| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PKCι (atypical protein kinase C iota) [1].
CDK9/cyclin T1 complex - disruption of interaction observed [1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Oncrasin-1 可选择性地杀死 K-Ras 突变癌细胞，并在敏感细胞而非耐药细胞中诱导 PKCiota 的异常核聚集。Oncrasin-1 处理导致 PKCiota 和剪接因子共聚集形成巨型剪接体，但对 DNA 修复分子 Rad51 没有明显影响。此外，Oncrasin-1 处理抑制了敏感细胞而非耐药细胞中 RNA 聚合酶 II 最大亚基的磷酸化和无内含子报告基因的表达，表明抑制 RNA 转录是 Oncrasin-1 处理的主要作用。利用培养细胞或重组蛋白进行的研究表明，Oncrasin-1 可以破坏 PKCiota 与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 9/细胞周期蛋白 T1 复合物的相互作用，而该复合物已知可磷酸化 RNA 聚合酶 II 的最大亚基，是 RNA 转录所必需的。我们的研究结果共同表明，Oncrasin-1抑制RNA加工机制的功能，并且PKCι可能参与RNA加工复合物的生物学功能。
Oncrasin-1处理（T29/T29Kt1细胞浓度为10 μmol/L；H460细胞浓度为1 μmol/L）12小时后，在敏感的T29Kt1细胞中诱导PKCι聚集形成大的核内灶，但在耐药细胞中未观察到此现象[1]。 Oncrasin-1在10 μmol/L浓度下处理12小时后，导致T29Kt1细胞中RNA剪接因子SC35和ASF/SF2聚集形成巨型剪接体，免疫荧光染色观察到其与PKCι共定位[1]。 Oncrasin-1处理后对T29Kt1细胞中的DNA修复蛋白Rad51没有明显影响。 12 小时 [1]。 Oncrasin-1 处理（T29/T29Kt1 细胞浓度为 10 μmol/L；H460 细胞浓度为 1 μmol/L）在 12 小时时显著抑制了敏感的 T29Kt1 和 H460 细胞中 RNA 聚合酶 II 最大亚基（通过 H5 抗体检测）和 SR 蛋白的磷酸化，但在 T29（正常）细胞或耐药的 H1299（N-Ras 突变体）和 H322（野生型 Ras）细胞中未观察到此现象 [1]。 H460 细胞的时间进程研究表明：Oncrasin-1（1 μmol/L）在 8 小时开始降低 RNA 聚合酶 II 和 SR 蛋白的磷酸化，并在 12 小时和 24 小时时效果更显著 [1]。 Oncrasin-1（1 μmol/L H460（10 μmol/L，T29/T29Kt1）显著抑制了H460和T29Kt1细胞中无内含子报告质粒（pCMV-Luc和pRL-TK-Luc）的荧光素酶表达，但在T29细胞中无抑制或抑制作用较弱；在处理后4、8和12小时测得的抑制作用强于100 μmol/L DRB[1]。 H460细胞的免疫沉淀显示，在DMSO对照中，PKCι与细胞周期蛋白T1共沉淀；经Oncrasin-1（1 μmol/L，12 h）处理后，在 CDK9/cyclin T1 复合物中未检测到 PKCι [1]。 体外结合实验：将重组 PKCι 和 CDK9/cyclin T1 与 1 μmol/L Oncrasin-1 混合，或不混合；抗 PKCι 抗体在没有 Oncrasin-1 的情况下沉淀 cyclin T1，但在有 Oncrasin-1 的情况下则不沉淀，表明相互作用被破坏 [1]。 高浓度 Oncrasin-1（剂量依赖性，未提供确切的 IC50 值）抑制重组 CDK6 和 CDK9 的激酶活性，并对 CDK2 和 CDK7 有中等程度的抑制作用，如体外激酶活性测定所示（补充图 S3）[1]。 |
| 酶活实验 |
激酶反应（20 µL）在 30°C 下进行 15 分钟。反应体系包含 1× 反应缓冲液、5 mM MgCl₂、50 µM 冷 ATP、1 µL γ-[P32]-ATP (3000 Ci/mmol)、50 ng 各激酶及其相应的底物。CDK9/cyclin T1 和 CDK7/cyclin H/MAT1 激酶活性测定以 500 mM CDK7/9 为底物，而 CDK2/cyclin A 和 CDK6/cyclin D3 激酶活性测定则以 0.1 mg/ml 组蛋白 H1 为底物。将混合物与不同剂量的 oncrasin-1 孵育。游离的 γ-[P32]-ATP 通过 P81 磷酸纤维素滤膜洗去。样品在闪烁计数器下进行读数。激酶活性测定：激酶反应（20 μL）在 30°C 下进行 15 分钟。