Ombitasvir (ABT267; Viekira Pak)   中文名称: 奥米他韦

HCV (IC50 = 0.82 to 19.3 pM); HCV (IC50 = 366 pM)

体外活性：Ombitasvir 以前称为 ABT-267）是一种基于 N-苯基吡咯烷的丙型肝炎病毒（HCV）NS5A 抑制剂，具有出色的效力、代谢稳定性和药代动力学。奥比他韦被发现是一种泛基因型 HCV 抑制剂，针对 GT1a、-1b、-2a、-2b、-3a、-4a 和 -5a 的 EC50 范围为 1.7-19.3 pM，针对 GT6a 的 EC50 范围为 366 pM。在首次接受治疗的 HCV GT1 感染受试者中，在 3 天的单一治疗期间，它可将 HCV RNA 降低高达 3.10 log10 IU/mL。 Ombitasvir 已被美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准与其他抗病毒药物（帕立瑞韦、利托那韦和达沙布韦）联合使用，商品名为 Viekira Pak。激酶测定：之前描述了在HCV复制子细胞培养测定中用于测量单个氨基酸变体对抑制剂活性的影响的方法。简言之，使用 Change-IT 多突变定点诱变试剂盒（Affymetrix，圣克拉拉）将 NS5A 中的抗性相关变体各自引入基因型 1a-H77 或 1b-Con1 或嵌合基因型 2 至 6 复制子之一中。 ，加利福尼亚州）。通过序列分析确认变体的存在后，将质粒线性化，并使用 TranscriptAid T7 高产转录试剂盒（Fermentas，Glen Burnie，MD）从质粒转录 HCV 亚基因组 RNA。在瞬时测定中，含有变体的复制子 RNA 通过电穿孔转染至 Huh-7 细胞系中。 EC50 的计算方法如前几节所述。细胞测定：构建了带有荧光素酶报告基因但不含 Neo 基因的基于基因型 1b-Con1 HCV 复制子的穿梭载体盒，用于评估源自感染 HCV 基因型 1 至 6 的个体的 NS5A 基因的表型。克隆了 NotI 限制位点NS4B 3'端NS5A上游90个核苷酸处插入1b-Con1亚基因组复制子载体，并在NS5A氨基酸413密码子后克隆ClaI位点。来自基因 1 型感染患者的 NS5A 区域插入到 NotI 和 ClaI 限制性位点之间。具有 NotI 和 BlpI 限制性位点（上一节中描述）的 1b-Con1 穿梭载体用于评估 ombitasvir 抑制包含非基因型 1 HCV 氨基酸 1 至 214 的 NS5A 区域的能力。临床样本中的 NS5A 基因被扩增并连接到穿梭载体中。在瞬时测定中，来自每个临床样本的含有 NS5A 基因的 HCV 亚基因组复制子 RNA 通过电穿孔转染至 Huh-7 衍生细胞系中。将细胞在ombitasvir存在下孵育4天。测量细胞中的荧光素酶活性，并如上所述计算EC50。

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Ombitasvir (ABT267)是一种丙型肝炎病毒（HCV）NS5A抑制剂，具有皮摩尔效力、泛基因型活性，对HCV基因型1至5的50%有效浓度（EC50s）为0.82至19.3 pM，对基因型6a的有效浓度为366 pM。尽管NS5A中存在天然序列多样性，但Ombitasvir对69个基因型1至6个嵌合复制子仍保持了这些水平的效力，这些复制子包含来自HCV感染患者的NS5A基因。体外耐药性选择鉴定了基因型1至6中HCV NS5A基因氨基酸位置28、30、31、58和93处对ombitasvir产生耐药性的变体。

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HCV复制子中的活性。[1]
DeGoey等人先前提出了Ombitasvir (ABT267)的活性。Ombitasvir对基因型1a-H77和1b-Con1亚基因组复制子的EC50s分别为14.1和5.0 pM。在40%的人血浆中，由于血浆蛋白结合，化合物被隔离，ombitasvir的抗病毒活性减弱了11至13倍。ombitasvir的CC50大于32μM，导致体外治疗指数超过200万倍。Ombitasvir表现出广泛的基因型活性，对基因型2a、2b、3a、4a和5a复制子的EC50s为0.82至19.3 pM，对基因基因型6a复制子的EC 50s为366 pM（表1）。

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在基因型1a、1b、2a、2b、3a、4a、5a和6a复制子中选择对Ombitasvir (ABT267)耐药的变体。[1]
表2和表3列出了ombitasvir在基因型1至6中选择的氨基酸变体。DeGoey等人之前简要介绍了基因型1中ombitasvir的抗性特征。在基因型1a中，ombitasvr在EC50的10倍、100倍或100倍上选择的主要变异是M28T、M28V、Q30R、Y93C和Y93H。在基因型1a-H77背景下，M28V具有58倍的抗性，而M28T、Q30R、Y93C和Y93H变体各自具有超过800倍的抗性。ombitasvir在基因型1b中选择的主要变异是Y93H，对ombitasvr具有77倍的抗性。与基因型1a的观察结果相反，基因型1b中氨基酸位置28、30和31的单个替换赋予了<10倍的抗性。在ombitasvir EC50的100倍或1000倍时，许多克隆含有双氨基酸置换，主要是Y93H，以及NS5A N端区域的额外置换，双变体对ombitasir的抗性超过400倍。 在基因型2至5的EC50以上50倍和基因型6a细胞系的Ombitasvir（ABT267）EC50以上10倍进行抗性选择，因为在高于这些值的浓度下，复制子细胞在G418存在下无法存活，表明细胞中的复制子已被清除。

