,收集细胞,用 TRIzol 提取总 RNA,合成 cDNA,用 VEGFA、HIF-1α、PHD-2、β-actin 的引物进行 qRT-PCR。 [2] ARPE-19 细胞的蛋白质印迹分析:将细胞接种于培养瓶中(2×10⁵/瓶),处理 24 小时,用 RIPA 缓冲液裂解,通过 BCA 法定量蛋白质,在 7.5% SDS-PAGE 凝胶上分离,转移至硝酸纤维素膜,用 5% 脱脂奶粉封闭,分别与抗 HIF-1α (1:2000)、抗 PHD-2 (1:1500) 或抗 β-肌动蛋白 (1:800) 抗体孵育,然后与 HRP 标记的二抗孵育,最后用 ECL 法显色。[2] |
| 动物实验 |
大鼠骨关节炎模型:Sprague-Dawley大鼠(200-250 g,6周龄)在戊巴比妥麻醉(40 mg/kg)下行膝关节前交叉韧带(ACL)和内侧半月板(MM)切断术。术后一周,大鼠每7天接受一次关节内注射specnuzehneide溶液(200 μM,0.14 mg/kg),每次200 μl,持续8周。对照组(OA组)注射等体积的溶剂。假手术组(Sham组)进行假手术。8周后处死大鼠,膝关节固定于4%多聚甲醛溶液中。 [1]氧诱导视网膜病变(OIR)大鼠模型:将哺乳期的Sprague-Dawley大鼠幼崽置于80%氧气环境中,从出生后第7天(PD 7)至第12天(PD 12)(共5天)。PD 12时,将幼崽转回常氧环境,并腹腔注射(ip)0.5 ml生理盐水中的specnuzehneide(5.0或10.0 mg/kg)。阳性对照组注射康柏西普(1.0 mg/kg),阴性对照组注射生理盐水。PD 17时,处死幼崽,摘除眼球,用4%多聚甲醛固定2小时。制备视网膜平铺标本,并用ADP酶染色。组织学方面,将6 mm厚的石蜡切片进行苏木精-伊红(H&E)染色。[2]
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在浓度高达 200 μM 的情况下,Specnuzehneide 在孵育 24 小时和 48 小时后,对大鼠软骨细胞未显示出明显的细胞毒性(CCK-8 检测)。[1]
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
specnuzehneide 是一种从女贞果实中分离得到的环烯醚萜苷。它已被用作该草药及其制剂的质量控制标志物。[2]
该化合物通过抑制 NF-κB 和 Wnt/β-catenin 信号通路,减少软骨基质降解酶(MMP-3、MMP-9 等)的活性,并增加软骨细胞特异性基因(II 型胶原、sox9)的表达,从而在骨关节炎中发挥抗炎作用。它还能减少骨关节炎大鼠的关节破坏和软骨下骨退变。[1] 在糖尿病视网膜病变模型中,specnuzehneide 通过抑制 HIF-1α/VEGF 信号通路,减少视网膜色素上皮细胞分泌 VEGFA,从而抑制缺氧诱导的视网膜新生血管形成。 [2] 潜在治疗应用:骨关节炎和糖尿病视网膜病变。未报告FDA警告或临床试验数据。[1][2] |
| 分子式 |
C31H42O17
|
|---|---|
| 分子量 |
686.6550
|
| 精确质量 |
686.242
|
| CAS号 |
39011-92-2
|
| PubChem CID |
11146840
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
893.8±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
282.0±27.8 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.636
|
| LogP |
-0.31
|
| tPSA |
260.59
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
8
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
17
|
| 可旋转键数目(RBC) |
14
|
| 重原子数目 |
48
|
| 分子复杂度/Complexity |
1120
|
| 定义原子立体中心数目 |
12
|
| SMILES |
O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]1([H])C([H])([H])O[H])O[H])O[H])O[H])O[C@@]1([H])/C(=C(/[H])\C([H])([H])[H])/C([H])(C(C(=O)OC([H])([H])[H])=C([H])O1)C([H])([H])C(=O)OC([H])([H])[C@]1([H])[C@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]([H])(OC([H])([H])C([H])([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])O[H])O1)O[H])O[H])O[H]
|
| InChi Key |
STKUCSFEBXPTAY-DTYPFZMBSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C31H42O17/c1-3-16-17(18(28(41)42-2)12-45-29(16)48-31-27(40)24(37)22(35)19(11-32)46-31)10-21(34)44-13-20-23(36)25(38)26(39)30(47-20)43-9-8-14-4-6-15(33)7-5-14/h3-7,12,17,19-20,22-27,29-33,35-40H,8-11,13H2,1-2H3/b16-3+/t17-,19+,20+,22+,23+,24-,25-,26+,27+,29-,30+,31-/m0/s1
|
| 化学名 |
methyl (4S,5E,6S)-5-ethylidene-4-[2-oxo-2-[[(2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[2-(4-hydroxyphenyl)ethoxy]oxan-2-yl]methoxy]ethyl]-6-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4H-pyran-3-carboxylate
|
| 别名 |
Specnuezhenide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~364.08 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (9.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 62.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (9.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 62.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20%SBE-β-CD生理盐水中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (9.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4563 mL | 7.2816 mL | 14.5632 mL | |
| 5 mM | 0.2913 mL | 1.4563 mL | 2.9126 mL | |
| 10 mM | 0.1456 mL | 0.7282 mL | 1.4563 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。