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| 25mg |
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描述：油酰乙醇胺（AM-1301；AM1301）是一种内源性强效的PPAR-α激动剂，具有治疗肥胖症和动脉粥样硬化的潜力。
油酰乙醇胺（OEA）是一种天然存在的脂质介质，也是过氧化物酶体增殖激活受体α（PPAR-α）的高亲和力内源性激动剂。它在小肠和其他组织中合成，在调节饱腹感、脂质代谢和能量稳态方面发挥着关键作用。除了其代谢功能外，研究表明OEA还具有显著的抗炎和抗纤维化作用。在肝纤维化的临床前模型中，油酰乙醇胺（OEA）治疗已被证实可通过阻断肝星状细胞活化并以PPAR-α依赖的方式抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路来减缓疾病进展，凸显了其作为纤维化疾病治疗药物的潜力。油酰乙醇胺（OEA）是一种内源性大麻素样分子，可作为过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）的高亲和力内源性配体。它已被证实对肥胖症和动脉粥样硬化的治疗具有重要作用。与Wy-14643和非诺贝特等合成PPAR-α配体不同，OEA还可以通过其他受体发挥作用，包括香草醛受体（TRPV1）和GPR119，使其具有多种生理功能。本研究采用蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）饮食诱导和硫代乙酰胺（TAA）诱导的Sv/129小鼠肝纤维化模型，探讨了OEA改善肝纤维化的活性和机制。[1]| 靶点 |
Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha (PPAR-α). Oleoylethanolamide (OEA) acts as a high-affinity endogenous ligand of PPAR-α. All anti-fibrotic effects of OEA in vivo and in vitro were mediated by PPAR-α activation. [1]
PPAR-α (peroxisome proliferator-activated receptor-alpha) TRPV1 (vanilloid receptor) GPR119 [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在用TGF-β1 (5 ng/mL)刺激的CFSC肝星状细胞(HSC)中，OEA (3、10、30 μM)呈剂量依赖性地抑制α-SMA和Col1a的mRNA表达。免疫荧光染色和Western blot结果显示，OEA也呈剂量依赖性地抑制α-SMA的蛋白表达。[1]Western blot和免疫荧光染色结果表明，OEA (10 μM)降低了TGF-β1诱导的CFSC细胞中Smad2/3的磷酸化水平。PPAR-α拮抗剂GW6471 (10 μM)可阻断OEA对Smad2/3磷酸化的抑制作用。 [1]
PPAR-α拮抗剂MK886 (10 μM) 完全阻断了OEA对HSC活化（α-SMA mRNA和蛋白表达）的抑制作用。[1] OEA处理增加了PPM1A（一种使活化的Smad2/3去磷酸化的磷酸酶）的mRNA表达，但对TGFBR1、TGFBR2、Smad4或Smad7的mRNA表达没有影响。OEA不直接抑制TGF-β1启动子活性。[1] 肝星状细胞是油酰乙醇胺（OEA）的作用靶点，OEA是一种内源性PPAR-α配体，可减轻肝纤维化。油酰乙醇胺通过PPAR-α抑制TGF-β1在体外诱导的肝星状细胞（HSC）活化。本研究采用qPCR检测TGF-β1刺激的HSC中Col1a和α-SMA的表达水平，以评估油酰乙醇胺对HSC活化的影响。在CFSC细胞组中，当TGF-β1（5 ng/mL）刺激48小时后，α-SMA和Col1a的mRNA水平显著升高；然而，当应用油酰乙醇胺时，α-SMA和Col1a的mRNA水平呈剂量依赖性地受到抑制。免疫荧光和Western blot结果表明，油酰乙醇胺处理呈剂量依赖性地抑制HSC活化标志物α-SMA蛋白的表达。PPAR-α拮抗剂MK886（10 μM）完全阻断了油酰乙醇胺对HSC活化的抑制作用。此外，TGF-β1刺激可下调PPAR-α的mRNA和蛋白表达水平。然而，这些变化可通过油酰乙醇胺治疗以剂量依赖的方式恢复。此外，研究发现TGF-β1刺激可导致Smad 2/3磷酸化上调，这与HSC活化效应一致。另一方面，在TGF-β1模拟的CFSC中，油酰乙醇胺（10 μM）可降低Smad 2/3的磷酸化水平。在CFSC细胞（一种大鼠肝星状细胞系）中，用OEA（30 μM、10 μM、3 μM）处理48小时可剂量依赖性地抑制TGF-β1（5 ng/mL）刺激诱导的α-SMA和Col1a的mRNA表达水平。 [1] 免疫荧光染色和蛋白质印迹分析显示，OEA 处理呈剂量依赖性地抑制了 TGF-β1 刺激的 CFSC 细胞中肝星状细胞活化标志物 α-SMA 的蛋白表达。[1] PPAR-α 拮抗剂 MK886 (10 μM) 完全阻断了 OEA (10 μM) 对 TGF-β1 诱导的 HSC 活化（α-SMA mRNA 和蛋白表达）的抑制作用。[1] OEA (10 μM) 降低了 TGF-β1 (5 ng/mL) 刺激 30 分钟的 CFSC 细胞中 Smad2/3 的磷酸化水平。