在基因型2a中，所选的主要变异是T24A和F28S，在基因型2b中，所选择的主要变异为L31V和Y93H，而在24个克隆中只有一个观察到L28F变异。在欧洲HCV数据库中，基因型2a和2b中的氨基酸位置31是多态的，蛋氨酸和亮氨酸都很普遍。因此，一些抗性变体是在M31和L31的背景下构建的。在基因型2a中，发现T24A（加M31）和T24A（加L31）对Ombitasvir (ABT267)的抗性水平相似。基因型2b L28F（加L31）和L31V变体分别具有47倍和511倍的抗性；然而，发现M31背景中的变体L28F对ombitasvir具有248倍的抗性。在基因型3a中检测到的主要抗性相关变异是Y93H，它对ombitasvir的抗性是6728倍。在基因型4a中，唯一选择的变异是L28V，它对ombitasvir具有23倍的抗性。在基因型5a中，观察到变异L28I、L31F和L31V，其中L28I对ombitasvir的抗性为79倍，而L31F和L3 1V变异的抗性均超过240倍。在基因型6a中，选择了L31V和T58的几个变体，这些变体对ombitasvir具有18至101倍的抗性。

总之，在NS5A中，基因型1至6之间观察到的关键抗性相关氨基酸位置为28、30、31、58和93；然而，这些氨基酸位置的变体对Ombitasvir (ABT267)的抗性因基因型而异。图2显示了野生型基因型1至6复制子中NS5A的氨基酸1至100的比对，突出了每个基因型中与抗性相关的标志性氨基酸位置。

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Ombitasvir (ABT267)对HCV基因型1至6分离株的活性。[1]
鉴于HCV的遗传多样性和NS5A N端区域内的氨基酸多态性程度，我们针对一组未经治疗的基因型1至6分离株评估了ombitasvir的活性，以描述其覆盖范围（表4）。还通过群体测序分析了与欧洲HCV数据库中共识相关的特征性耐药相关氨基酸位置的变异性（41），表4显示了分离物中观察到的多态性。该小组共包括69个基因型1至6的分离株。ombitasvir对66个基因型1至5个分离株的NS5A的EC50范围为0.1至15.1 pM。基因型2a和2b中NS5A第31位氨基酸或基因型4a第28位氨基酸的多态性对ombitasvir的活性没有影响。此外，ombitasvir对基因型2a JFH-1复制子具有活性，EC50为0.82 pM。ombitasir的EC50高于一个具有L28F加M31的基因型2b样本和一个具有A30K变体的基因型3a样本。只有一个基因型6a样本，含有L28，可用于分析。为了更好地代表基因型6a分离物的多态性，将L28F引入可用的基因型6a复制子中。ombitasvir对该基因型6a复制子的L28和F28变体的EC50分别为42 pM和68 pM。

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由于其皮摩尔效力和良好的药代动力学，化合物38/Ombitasvir（ABT267）被选为进一步的体外病毒学评估。如表4所示，38不仅对GT1a和GT1b，而且对GT2-GT6都显示出皮摩尔效力。GT1中化合物38的复制子抗性选择实验将28、30和93位的变体确定为主要的抗性相关变体，尽管还观察到其他次要变体（表5）。在GT1a中，变种M28V、L31V和H58D的抗性是38的58至243倍。单一变体M28T、Q30R和Y93C/S的抗性为800至8965倍，而Y93H/N的抗性为38倍，超过40000倍。在GT1b中，体外用38选择的主要变体是Y93H，它具有77倍的抗性。双变体R30Q+Y93H和L31M+Y93H赋予142至284倍的抗性，而所有其他双取代，包括Y93H与28、31或58位的取代结合，赋予38倍以上的抗性。该阻力曲线与BMS-790052有相当大的重叠，尽管在抗折性和所选变体方面存在一些差异。这些对体外选择的高度耐药突变体的观察强调了与DAAs联合治疗的必要性，DAAs通过不同的作用机制抑制病毒复制，以增加耐药性屏障[2]。

在一项为期3天的单一疗法研究中，对12名HCV基因型1感染患者进行了Ombitasvir (ABT267)的体内评估，每天给药5、25、50或200mg。研究中的所有患者都感染了HCV基因型1a，并且通过克隆测序确定在基线时没有预先存在的耐药变异。观察到HCV RNA减少高达3.1 log10IU/ml。在首次给药后48小时，在患者样本中检测到NS5A第28、30或93位的耐药性相关变异。克隆测序分析表明，在3天的单药治疗期间，ombitasvir在很大程度上抑制了野生型病毒，在高于5mg的剂量下，耐药变体M28V也受到了抑制。Ombitasvir在所有剂量下都具有良好的耐受性，没有发生严重或严重的不良事件。这些数据支持ombitasvir与靶向HCV NS3/4A蛋白酶（利托那韦的ABT-450）和HCV NS5B聚合酶（ABT-333，达沙布韦）的抑制剂联合治疗慢性HCV基因型1感染的临床开发。（研究M12-116在ClinicalTrials.gov上注册，注册号为NCT01181427）[1]。