反应混合物包含 1× 反应缓冲液、5 mmol/L MgCl₂、50 μmol/L 冷 ATP、1 μL γ[P32]ATP (3000 Ci/mmol)、50 ng 的每种重组激酶（CDK2/cyclin A、CDK6/cyclin D3、CDK7/cyclin H/MAT1 或 CDK9/cyclin T1）以及相应的底物（CDK7/9 用 500 mmol/L CDK7/9 tide；CDK2/6 用 0.1 mg/mL 组蛋白 H1）。向混合物中加入不同剂量的 Oncrasin-1。通过 P81 磷酸纤维素滤膜洗涤去除游离的 γ[P32]ATP，并在闪烁计数器中计数样品。 Oncrasin-1以剂量依赖的方式抑制CDK6和CDK9（未提供确切的IC50值）[1]。体外结合实验：将重组PKCι和CDK9/cyclin T1复合物与1 μmol/L Oncrasin-1混合，或不混合，于4°C下温和混匀2小时。然后用抗PKCι抗体（以正常兔IgG作为对照）沉淀混合物。通过Western blot分析沉淀物中的cyclin T1。Oncrasin-1的存在显著抑制了PKCι和cyclin T1的共免疫沉淀[1]。
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| 细胞实验 |
将细胞（3×10⁴/孔）接种于24孔板中，过夜培养。随后，将细胞置于无血清培养基中培养12小时，之后用250 ng不同的荧光素酶报告质粒进行转染。质粒转染采用FuGENE 6试剂。转染后，将细胞置于正常培养基中继续培养24小时，然后用1 µM oncrasin-1处理不同时间。收集细胞进行荧光素酶活性检测，检测采用荧光素酶检测试剂盒（Promega Life Science），并按照制造商的说明进行操作。用pCDNA3.1转染的细胞作为对照。[1]
细胞系：人非小细胞肺癌H460（K-Ras突变体）、T29（永生化正常卵巢上皮细胞）、T29Kt1（K-Ras转化细胞）、H1299（N-Ras突变体）、H322（野生型Ras）。细胞在含10%胎牛血清（FBS）和青霉素/链霉素的RPMI 1640或DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。[1] 免疫荧光染色：将细胞以每孔1×10^5个的密度接种于6孔板中，盖玻片经明胶处理。用Oncrasin-1（T29/T29Kt1细胞浓度为10 μmol/L；H460细胞浓度为1 μmol/L）或DMSO处理12小时后，或用10 Gy γ射线照射处理细胞，然后用2%多聚甲醛固定20分钟，用0.1% Triton X-100透化20分钟，用5%正常山羊血清封闭1小时。将玻片与一抗（抗PKCι、抗SC35、抗ASF/SF2、抗Rad51）孵育，然后与FITC或罗丹明标记的二抗孵育。最后用含DAPI的Prolong Gold抗淬灭剂封片。在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察[1]。 蛋白质印迹：用RIPA缓冲液（50 mmol/L Tris-HCl pH 8，150 mmol/L NaCl，1% NP40，0.5% 脱氧胆酸钠，0.1% SDS）制备细胞裂解液，用21号针头反复抽吸10次，10,000 rpm离心10分钟。取上清液进行SDS-PAGE和蛋白质印迹，使用针对磷酸化RNA聚合酶II (H5)、磷酸化SR蛋白、PKCι、细胞周期蛋白T1、β-肌动蛋白等的抗体[1]。 免疫沉淀：将细胞裂解液与一抗在温和旋转下孵育过夜，然后加入25 μL IgA/G磁珠，振荡约1小时。磁珠洗涤后，用上样缓冲液稀释，95°C加热10分钟，然后进行SDS-PAGE和Western blot分析[1]。 荧光素酶活性检测：将细胞（3×10^4/孔）接种于24孔板中，在无血清培养基中培养12小时，然后使用FuGENE 6转染250 ng pCMV-Luc或pRL-TK-Luc质粒。24小时后，用Oncrasin-1（H460细胞用1 μmol/L；T29/T29Kt1细胞用10 μmol/L）、DMSO或100 μmol/L DRB处理指定时间（4、8、12小时）。收集细胞，使用荧光素酶检测试剂盒进行荧光素酶活性检测；数值已根据 DMSO 对照组进行标准化 [1]。 流式细胞术：本文未描述细胞检测方法（仅在结果部分提及，方法部分未提及？实际上，流式细胞术是在其他情况下用于评估分化率的？不，那是针对 SJA710-6 细胞系，而非 Oncrasin-1 细胞系。本文未提供 Oncrasin-1 细胞系的流式细胞术细节，因此未包含在内。） |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Oncrasin-1 是一种吲哚类化合物，其结构为 1H-吲哚，1 位和 3 位分别被 4-氯苄基和甲酰基取代。它是一种抗癌药物，对携带 K-Ras 突变的肺癌细胞具有活性。它具有诱导细胞凋亡和抗肿瘤的双重作用。Oncrasin-1 属于吲哚类、单氯苯类和芳香甲醛类化合物。
