ONO-AE3-208

FP ( Ki = 790 nM ); TP Receptor ( Ki = 2400 nM ); EP4 ( Ki = 1.3 nM ); EP3 ( Ki = 30 nM )
Prostaglandin E receptor EP4 subtype (Ki = 1.3 nM for EP4, as determined by competition-binding isotherms to displace radioligand binding to the respective prostanoid receptor). Ki values for other prostanoid receptors: 30 nM for EP3, 790 nM for FP, 2,400 nM for TP, and >10,000 nM for other prostanoid receptors. [1]

ONO-AE3-208以剂量依赖性方式抑制体外细胞侵袭和迁移，而不影响细胞增殖[2]。 ONO-AE3-208 在 EET 合成抑制剂 MS-PPOH 存在的情况下消除 CTGF。花生四烯酸 (AA) 会引起所附着的 Af-Art 的剂量依赖性扩张，这种效应会被 ONO-AE3-208 阻断[3]。

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EP4拮抗剂ONO-AE3-208抑制前列腺癌细胞的侵袭和迁移而不影响细胞增殖[3]。
通过细胞增殖实验，观察ONO-AE3-208对PC3、LNCaP、LNCaP/mock、LNCaP/EP4+细胞增殖的影响。10µmol/L的ONO-AE3-208没有改变这些细胞的增殖率，尽管细胞表达了EP4。

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ONO-AE3-208 能增强从野生型小鼠结肠分离的固有层单个核细胞（LPMNCs）的增殖（通过[³H]胸腺嘧啶摄入测定）。该增强作用与吲哚美辛处理相似。EP4激动剂AE1-734可抑制由吲哚美辛引起的增殖增加。在EP4缺陷小鼠的LPMNCs中，AE3-208和吲哚美辛均不影响增殖。[1]
ONO-AE3-208 在LPS或LPS+ConA刺激下培养的LPMNCs中，能增加Th1细胞因子（IFN-γ和IL-2）的产生。[1]

ONO-AE3-208 抑制小鼠 PC3 细胞的体内骨转移[2]。与ONO-AE3-208治疗组相比，对照组的光子肿瘤负荷以时间依赖性方式显着增加。前者的转移形成率明显高于后者。 ONO-AE3-208 治疗动物中转移形成的中位时间为 29 天，而对照组为 21 天[4]。

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EP4抑制剂ONO-AE3-208可减轻链脲佐菌素糖尿病eNOS敲除小鼠的蛋白尿。
ONO-AE3-208可减少db/db小鼠的蛋白尿和系膜基质积聚。
ONO-AE3-208减轻亚全肾切除大鼠的肾损伤。[5]

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Connecting tubule glomerular feedback (CTGF) 实验Protocol[2]
1)实验#2和#3的时间控制：将CNT内的管腔NaCl从10 mmol/ l增加到80 mmol/ l，产生3条连续的浓度-响应曲线。
2) EP4拮抗剂ONO-AE3-208对CTGF的影响：CNT内管腔NaCl从10 mmol/L增加到80 mmol/L，形成3条连续的浓度-响应曲线。第二和第三条曲线分别添加EET合成抑制剂MS-PPOH(10−6 mol/L)，第三条曲线添加EP4拮抗剂ONO-AE3-208（10−7 mol/L）。ONO-AE3-208的浓度是EP4受体Ki的77倍，EP2受体Ki的至少100倍。
3) EP4拮抗剂L161982对CTGF的影响：本实验与#2相似，但用EP4拮抗剂L161982（10−5 mol/L）代替ONO-AE3-208。L161982的浓度是EP4受体Ki的312倍，EP2受体Ki的6倍。
4)内皮破坏对CTGF的影响：CNT中NaCl从10 mmol/L增加到80 mmol/L，可诱导CTGF。将山羊抗血管性血液病因子抗人抗体（14.29 mg/ml稀释1:1000）加2%豚鼠补体灌注到Af-Art腔内10分钟，冲洗20分钟，再次诱导CTGF。为了确认内皮的完全功能去除，我们在Af-Art的管腔中添加了10 - 5 mol/L的乙酰胆碱，我们反复证明该浓度足以使Af-Art扩张。
5)外源性花生四烯酸（AA）对碳纳米管的影响：在NE预缩Af-Art后，在没有NaCl的情况下，将AA浓度从10−7到10−5 mol/L添加到碳纳米管的管腔中。在实验结束时，我们去除AA并将CNT管腔灌注液切换到80 mmol/L NaCl。
6) EP4拮抗剂对外源性AA诱导的CTGF的影响：本实验与#5相似，不同之处是将MS-PPOH添加到CNT的管腔中，并将ONO-AE3-208添加到管腔中。
在所有实验中，Af-Art直径都是在间隔3-5 μm的三个位点对NE的最大响应区域测量的，并表示为这三个测量值的平均值。用摄像机每隔5秒记录直径，用装有Metavue图像分析软件的计算机测量直径。

