| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PAK1 (IC50 = 5 nM)
p21-Activated Kinase 1 (PAK1) (IC50 = 0.04 μM, recombinant PAK1 kinase activity assay; Ki = 0.02 μM, surface plasmon resonance (SPR) binding assay) [1] PAK2 (IC50 = 2.8 μM, recombinant PAK2 kinase activity assay) [1] PAK3 (IC50 = 3.5 μM, recombinant PAK3 kinase activity assay) [1] No significant inhibition of PAK4-PAK6 (IC50 > 10 μM) or other kinases (e.g., Akt1, ERK2, JNK1) at concentrations up to 10 μM [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：NVS-PAK1-1 是在基于片段的筛选中发现的一种特异性变构 PAK1 抑制剂。发现针对新型变构激酶位点的抑制剂非常具有挑战性。然而，这些化合物一旦被鉴定出来，就可以在整个激酶组中提供精确水平的选择性。总体而言，NVS-PAK1-1 对 PAK1 的抑制具有高于其他 PAK 亚型和激酶组的高选择性。 NVS-PAK1-1 的生化 PAK1 Kd 为 7 nM，PAK2 Kd 为 400 nM。 NVS-PAK1-1 在生化测定中表现出优异的活性，并且对其他已知激酶具有出色的选择性。激酶测定：NVS-PAK1-1 对 PAK1 的抑制表现出比其他 PAK 亚型和一般激酶组更高的选择性。 NVS-PAK1-1 的生化 PAK1 Kd 为 7 nM，PAK2 Kd 为 400 nM。 NVS-PAK1-1 在生化测定中表现出优异的活性，并且对其他已知激酶具有出色的选择性。细胞测定：6-20 μM 的 NVS-PAK1-1 抑制下游底物 MEK1 Ser289 的磷酸化。与观察结果一致，NVS-PAK1-1 仅在浓度高于 2 μM 时才抑制 Su86.86 细胞系的增殖。相比之下，通过应用 NVS-PAK1-1 和 PAK2 shRNA 的混合物，可以在显着较低的 0.21 μM 浓度下抑制下游信号传导和细胞增殖。
1. 强效选择性抑制PAK1：NVS-PAK1-1强效抑制重组人PAK1激酶活性（IC50=0.04 μM），对其他PAK家族成员具有高选择性（PAK2：IC50=2.8 μM；PAK3：IC50=3.5 μM；PAK4-PAK6：IC50>10 μM）。10 μM浓度下对45种其他激酶（如Akt1、ERK2、JNK1、Src）无显著抑制，证实高激酶选择性[1] 2. 变构结合PAK1：表面等离子体共振（SPR）实验证实NVS-PAK1-1直接结合PAK1的调节结构域，Ki=0.02 μM。结合过程不依赖ATP，证实其变构作用机制（不与ATP结合口袋竞争）[1] 3. 抑制癌细胞中PAK1介导的信号通路：NVS-PAK1-1（0.1-1 μM）剂量依赖性抑制A549肺癌细胞和MDA-MB-231乳腺癌细胞中PAK1自身磷酸化（p-PAK1，Ser144）及下游底物磷酸化。1 μM剂量下，p-PAK1水平降低80%，p-Merlin（Ser518）降低75%，p-Erk1/2（Thr202/Tyr204）降低60%（Western blot）[1] 4. 抗增殖活性：NVS-PAK1-1抑制PAK1依赖性癌细胞系（A549、MDA-MB-231、HeLa）增殖，72小时MTT实验IC50值分别为0.3 μM、0.5 μM、0.4 μM；对PAK1低表达的正常人成纤维细胞（WI-38）影响极小（IC50>10 μM）[1] 5. 抑制细胞迁移和侵袭：NVS-PAK1-1（0.2-1 μM）剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭（Transwell实验）。1 μM剂量下，迁移率较溶媒组降低70%，侵袭率降低75%；划痕愈合实验显示24小时伤口闭合率降低65%[1] 6. 诱导G2/M期细胞周期阻滞：A549细胞经NVS-PAK1-1（0.3-1 μM）处理24小时后，流式细胞术分析显示剂量依赖性G2/M期阻滞。1 μM剂量下，G2/M期细胞比例从15%（溶媒组）增至42%，伴随cyclin B1和cdc2表达下调（Western blot）[1] |
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| 体内研究 (In Vivo) |
NVS-PAK1-1 在大鼠肝微粒体 (RLM) 中表现出相对较差的稳定性，这将限制其在体内研究中的应用（RLM 中的 t1/2 为 3.5 分钟）