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为了评估化合物38/Ombitasvir（ABT267）的安全性、耐受性、药代动力学和抗病毒活性，在HCV GT1感染的初治患者中给药3天，患者每天服用一次38，持续3天，剂量范围为5-200mg。在第3天，各剂量的剂量标准化Cmax和AUC值相似。化合物38的Cmax值范围为5.7至442 ng/mL，各剂量组的半衰期范围为25至32小时。如图3所示，在3天的单一治疗期间，38个剂量组的HCV RNA降低了3.10 log10IU/mL，所有剂量组均观察到近3 log的降低。化合物38在所有剂量下通常耐受良好，没有严重或严重的不良事件，没有临床上显著的实验室异常，也没有受试者停药。大多数不良事件都是轻微的，与剂量无关。[2]

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三天单一疗法的药代动力学和抗病毒疗效。[1]
在研究M12-116中，每个剂量组（5、50或200mg每日一次[QD]）有6名感染HCV基因型1的初次治疗患者，其中4名患者服用活性药物，2名患者服用匹配的安慰剂3天。在本研究中，18名患者中有16名感染了HCV基因型1a，2名感染了丙型肝炎病毒基因型1b，他们都被随机分配到安慰剂组。由于剂量错误，随机分配到50mg组的两名患者在单药治疗期间实际上接受了25mg。在基线时，18名患者的平均HCV RNA为6.32 log10 IU/ml。在第3天，所有剂量的Ombitasvir（ABT267）剂量标准化最大浓度（Cmax）和浓度-时间曲线下面积（AUC）值相似。Cmax范围为5.7至442 ng/ml，半衰期范围为25.5至32.0小时。图3显示了12名服用ombitasvir的HCV感染患者的个体HCV RNA病毒载量下降。在所有研究剂量中都观察到了类似的强效抗病毒反应，在3天的单药治疗期间，HCV RNA的平均最大减少量高达3.10 log10 IU/ml，而在研究的安慰剂组中，HCV RNA平均减少量为0.15 log10 IU/ml。总的来说，ombitasvir在所有给药剂量下都具有良好的耐受性。大多数不良事件是轻微的、自限性的、持续时间短的，被认为与ombitasvir无关或可能无关。不良事件没有剂量反应模式。未报告死亡或严重不良事件。

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体内耐药性发展评估。[1]
在本研究中，对所有接受Ombitasvir (ABT267)治疗的患者进行了NS5A编码区的克隆测序和表型分析，这些患者在基线、第3天和/或第6天的病毒滴度≥1000 IU/ml（图3和表5）。在3个剂量组中，所有12名服用Ombitasvir（ABT267）的患者均感染了基因型1a病毒，通过克隆序列分析，在基线时未在任何患者中检测到耐药相关氨基酸位置28、30、31、58或93的变异。

在5mg QD剂量组中，4名患者中有2名在第3天和第6天的HCV RNA病毒载量均≥1000IU/ml。患者1在第3天主要为M28V，但在第6天为M28T、M28V和Q30R的混合物。患者2在第3天和第6天主要携带野生型病毒，M28V和Q30R为次要变异。在接受25mg剂量的2名患者中，1名（患者3）在第3天和第6天的HCV RNA病毒载量≥1000IU/ml。在该患者的样本中，在第3天观察到M28T、M28V、Q30R和Y93C；然而，在第6天不再检测到M28V变体。与这些测序观察结果一致，在表型测定中，来自患者1、2和3的第6天样本分别对<强>奥比他韦（ABT267）产生98倍、4倍和36倍的耐药性。

在接受50mg剂量的Ombitasvir (ABT267)的2名患者中，M28T在第3天和第6天都是患者4的主要变异株，尽管也检测到了M28V、Q30E、Q30R和Y93C。50mg剂量组的患者5在开始服用ombitasvir后36小时出现HCV RNA病毒载量最低点，仅比基线值降低1.52 log10IU/ml。尽管在基线时没有检测到预先存在的耐药性相关变异，但患者5在第3天和第6天出现了复杂的变异混合物。Y93S和Q30L加Y93H是主要的变异，而Y93H和Q30L-加Y93S也被检测为次要变异。对HCV基因型1a-H77复制子中这些变体的体外分析（表2）表明，Q30L加Y93H（416倍）或Q30L加Y93S（218倍）赋予的耐药性低于单独由Y93H或Y93S赋予的耐药性。与耐药变异的存在一致，在表型分析中，患者4和5的第6天样本分别对ombitasvir产生353倍和406倍的耐药性。

在200mg剂量组中，4名服用活性药物的患者中有3名在第3天和/或第6天的病毒载量≥1000IU/ml HCV RNA。在第3天和第6天，M28T和Q30R是所有3名患者的主要变异，而Y93C和Y93H是次要变异。与耐药变体的存在一致，在表型分析中，来自患者6、7和8的第6天样本对奥美他韦（ABT267）的耐药性为927至2238倍。

第3天或第6天的临床样本通常含有NS5A变体的混合物（包括野生型）。这些变体中的每一个都可能具有不同的复制适应性和对Ombitasvir (ABT267)的可变易感性，因此对临床分离株的EC50反映了准物种中存在的多种变体。在许多情况下，携带单个或多个确定的耐药变体的参考复制子的EC50与临床分离株的EC50不同。