PPAR-α 拮抗剂 GW6471 (10 μM) 阻断了这种作用。 [1] OEA处理（30、10、3 μM）对TGF-β1启动子活性无影响。[1] OEA处理增加了TGFBR1、Smad4和PPM1A的mRNA表达，但对TGFBR2和Smad7的mRNA表达无影响。[1] TGF-β1抑制CFSC细胞中PPAR-α的mRNA表达，而TGF-β通路抑制剂SB-431542可逆转这一抑制作用。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在喂食蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食8周的Sv/129野生型小鼠中，腹腔注射OEA（5 mg/kg/天）显著减轻了肝纤维化的发展。OEA治疗改善了脂肪变性，减少了肝细胞气球样变性，并降低了胶原沉积（天狼星红染色）。OEA还部分抑制了MCD饮食诱导的血清ALT（P < 0.01）、AST（P < 0.05）和肝脏甘油三酯（TG）水平（P < 0.05）的升高。OEA治疗减少了白细胞浸润，并抑制了ICAM和VCAM的mRNA表达。OEA还下调了肝脏中TGF-β1、α-SMA、Col1a、Col3a、TIMP1、MMP-2和MMP-9的mRNA表达。在PPAR-α基因敲除小鼠中未观察到这些保护作用。 [1]在用硫代乙酰胺（TAA，160 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续6周）治疗的野生型小鼠中，油酰乙醇胺（OEA，5 mg/kg/天，腹腔注射）显著抑制了肝纤维化的进展。OEA减少了胶原沉积（天狼星红染色），降低了ICAM和VCAM mRNA的表达，降低了TGF-β和α-SMA mRNA的表达，以及Col1a、Col3a、TIMP1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。这些作用在PPAR-α基因敲除小鼠中消失。[1]在肝纤维化小鼠模型中，油酰乙醇胺（OEA）可以显著降低促纤维化细胞因子TGF-β1的水平，并对TGF-β1信号通路中的基因（α-SMA、胶原蛋白1a和胶原蛋白3a）产生不利影响。通过抑制肝星状细胞（HSCs）的活化，油酰乙醇胺（OEA，5 mg/kg/天，腹腔注射）治疗可显著延缓两种实验动物模型中肝纤维化的进展[1]。在喂食MCD饮食的野生型Sv/129小鼠中，OEA给药（5 mg/kg/天，腹腔注射，持续8周）可改善脂肪变性，减少肝细胞气球样变性，并降低纤维状胶原沉积（如H&E染色、油红O染色和天狼星红染色所示）。OEA治疗还减少了肝脏中的白细胞浸润。在PPAR-α基因敲除小鼠中未观察到这些改善。 [1]在喂食MCD饮食的野生型小鼠中，OEA治疗部分抑制了血清ALT（P<0.01）、AST（P<0.05）和肝脏TG水平（P<0.05）的升高，但并未减弱PPAR-α敲除小鼠的这些升高。[1]在喂食MCD饮食的野生型小鼠中，OEA治疗降低了黏附分子ICAM和VCAM的mRNA表达，以及肝脏中TGF-β1、α-SMA、Col1a、Col3a、TIMP1、MMP-2和MMP-9的mRNA水平。在PPAR-α敲除小鼠中未观察到这些抑制作用。 [1]在经TAA处理的野生型小鼠（TAA 160 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续6周）中，OEA给药（5 mg/kg/天，腹腔注射）显著抑制了肝纤维化的进展，如H&E染色和天狼星红染色所示，并降低了ICAM和VCAM mRNA的表达、TGF-β和α-SMA mRNA的表达、Col1a和Col3a mRNA的表达以及TIMP1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。PPAR-α基因敲除小鼠对OEA治疗完全不敏感。[1]在野生型小鼠中，MCD处理降低了PPAR-α的mRNA和蛋白表达水平，但OEA治疗逆转了这些变化。[1]
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| 酶活实验 |
对于蛋白质印迹分析，细胞裂解后，蛋白质经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后转移至膜上。使用针对α-SMA（1:500）、p-Smad2/3（1:1000）、Smad2/3（1:1000）、PPAR-α（1:1000）和β-actin（1:5000）的一抗检测靶蛋白。[1]
对于免疫荧光分析，将细胞接种于24孔板中，用4%多聚甲醛在室温下固定15分钟。在室温下用2%牛血清白蛋白（BSA）的PBS溶液封闭1小时后，将细胞与稀释于1% BSA中的针对α-SMA（1:100）或p-Smad2/3（1:100）的一抗在4℃下孵育过夜。洗涤后，将细胞与稀释于 1% BSA 中的二抗（驴抗小鼠或抗兔 IgG，Alexa Fluor 594 标记）在室温下孵育 1 小时。用 DAPI 对细胞核进行染色，并使用激光扫描共聚焦显微镜采集图像。[1] |
| 细胞实验 |
细胞培养：CFSC细胞（大鼠肝星状细胞系）培养于含10% FBS和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中。细胞预先用不同浓度的OEA（3、10、30 μM）或PPAR-α拮抗剂（MK886 10 μM、GW6471 10 μM）处理，然后用TGF-β1（5 ng/mL）刺激。[1]