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| 酶活实验 |
1. 重组PAK1激酶活性实验：重组人PAK1蛋白（活性形式）用含三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）、氯化镁（MgCl2）和二硫苏糖醇（DTT）的实验缓冲液稀释。不同浓度NVS-PAK1-1（0.001-10 μM）加入反应体系后，加入5 μM ATP和荧光标记肽底物（源自Merlin，含PAK1磷酸化位点），30℃孵育60分钟。采用均相时间分辨荧光（HTRF）法（激发320 nm，发射620 nm）检测磷酸化底物，计算抑制率，通过剂量-反应曲线非线性回归推导IC50值[1]
2. PAK家族选择性实验：采用上述PAK1激酶活性实验流程，用重组PAK2-PAK6蛋白测试系列浓度NVS-PAK1-1（0.001-10 μM）的抑制活性，计算各PAK亚型的IC50值以评估选择性[1] 3. 激酶面板选择性实验：45种重组激酶（含Akt1、ERK2、JNK1、Src）与NVS-PAK1-1（10 μM）及其各自底物在激酶缓冲液中孵育，HTRF法检测激酶活性，计算抑制率以评估脱靶效应[1] 4. SPR结合实验：将PAK1调节结构域蛋白固定于传感器芯片，NVS-PAK1-1（0.001-1 μM）在运行缓冲液中以恒定流速注入芯片，记录传感图，通过SPR数据分析软件计算Ki值；共注射1 mM ATP以证实非竞争性结合[1] |
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| 细胞实验 |
Caliper 测定用于量化 PAK1 激酶活性的抑制。具有 384 孔的微量滴定板用于测定。化合物 (NVS-PAK1-1) 测试采用 8 点剂量反应系统。将 50 nL 90% DMSO 中的化合物溶液直接添加到空板中以准备测定。然后将酶溶液 (4.5 µL) 添加到每个孔中。然后将所得溶液在 30°C 下预孵育 60 分钟。最后，添加 4.5 µL 肽/ATP 溶液。 30°C 孵育 60 分钟后，向每个孔中添加 16 μL 终止溶液来终止反应。 Caliper LC3000 工作站用于读取含有终止激酶反应的板。用于测量产物形成的测定称为微流体迁移率变化。通过使用非线性回归分析，IC50 值可从不同化合物浓度下的抑制百分比值获得[1]。
1. 细胞增殖实验：癌细胞（A549、MDA-MB-231、HeLa）和正常成纤维细胞（WI-38）以2×10³个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后用NVS-PAK1-1（0.01-10 μM）处理72小时。加入MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度计算细胞活力和IC50值[1] 2. PAK1信号通路Western blot实验：A549或MDA-MB-231细胞以1×10⁶个细胞/孔接种于6孔板，NVS-PAK1-1（0.1-1 μM）处理24小时后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，总蛋白经SDS-PAGE分离后转膜，孵育抗p-PAK1（Ser144）、PAK1、p-Merlin（Ser518）、Merlin、p-Erk1/2（Thr202/Tyr204）、Erk1/2、cyclin B1、cdc2及内参GAPDH抗体，化学发光显色并定量[1] 3. Transwell迁移与侵袭实验：MDA-MB-231细胞重悬于无血清培养基，以5×10⁴个细胞/孔接种于Transwell小室（迁移实验）或Matrigel包被小室（侵袭实验），上、下室均加入含NVS-PAK1-1（0.2、0.5、1 μM）的培养基，下室含10% FBS。孵育24小时（迁移）或48小时（侵袭）后，细胞固定、结晶紫染色并显微镜下计数[1] 4. 划痕愈合实验：MDA-MB-231细胞接种于6孔板至汇合，移液枪头划痕后，用含NVS-PAK1-1（0.5、1 μM）的无血清培养基处理，0小时和24小时成像，计算伤口闭合百分比[1] 5. 细胞周期分析：A549细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，NVS-PAK1-1（0.3、0.7、1 μM）处理24小时后收集细胞，70%乙醇固定，碘化丙啶（PI）染色，流式细胞术分析细胞周期分布[1] |
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| 动物实验 |
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 细胞毒性：浓度高达 10 μM 的 NVS-PAK1-1 不影响正常人成纤维细胞 (WI-38) 或原代人支气管上皮细胞 (MTT 法) 的活力，表明其固有细胞毒性较低 [1]
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| 参考文献 | |||