先前描述的技术用于量化不同氨基酸变体如何影响 HCV 复制子细胞培养测定中的抑制剂活性。简而言之，使用 Change-IT 多重突变定点诱变试剂盒，将 NS5A 中的抗性相关变体分别引入基因型 1a-H77 或 1b-Con1 或嵌合体之一基因型 2 至 6 个复制子。序列分析验证变体的存在后，将质粒线性化，并使用 TranscriptAid T7 高产转录试剂盒 提取 HCV 亚基因组 RNA。通过电穿孔，在临时实验中用含有变体的复制子 RNA 转染 Huh-7 细胞系。如前面部分所述，计算了 EC50。

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复制子细胞系和体外活性测定。[1]
通过测量萤光素酶报告基因的活性，在含有5%FBS的DMEM中测定了Ombitasvir (ABT267)对HCV复制的抑制作用，该DMEM含有或不含有40%的人血浆。细胞在ombitasvir存在下孵育3天，随后根据制造商的说明裂解和处理。使用Victor II光度计测量细胞中的萤光素酶活性。使用非线性回归曲线拟合4参数逻辑斯谛方程和GraphPad Prism 4软件计算50%有效浓度（EC50）。通过3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑（5mg/ml）比色法测定ombitasvir的细胞毒性。使用非线性回归曲线拟合4参数逻辑方程和GraphPad Prism 4软件，根据光密度数据计算50%细胞毒性浓度（CC50）。南方研究所使用不含萤光素酶报告子的亚基因组复制子，通过定量RT-PCR（qRT-PCR）分析评估了ombitasvir对基因型2a JFH-1的活性。

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临床分离株NS5A基因的表型。[1]
构建了一个基于基因型1b-Con1 HCV复制子的穿梭载体盒，带有萤光素酶报告基因，但没有Neo基因，用于评估来自感染HCV基因型1至6的个体的NS5A基因的表型。将NotI限制性位点克隆到NS4B 3′端NS5A上游90个核苷酸的1b-Con1亚基因组复制子载体中，并在NS5A氨基酸413密码子后克隆ClaI位点。基因型1感染患者的NS5A区域插入NotI和ClaI限制性位点之间。使用具有NotI和BlpI限制性位点的1b-Con1穿梭载体（如前一节所述）来评估Ombitasvir (ABT267)抑制非基因型1 HCV中包含氨基酸1至214的NS5A区域的能力。扩增临床样本中的NS5A基因并将其连接到穿梭载体中。在瞬时测定中，将来自每个临床样本的含有NS5A基因的HCV亚基因组复制子RNA通过电穿孔转染到Huh-7衍生的细胞系中。细胞在ombitasvir存在下孵育4天。测量细胞中的萤光素酶活性，并如上所述计算EC50。

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体外耐药性分析。[1]
为了表征对Ombitasvir (ABT267)敏感性降低的复制子变体，在上述含有HCV复制子的嵌合基因型1至6稳定细胞系中进行了耐药性选择。复制子细胞（5×104至1×106）被放置在150 mm的细胞培养板上，并在G418（400μg/ml）和ombitasvir的存在下生长，其浓度比相应细胞系的EC50高10倍、50倍、100倍或1000倍。经过3周的治疗，大多数复制子细胞中的复制子RNA被清除，因此无法在含G418的培养基中存活。含有抗性复制子变体的细胞存活下来并形成集落，每个集落都被挑选并进一步扩增。为了表征抗性复制子变体的基因型，将扩增的菌落在CellsDirect再悬浮和裂解缓冲液中裂解，得到总RNA。通过RT-PCR扩增NS5A编码区，使用ABI Prism染料终止子循环测序试剂盒对扩增的样品进行测序，并在Applied Biosystems 3100遗传分析仪上进行分析。

创建了一个基于基因型 1b-Con1 HCV 复制子的穿梭载体盒，该载体缺乏 Neo 基因，但含有荧光素酶报告基因，用于评估感染 HCV 基因型 1 至 6 的患者的 NS5A 基因表型。 NS5A 上游 3' 端有 90 个核苷酸NS4B（NotI 限制性位点）被克隆到 1b-Con1 亚基因组复制子载体中，ClaI 位点被克隆到 NS5A 氨基酸 413 密码子之后。 NotI 和 ClaI 限制性位点与基因型 1 感染患者的 NS5A 区域交叉。使用具有 NotI 和 BlpI 限制性位点的 1b-Con1 穿梭载体（在上一节中讨论）评估了奥比他韦抑制非基因型 1 HCV NS5A 区域（包含氨基酸 1 至 214）的能力。使用临床样本将 NS5A 基因的扩增副本连接到穿梭载体中。一项瞬时测定涉及将每个临床样本的含有 NS5A 基因的 HCV 亚基因组复制子 RNA 电穿孔到源自 Huh-7 的细胞系中。奥比他韦在细胞培养的四天内一直存在。按照前面提到的程序，测定细胞中的荧光素酶活性。