RNA提取和qPCR：使用TRIzol试剂提取肝组织和细胞的总RNA。使用qPCR RT试剂盒合成cDNA。采用 SYBR Green 进行 qPCR，检测 α-SMA、Col1a、Col3a、TGF-β1、TIMP1、MMP-2、MMP-9、ICAM、VCAM、PPAR-α、TGFBR1、TGFBR2、Smad4、Smad7 和 PPM1A 的 mRNA 水平。所有数值均以 GAPDH 或 18S 为内参进行标准化。[1] 免疫荧光：细胞用 4% 多聚甲醛固定，用 2% BSA 封闭，然后与抗 α-SMA (1:100) 或抗 p-Smad2/3 (1:100) 的一抗于 4°C 孵育过夜，随后与 Alexa Fluor 594 标记的二抗孵育。细胞核用 DAPI 染色。使用共聚焦显微镜采集图像。 [1]蛋白质印迹：将蛋白裂解液经SDS-PAGE分离后转移至膜上，并用抗α-SMA（1:500）、p-Smad2/3（1:1000）、Smad2/3（1:1000）、PPAR-α（1:1000）和β-actin（1:5000）的抗体进行检测。[1]CFSC细胞（大鼠肝星状细胞系）在添加10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。每两天更换一次培养基，每周两次收集细胞并以1:3的比例稀释。在实验中，HSC细胞在用5 ng/mL TGF-β1刺激前，先用实验浓度的OEA进行预处理。 [1] 使用 TRIzol 试剂提取细胞总 RNA。使用 qPCR RT 试剂盒以总 RNA 为模板合成 cDNA。使用 SYBR Premix Ex Taq 在实时 PCR 系统上进行 mRNA 定量。mRNA 的定量值以 GAPDH 或 18S rRNA 的水平进行标准化。[1] |
| 动物实验 |
MCD饮食模型：Sv/129野生型和PPAR-α基因敲除小鼠饲喂蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食8周。OEA（5 mg/kg/天）或载体（5% Tween-80 + 5% PEG400 + 90%生理盐水，5 mL/kg/天）经腹腔注射（ip）给药。收集肝组织进行组织学分析（H&E染色、天狼星红染色、油红O染色），并采集血液用于血清ALT和AST的测定。同时测定肝脏TG水平。[1]
TAA模型：野生型和PPAR-α基因敲除小鼠腹腔注射硫代乙酰胺（TAA，160 mg/kg，每周三次，持续6周）。OEA（5 mg/kg/天，ip）或载体同时给药。收集肝组织进行组织学和基因表达分析。[1] Sv/129 小鼠和 PPAR-α 基因敲除小鼠饲养于温度（21-23°C）、湿度（55-60%）和光照（12 小时光照/黑暗循环）受控的房间内，并可自由饮水。[1] 在 MCD 饮食喂养实验中，野生型小鼠和 PPAR-α 基因敲除小鼠被分为三组（每组 n=8）：（i）对照组饲喂正常饮食；（ii）饲喂 MCD 饮食并注射载体（5% Tween-80 + 5% PEG400 + 90% 生理盐水，5 mL/kg/天，腹腔注射，持续 8 周）；（iii）饲喂 MCD 饮食并同时注射OEA（5 mg/kg/天，腹腔注射，持续 8 周）。 OEA溶解于添加了5% PEG400和5% Tween-80的生理盐水中。[1] 在TAA实验中，饲喂标准饲料的野生型和PPAR-α基因敲除小鼠被随机分为三组：对照组（注射生理盐水）、TAA组（TAA 160 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续6周，溶于生理盐水，另加溶剂对照）和OEA组（TAA注射加OEA 5 mg/kg/天，腹腔注射，持续6周）。[1] 对于肝脏组织学研究，新鲜肝脏活检标本用10%中性缓冲福尔马林固定3天，然后包埋于石蜡中。切取5 μm厚的切片，并用苏木精-伊红（H&E）或天狼星红染色。为了检测脂质蓄积，将福尔马林固定的肝脏冰冻切片用油红O染色。染色区域通过标准显微镜观察和成像。[1] 对于血浆和肝脏生化指标，使用微孔板分光光度计和商业试剂盒测定血浆ALT、AST和肝脏甘油三酯（TG）浓度。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
本文未描述OEA的具体毒性数据。在小鼠中，所给剂量（5 mg/kg/天，腹腔注射）的OEA治疗耐受性良好。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
油酸乙醇胺 (OEA) 是一种 N-(长链酰基)乙醇胺，是油酸的乙醇酰胺衍生物。它是内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺 (anandamide) 的单不饱和类似物。它具有多种功能，包括作为 PPARα 激动剂、EC 3.5.1.23（神经酰胺酶）抑制剂和抗衰老剂。OEA 是一种 N-(长链酰基)乙醇胺、内源性大麻素和 N-酰基乙醇胺，其比例为 18:1。它的功能与油酸相关。据报道，果蝇 (Drosophila melanogaster)、蜜蜂 (Apis cerana) 和其他具有相关数据的生物体中均存在 OEA。作用机制：油酸乙醇胺 (OEA) 是一种主要的 N-酰基乙醇胺和内源性大麻素脂肪酸。尽管它是一种类似内源性大麻素的化合物，但它并不与大麻素受体结合。相反，这种脂质传感器是过氧化物酶体增殖激活受体α (PPAR-α) 激动剂和神经氨酸酶抑制剂，从而抑制鞘脂信号通路。