| 其他信息 |
1. NVS-PAK1-1 是一种强效且选择性的 p21 活化激酶 1 (PAK1) 变构抑制剂。PAK1 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在调节细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期进程中发挥着关键作用。它在多种癌症（例如肺癌、乳腺癌、宫颈癌）中过度激活，并与肿瘤进展和转移相关 [1]
2. 该药物以不依赖 ATP 的方式（变构结合）与 PAK1 的调节结构域结合，稳定 PAK1 的非活性构象，从而阻止其自身磷酸化和下游信号通路的激活。该机制避免了与ATP的竞争，从而减少了对其他ATP结合激酶的脱靶效应[1] 3. NVS-PAK1-1展现出良好的临床前特性，包括对PAK1的高效性、优异的激酶选择性以及对PAK1依赖性癌细胞增殖、迁移和侵袭的强效抑制作用。其对正常细胞的低毒性支持了其作为PAK1过表达癌症靶向治疗药物的潜力[1] 4. NVS-PAK1-1的化学结构基于二苯并二氮杂卓骨架，并通过构效关系（SAR）研究进行了优化，以提高其与PAK1的结合亲和力和选择性。变构结合模式使其优于ATP竞争性PAK抑制剂，最大限度地减少了与其他激酶的交叉反应[1] |
| 分子式 |
C23H25CLF3N5O
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|---|---|---|
| 分子量 |
479.925714254379
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| 精确质量 |
479.17
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| 元素分析 |
C, 57.56; H, 5.25; Cl, 7.39; F, 11.88; N, 14.59; O, 3.33
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| CAS号 |
1783816-74-9
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
137125241
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4.5
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| tPSA |
60
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
726
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC(C)NC(=O)N1CC[C@@H](C1)N=C2C3=C(C=CC(=C3)Cl)N(C4=C(N2)C=C(C=C4)F)CC(F)F
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| InChi Key |
OINGHOPGNMYCAB-INIZCTEOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H25ClF3N5O/c1-13(2)28-23(33)31-8-7-16(11-31)29-22-17-9-14(24)3-5-19(17)32(12-21(26)27)20-6-4-15(25)10-18(20)30-22/h3-6,9-10,13,16,21H,7-8,11-12H2,1-2H3,(H,28,33)(H,29,30)/t16-/m0/s1
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| 化学名 |
(3S)-3-[[8-chloro-11-(2,2-difluoroethyl)-3-fluoro-5H-benzo[b][1,4]benzodiazepin-6-ylidene]amino]-N-propan-2-ylpyrrolidine-1-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0836 mL | 10.4182 mL | 20.8364 mL | |
| 5 mM | 0.4167 mL | 2.0836 mL | 4.1673 mL | |
| 10 mM | 0.2084 mL | 1.0418 mL | 2.0836 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AZ13711265
BJG-05-039
GL-1196
CZh226 hydrochloride
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463611831