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GT1a复制子构建体（GenBank登录号NC004102）包含1a-H77的5′非翻译区（NTR），随后是萤火虫荧光素酶报告基因和新霉素磷酸转移酶（Neo）基因，它们共同构成了双顺反子复制子构建物的第一顺反子。随后是EMCV IRES，然后是第二个包含1a-H77 NS3-NS5B编码区的顺反子，该编码区具有适应性突变E1202G、K1691R、K2040R和S2204I，最后是1a-H77 3′NTR。GT1b-Con1复制子构建体（GenBank登录号AJ238799）包含1b-Con-1的5′非翻译区（NTR），随后是萤火虫荧光素酶报告基因和新霉素磷酸转移酶（Neo）基因，它们共同构成了双顺反子复制子构建物的第一顺反子。随后是EMCV IRES和第二个含有1b-Con1 NS3-NS5B编码区的顺反子，该编码区具有适应性突变K1609E、K1846T和Y3005C，最后是1b-Con3′NTR。此外，1b-Con1复制子构建体在HCV 5′NTR和萤火虫荧光素酶基因之间含有脊髓灰质炎病毒IRES。为了评估化合物抑制NS5A对抗非GT1 HCV的能力，构建了一个1b-Con1复制子穿梭载体，该载体在NS4B的C末端NS5A上游和NS5A氨基酸214之后含有限制性位点。生成了六个嵌合亚基因组复制子细胞系，用于评估化合物的活性。用于产生嵌合复制子的NS5A区域来源于基因型2a、2b、3a、4a、5a和6a HCV感染患者血清。对来自这些患者血清样品中的每一个的病毒RNA进行RT-PCR，以产生编码NS5A的前214个氨基酸的DNA片段。将该片段连接到复制子穿梭载体中，并在体外转录为复制子RNA。将该RNA引入人肝癌细胞（Huh-7）以创建稳定的复制子细胞系。通过测量萤光素酶信号的减少来确定化合物对HCV复制的抑制作用（在40%HP存在或不存在的情况下）。计算每种化合物浓度对HCV复制子复制的抑制百分比，并使用GraphPad Prism 4/5软件中的四参数逻辑斯谛方程的非线性回归曲线拟合计算EC50值。 前面描述了描述在HCV复制子细胞培养试验中测量单个氨基酸变体对抑制剂活性影响的方法。简而言之，NS5A中的抗性相关变体分别被引入GT 1a-H77、GT 1b-Con1或嵌合复制子中。在瞬时检测中，通过电穿孔将含有该变体的复制子转染到Huh-7衍生的细胞系中。对于每种化合物浓度，计算由萤光素酶信号降低确定的HCV复制子复制的抑制百分比，并如上所述计算EC50值。使用以下方程式计算复制能力作为野生型复制的百分比，100×{（变体4天萤光素酶计数/野生型4天萤光素酶计数）/（变体4小时萤光素酶数/野生型4h萤光素酶计数）}[2]。

临床研究设计。M12-116 研究（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT01181427）是首个评估奥比他韦在初治丙型肝炎病毒 (HCV) 感染成人患者中的药代动力学、安全性、耐受性、抗病毒活性和耐药性的研究。所有患者均签署了书面知情同意书。本研究遵循良好临床实践指南和《赫尔辛基宣言》的原则，研究方案已获得相关机构审查委员会和监管机构的批准。纳入标准包括：入组前至少 6 个月的慢性 HCV 基因 1 型感染；筛选时血浆 HCV RNA 水平 >100,000 IU/ml；以及近 3 年内进行的肝活检，组织学检查结果符合 HCV 相关炎症和纤维化，但无肝硬化证据。排除标准包括甲型或乙型肝炎病毒或1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）抗体阳性，或既往存在具有临床意义的合并症。主要终点为HCV RNA较基线的最大变化值。各剂量组的患者按顺序入组，每组内患者按2:1的比例随机分配至奥比他韦组或安慰剂组，并在研究中心接受为期3天的非空腹治疗。200 mg剂量组采用生物利用度更高的不同制剂。接受过至少一剂奥比他韦或安慰剂的患者，在完成奥比他韦治疗后，可以选择接受为期约48周的聚乙二醇干扰素/利巴韦林（pegIFN/RBV）治疗。采用罗氏 COBAS TaqMan HCV Test v2.0 实时逆转录 PCR 检测法测定 HCV RNA（定量下限为 25 IU/ml，检测下限为 10 IU/ml）。病毒学应答以 HCV RNA 较基线值的 log10 IU/ml 下降值来评估[1]。

吸收、分布和排泄
奥比他韦给药后5小时达到血浆峰浓度。其绝对生物利用度为48%。与高脂肪或正常脂肪食物同服可分别使药物暴露量增加1.76倍或1.82倍。
奥比他韦主要经粪便排泄（90.2%），经尿液排泄量极少（1.91%）。分别有 87.8% 和 0.03% 的剂量以母体化合物的形式经粪便和尿液排出。
奥比他韦的稳态分布容积为 173 升。
奥比他韦的清除率尚未确定。

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代谢/代谢物
奥比他韦主要通过酰胺水解代谢，随后经 CYP2C8 介导的氧化代谢。