油酰乙醇胺 (OEA)是一种内源性 PPAR-α 配体，在调节脂质代谢中发挥作用，并具有抗炎特性。与合成的 PPAR-α 激动剂（Wy-14643、非诺贝特）不同，OEA 还可以通过其他受体（例如 TRPV1 和 GPR119）发挥作用。[1] 本研究表明，OEA 通过 PPAR-α 依赖性机制，抑制肝星状细胞 (HSC) 活化和抑制 TGF-β1/Smad2/3 信号通路，从而改善 MCD 饮食和 TAA 诱导的小鼠模型中的肝纤维化。 OEA治疗降低了纤维化标志物（α-SMA、Col1a、Col3a）、炎症相关黏附分子（ICAM、VCAM）和基质重塑酶（TIMP1、MMP-2、MMP-9）的表达。[1]肝纤维化的特征是细胞外基质（ECM）蛋白的过度生成和沉积。肝星状细胞（HSC）是基质成分的主要生产者，并可转分化为表达α-SMA并产生I型和III型胶原的肌成纤维细胞样细胞。这种转分化主要受经典TGF-β1/Smad信号通路调控。抑制HSC活化已被认为是一种治疗肝纤维化的策略。[1]PPAR-α主要存在于肝脏中，在能量平衡、肝脏脂质代谢和纤维化过程中发挥着关键作用。合成的PPAR-α配体，例如非诺贝特和Wy-14643，已被证实能够预防肝纤维化。OEA是一种内源性PPAR-α配体，它还能作用于TRPV1和GPR119。[1] OEA的抗纤维化作用是通过激活PPAR-α介导的，因为在PPAR-α基因敲除小鼠中未观察到这种作用。OEA以PPAR-α依赖的方式抑制HSC活化和TGF-β1/Smad2/3信号通路。OEA可能是一种潜在的肝纤维化治疗药物。[1] |
| 分子式 |
C20H39NO2
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|---|---|
| 分子量 |
325.5291
|
| 精确质量 |
325.298
|
| 元素分析 |
C, 73.79; H, 12.08; N, 4.30; O, 9.83
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| CAS号 |
111-58-0
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| 相关CAS号 |
Oleoylethanolamide-d4;946524-36-3;Oleoylethanolamide-d2;1245477-09-1; 111-58-0; 68511-29-5
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| PubChem CID |
5283454
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
0.9±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
496.4±38.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
50-60ºC
|
| 闪点 |
254.0±26.8 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.9 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.474
|
| LogP |
6.36
|
| tPSA |
49.33
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
17
|
| 重原子数目 |
23
|
| 分子复杂度/Complexity |
277
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CCCCCCCC/C=C\CCCCCCCC(NCCO)=O
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| InChi Key |
BOWVQLFMWHZBEF-KTKRTIGZSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H39NO2/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-20(23)21-18-19-22/h9-10,22H,2-8,11-19H2,1H3,(H,21,23)/b10-9-
|
| 化学名 |
(Z)-N-(2-hydroxyethyl)octadec-9-enamide
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| 别名 |
N-(2-Hydroxyethyloleamide; AM-1301; AM1301; OEA
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~20.83 mg/mL (~63.99 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0719 mL | 15.3596 mL | 30.7191 mL | |
| 5 mM | 0.6144 mL | 3.0719 mL | 6.1438 mL | |
| 10 mM | 0.3072 mL | 1.5360 mL | 3.0719 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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