Oncrasin-1 最初是通过对 K-Ras 突变癌细胞进行合成致死性筛选而发现的。该化合物能选择性地杀死 K-Ras 突变癌细胞，而对正常的同源细胞几乎没有影响。该化合物的抗肿瘤活性不受Raf抑制剂Bay 43-9006、MEK抑制剂U0126、PI3K抑制剂LY294002或AKT抑制剂X的影响。该化合物可诱导PKCι和剪接因子聚集形成巨型剪接体，抑制RNA聚合酶II CTD的磷酸化，并破坏PKCι与CDK9/cyclin T1复合物的相互作用。这导致RNA转录受到抑制，最终导致细胞死亡。德克萨斯大学MD安德森癌症中心已为Oncrasin-1申请了专利；发明人为W. Guo、S. Wu、J. Liu和B. Fang[1]。 |
| 分子式 |
C16H12CLNO
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|---|---|
| 分子量 |
269.7256
|
| 精确质量 |
269.061
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| CAS号 |
75629-57-1
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| PubChem CID |
872445
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid powder
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| 密度 |
1.21g/cm3
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| 沸点 |
465.5ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
117 °C
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| 闪点 |
235.3ºC
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| 折射率 |
1.62
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| LogP |
4.155
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| tPSA |
22
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
1
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
314
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
ZDRQMXCSSAPUMM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H12ClNO/c17-14-7-5-12(6-8-14)9-18-10-13(11-19)15-3-1-2-4-16(15)18/h1-8,10-11H,9H2
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| 化学名 |
1-(4-Chlorobenzyl)-1H-indole-3-carbaldehyde
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| 别名 |
Oncrasin-1; Oncrasin 1; Oncrasin1
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~370.74 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (9.27 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (9.27 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (9.27 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7074 mL | 18.5371 mL | 37.0741 mL | |
| 5 mM | 0.7415 mL | 3.7074 mL | 7.4148 mL | |
| 10 mM | 0.3707 mL | 1.8537 mL | 3.7074 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PKC-IN-5
PKC-IN-7
Lyso-monosialoganglioside GM2 ammonium
Mitoxantrone hydrochloride liposome
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COA
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