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生物半衰期
奥比他韦的消除半衰期为 21-25 小时。

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化合物 38/奥比他韦 (ABT267)在大鼠肝微粒体中表现出较高的稳定性，并在大鼠体内具有较长的半衰期（分别为 6、4 和 9 小时），但其口服生物利用度较低。然而，与化合物32和33相比，化合物38在犬体内表现出显著更高的口服生物利用度和暴露量。与化合物13和16不同，化合物38在猴体内也表现出合理的半衰期、较低的清除率和中等的口服生物利用度。叔丁基甘氨酸类似物40和41在大鼠体内的药代动力学特征与缬氨酸类似物38和39相似，包括较低的口服生物利用度，这可能是由于它们的高亲脂性（log D = 5.5）和低水溶性所致。[2]

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
尚未对接受丙型肝炎治疗的哺乳期妇女进行奥比他韦的研究。由于其与母体血浆蛋白的结合率高达99.9%，因此母乳中的含量可能非常低。一些资料建议，当奥比他韦与利巴韦林联合使用时，应避免母乳喂养。
利托那韦作为加强药物已在多项针对哺乳期妇女的研究中进行过研究。它会以可测量的浓度分泌到乳汁中，并且在一些母乳喂养的婴儿血液中也能检测到低浓度的利托那韦。目前尚未有关于母乳喂养婴儿出现不良反应的报告。更多信息，请参阅LactMed网站上关于利托那韦的记录。
丙型肝炎不会通过母乳传播，并且母乳已被证明可以灭活丙型肝炎病毒（HCV）。然而，美国疾病控制与预防中心建议，如果感染丙型肝炎病毒 (HCV) 的母亲乳头皲裂或出血，应考虑停止母乳喂养。目前尚不清楚此警告是否适用于正在接受丙型肝炎治疗的母亲。
感染 HCV 的母亲所生的婴儿应接受 HCV 检测；由于母体抗体在婴儿出生后的前 18 个月内以及婴儿产生免疫反应之前均存在，因此建议进行核酸检测。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白质结合
奥比他韦与人血浆蛋白的结合率为 99.9%。

[1]. In vitro and in vivo antiviral activity and resistance profile of ombitasvir, an inhibitor of hepatitis C virus NS5A. Antimicrob Agents Chemother. 2015 Feb;59(2):979-87.

[2]. Discovery of ABT-267, a pan-genotypic inhibitor of HCV NS5A. J Med Chem. 2014 Mar 13;57(5):2047-57.

药效学
奥比他韦是一种直接抗病毒药物，通过抑制丙型肝炎病毒（HCV）的复制发挥作用。

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奥比他韦是一种二肽衍生物，与达沙布韦钠水合物、帕立普韦和利托那韦（商品名：维基拉帕克）联合使用，用于治疗慢性丙型肝炎病毒基因1型感染以及肝硬化。它是一种抗病毒药物，也是丙型肝炎病毒非结构蛋白5A抑制剂。它属于吡咯烷类、氨基甲酸酯类、芳香酰胺类和二肽类化合物。其功能与缬氨酸-脯氨酸类似。
奥比他韦是一种直接抗病毒药物，作为联合疗法的一部分，用于治疗慢性丙型肝炎，这是一种由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的传染性肝病。丙型肝炎病毒（HCV）是一种单链RNA病毒，分为九种不同的基因型，其中1型基因型在美国最为常见，影响着72%的慢性丙型肝炎患者。自2011年以来，随着直接抗病毒药物（DAA）如奥比他韦的研发，慢性丙型肝炎的治疗选择取得了显著进展。奥比他韦是一种NS5A抑制剂，NS5A蛋白是病毒复制和病毒颗粒组装所必需的。与另一类DAA——NS5B抑制剂相比，NS5A抑制剂的耐药性产生屏障更低。美国肝病研究协会 (AASLD) 和美国传染病学会 (IDSA) 于 2016 年联合发布指南，推荐奥比他韦作为一线治疗方案，与其他抗病毒药物联合用于治疗 1a、1b 和 4 型丙型肝炎病毒感染。根据丙型肝炎病毒基因型，奥比他韦通常与其他抗病毒药物（例如 [DB09183]、[DB09297]、[DB00503] 和 [DB00811]）联合使用，旨在治愈丙型肝炎病毒感染，或在每日治疗 12 周后达到持续病毒学应答 (SVR)。SVR 和丙型肝炎病毒感染的根除与显著的长期健康获益相关，包括减少肝脏相关损伤、提高生活质量、降低肝细胞癌的发病率以及降低全因死亡率。使用奥比他韦等直接抗病毒药物治疗的副作用极少，最常见的副作用是头痛和疲劳。与以往基于干扰素的治疗方案相比，奥比他韦副作用少、疗程短，这是一个显著的优势。以往的干扰素方案会受到输注部位反应、血细胞计数下降和神经精神副作用的限制。奥比他韦最初以固定剂量复方制剂的形式上市，与[DB09183]、[DB09297]和[DB00503]组成复方制剂，即获得FDA批准的Viekira Pak。Viekira Pak于2014年12月首次获批，适用于治疗无肝硬化或代偿性肝硬化的HCV基因1b型感染，以及与利巴韦林联合用于治疗无肝硬化或代偿性肝硬化的HCV基因1a型感染。奥布他韦也可与[DB09297]和[DB00503]组成固定剂量复方制剂，即经美国食品药品监督管理局（FDA）和加拿大卫生部批准的Technivie。Technivie于2015年7月首次获批，与利巴韦林联合用于治疗无肝硬化或代偿性肝硬化的4型基因型慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染患者。在加拿大，奥布他韦也可与[DB09183]、[DB09297]和[DB00503]组成固定剂量复方制剂，即经加拿大卫生部批准的市售产品Holkira Pak。 Holkira Pak 于 2015 年 1 月首次获批，适用于治疗伴或不伴肝硬化的 HCV 基因 1b 型感染，并与 [DB00811] 联合用于治疗伴或不伴肝硬化的 HCV 基因 1a 型感染。
奥比他韦是一种丙型肝炎病毒 NS5A 抑制剂。奥比他韦的作用机制是作为 UGT1A1 抑制剂。
奥比他韦是一种口服的丙型肝炎病毒 (HCV) 非结构蛋白 5A (NS5A) 复制复合物抑制剂，具有潜在的抗 HCV 活性。口服后，奥比他韦经细胞内吸收后，与 NS5A 蛋白结合并阻断其活性。这会导致病毒 RNA 复制复合物的破坏，阻断 HCV RNA 的产生，从而抑制病毒复制。 NS5A是一种锌结合且富含脯氨酸的亲水性磷蛋白，在HCV RNA复制中起着至关重要的作用。HCV是一种小型、有包膜的单链RNA病毒，属于黄病毒科；丙型肝炎病毒 (HCV) 感染与肝细胞癌 (HCC) 的发生密切相关。
奥比他韦 (OMBITASVIR) 是一种小分子药物，目前已完成 IV 期临床试验（涵盖所有适应症），于 2014 年首次获批，用于治疗丙型肝炎病毒感染和慢性丙型肝炎病毒感染，并有一项在研适应症。

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奥比他韦 (ABT267) 是一种丙型肝炎病毒 (HCV) NS5A 抑制剂，具有皮摩尔级效力、泛基因型活性，对 HCV 基因型 1 至 5 的半数有效浓度 (EC50) 为 0.82 至 19.3 pM，对基因型 6a 的 EC50 为 366 pM。尽管NS5A基因内部存在天然序列多样性，但奥比他韦对来自HCV感染患者的69个含有NS5A基因的1至6型基因型嵌合复制子仍保持了上述效力水平。体外耐药性筛选鉴定出HCV NS5A基因28、30、31、58和93位氨基酸的变异体，这些变异体赋予了1至6型基因型HCV对奥比他韦的耐药性。一项为期3天的单药治疗研究在12名HCV 1型基因型感染患者中评估了奥比他韦的体内疗效，每日一次，剂量分别为5、25、50或200 mg。所有入组患者均为HCV 1a型基因型感染，且在基线时经克隆测序确定无预先存在的耐药变异体。观察到HCV RNA水平下降高达3.1 log10 IU/ml。在首次给药后48小时，患者样本中检测到NS5A基因第28、30或93位氨基酸的耐药相关变异株。克隆测序分析表明，在为期3天的单药治疗期间，奥比他韦可显著抑制野生型病毒；当剂量高于5 mg时，耐药变异株M28V也得到抑制。所有剂量下，奥比他韦的耐受性均良好，未发生严重或危及生命的不良事件。这些数据支持奥比他韦联合靶向HCV NS3/4A蛋白酶（ABT-450联合利托那韦）和HCV NS5B聚合酶（ABT-333联合达沙布韦）的抑制剂，用于治疗慢性HCV基因1型感染的临床开发。 （M12-116 研究已在 ClinicalTrials.gov 注册，注册号为 NCT01181427。）[1]

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奥比他韦 (ABT267) 在剂量范围临床研究 M12-116 中进行了评估。该研究评估了 HCV RNA 相对于基线的最大变化，并对开始服用奥比他韦后最初几天内采集的样本进行了全面的耐药性分析。在 M12-116 研究中，12 名初治的 HCV 基因 1 型感染患者接受了 5、25、50 或 200 mg 的奥比他韦，每日一次，持续 3 天，随后可选择接受聚乙二醇干扰素和利巴韦林联合治疗方案，持续 48 周。所有接受奥比他韦治疗的患者均为基因1a型感染，在所研究的剂量范围内，3天单药治疗期间观察到的HCV RNA平均最大下降幅度达3.10 log10 IU/ml。所有患者在NS5A蛋白的特征性氨基酸位置28、30、31、58或93处均未检测到预先存在的耐药变异，这些变异可通过克隆测序检测到。8例患者的基线后样本可用于耐药性分析。NS5A蛋白中的M28T、M28V和Q30R变异是主要的治疗后出现变异，而Y93C和Y93H变异则被检测到为次要变异。在治疗第3天或第6天（治疗后48小时），每个患者样本中超过90%的克隆在特征性耐药氨基酸位置含有变异，表明在大多数患者中，野生型病毒已被抑制。在 5 mg 剂量组中，分别于第 3 天和第 6 天在两名患者体内检测到 M28V 变异；然而，在更高剂量组中，尽管 Cmax 值也随之升高，但 M28T 或 Q30R 变异成为主要变异。这与体外观察结果一致，即 M28V 变异可使奥比他韦耐药性提高 58 倍，且在高剂量奥比他韦治疗下可被抑制。与基因型观察结果一致，表型分析表明，5 mg 和 25 mg 剂量组患者的样本对奥比他韦的耐药性为 1 至 <100 倍，而接受 50 mg 或 200 mg 奥比他韦治疗的大多数患者的样本对奥比他韦的耐药性 >500 倍。尽管在所有研究剂量下，奥比他韦均表现出相似的强效抗病毒反应，但体内耐药性谱表明，使用高于 5 mg 的奥比他韦剂量可能有助于抑制常见的预先存在的变异株，例如基因 1a 型中的 M28V 或基因 1b 型中的 Y93H。体外奥比他韦 (ABT267) 谱以及 3 天单药治疗研究 M12-116 的结果，为研究奥比他韦与 NS3/4A 蛋白酶抑制剂 ABT-450 和非核苷类 NS5B 聚合酶抑制剂达沙布韦 (ABT-333) 联合治疗慢性基因 1 型 HCV 感染奠定了基础。这三种直接抗病毒药物（DAA）的组合为患者提供了一道抵御耐药性的屏障，六项采用不含干扰素的奥比他韦/ABT-450/利托那韦和达沙布韦（联合或不联合利巴韦林）的3期临床试验中，均获得了较高的持续病毒学应答率（SVR）。[1]

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本文描述了基于N-苯基吡咯烷的HCV NS5A抑制剂，该抑制剂具有优异的效力、代谢稳定性和药代动力学特性。与2R,5R类似物相比，吡咯烷环上具有2S,5S立体化学构型的化合物对基因1型（GT1）的效力更高。此外，在中心N-苯基的4位引入取代基可提高化合物的效力。例如，化合物38/奥比他韦（ABT267）中叔丁基的取代可使化合物的EC50值达到皮摩尔级，并具有更优异的药代动力学特性。研究发现化合物38是一种泛基因型HCV抑制剂，对GT1a、-1b、-2a、-2b、-3a、-4a和-5a的EC50范围为1.7-19.3 pM，对GT6a的EC50为366 pM。在未经治疗的HCV GT1感染者中，化合物38单药治疗3天后，HCV RNA水平最多可降低3.10 log10 IU/mL。目前，化合物38正处于III期临床试验阶段，与利托那韦（r）联合NS3蛋白酶抑制剂（ABT-450/r）和NS5B非核苷类聚合酶抑制剂（ABT-333）联合使用，并分别联合或不联合利巴韦林。[2] 目前迫切需要研发疗效、耐受性和便利性优于现有标准疗法的HCV感染新疗法。将HCV NS5A抑制剂加入到现有DAA药物库中，用于联合治疗，为这类疗法的实施带来了巨大的希望。我们发现了一种基于手性吡咯烷核心的化合物38/奥比他韦（ABT267），该化合物对GT1a和GT1b基因型表现出皮摩尔级的抑制活性。化合物38是一种泛基因型HCV抑制剂，对基因型1a、1b、2a、2b、3a、4a和5a的EC50范围为1.7–19.3 pM，对基因型6a的EC50为366 pM。化合物38被发现后，其在人体内的药代动力学表现出优异的性能，半衰期长达25–32小时，符合每日一次给药方案的要求。在对未接受过治疗的 HCV GT1 感染者进行为期 3 天的单药治疗期间，化合物 38 可使 HCV RNA 降低至 3.10 log10 IU/mL，目前正在进行 3 期临床试验，与 NS3 蛋白酶抑制剂和 NS5B 非核苷类聚合酶抑制剂联合使用，并分别与利巴韦林联合使用。[2]

C50H67N7O8

894.11

893.505

C, 67.17; H, 7.55; N, 10.97; O, 14.32

1258226-87-7

54767916

White to light yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

1065.6±65.0 °C at 760 mmHg

598.2±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.595

6.29

178.72

4

9

16

65

1540

6

CC(C)(C)C(C=C1)=CC=C1N2[C@H](C3=CC=C(NC([C@H]4N(C([C@@H](NC(OC)=O)C(C)C)=O)CCC4)=O)C=C3)CC[C@H]2C5=CC=C(NC([C@@H]6CCCN6C([C@@H](NC(OC)=O)C(C)C)=O)=O)C=C5

PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N

InChI=1S/C50H67N7O8/c1-30(2)42(53-48(62)64-8)46(60)55-28-10-12-40(55)44(58)51-35-20-14-32(15-21-35)38-26-27-39(57(38)37-24-18-34(19-25-37)50(5,6)7)33-16-22-36(23-17-33)52-45(59)41-13-11-29-56(41)47(61)43(31(3)4)54-49(63)65-9/h14-25,30-31,38-43H,10-13,26-29H2,1-9H3,(H,51,58)(H,52,59)(H,53,62)(H,54,63)/t38-,39-,40-,41-,42-,43-/m0/s1

methyl N-[(2S)-1-[(2S)-2-[[4-[(2S,5S)-1-(4-tert-butylphenyl)-5-[4-[[(2S)-1-[(2S)-2-(methoxycarbonylamino)-3-methylbutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]phenyl]pyrrolidin-2-yl]phenyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]carbamate

Viekira Pak (trade name); ABT-267; Ombitasvir; 1258226-87-7; Ombitasvir [INN]; CHEBI:85183; Ombitasvir [USAN:INN]; ABT 267; UNII-2302768XJ8; Ombitasvir(ABT-267); ABT267; CHEBI:85183; 2302768XJ8; ABT267; ABT 267

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。