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对接受3% DSS处理的野生型C57BL/6小鼠口服给予 ONO-AE3-208（10 mg/kg/天，通过饮水），可加重结肠炎，表现为体重减轻加剧、腹泻、便血评分和组织学损伤评分增加。此效应模拟了EP4缺陷小鼠的表型。[1]
ONO-AE3-208 损害了接受3% DSS处理的野生型小鼠的黏膜屏障功能，表现为血清FITC-葡聚糖水平升高和黏膜下层FITC-葡聚糖浸润。[1]
在7% DSS诱导的结肠炎恢复期，给予 ONO-AE3-208 会抑制上皮再生（BrdU阳性上皮细胞减少），并增强黏膜下层CD4+ T细胞的活化和浸润。[1]

通过竞争结合等温线实验测定 ONO-AE3-208 对前列腺素受体的Ki值。结果为：EP4为1.3 nM，EP3为30 nM，FP为790 nM，TP为2400 nM，其他前列腺素受体＞10000 nM。[1]

细胞增殖试验[3]
采用细胞计数试剂盒-8 （CCK8）检测ONO-AE3-208对细胞增殖的影响。5 × 10~3细胞（PC3细胞）和1 × 104细胞（LNCaP、LNCaP/mock和LNCaP/EP4+细胞）接种于96孔板。然后，每隔24 h，用10 μl CCK8试剂在37°温度下染色2 h，连续72 h，用自动板仪在450 nm处定量染色反应。每个实验重复三次，独立进行三次。

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入侵检测[3]
采用BD BioCoat Matrigel侵袭室检测前列腺癌细胞的侵袭活性。用PBS洗涤细胞，在不含FBS的培养基中重悬，浓度为3 × 104个细胞/ml。上腔涂布基质上加入细胞悬液500 μl，下腔中加入含1% FBS的培养基750 μl。在5% CO2培养箱中37°C孵育24 h后，用棉签擦拭滤膜上表面的细胞。滤网用70%乙醇固定，苏木精染色。在显微镜下随机选择6个视野对染色细胞进行计数。至少分析了来自三个不同实验的三个腔室。

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愈合试验[3]
创面愈合实验如前所述进行。6孔培养皿中未融合的PC3、LNCaP、LNCaP/mock和LNCaP/EP4+细胞用塑料吸管尖划伤培养24 h。通过图像J （http://rsbweb.nih.gov/ij/）测量“创面”（划伤区域）的宽度，创面愈合比例按以下公式计算：100% - （24 h后的宽度/开始时的宽度）× 100%。每个实验重复三次，独立进行三次。

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从野生型小鼠结肠分离固有层单个核细胞（LPMNCs），在含10% FBS的RPMI-1640培养基中培养。增殖实验：将细胞以10⁶个/ml密度接种于96孔板，24小时加入0.5 μCi [³H]胸腺嘧啶，72小时收集细胞，用液闪计数仪测定胸腺嘧啶掺入量。细胞因子测定：用LPS（10 μg/ml）单独或LPS+ConA（2 μg/ml）刺激LPMNCs 72小时，通过ELISA测定上清中IFN-γ和IL-2水平。[1]

动物模型 1：结肠炎诱导。[1]
\n\n将平均分子量为 5,000 的 DSS 以 3%（低剂量）或 7%（高剂量）的浓度添加到饮用水中，连续 7 天，喂给 8 周龄小鼠。在饮用水中添加 DSS 或下文提及的任何药物均不影响小鼠的饮水量。此外，还向饮用水中添加了吲哚美辛，剂量为 4 mg/kg/天，并在整个实验期间持续给动物服用。据报道，该剂量的吲哚美辛可在体内抑制大鼠和小鼠体内 PGE2 的产生。使用了一种 EP4 拮抗剂，ONO-AE3-208，4-{4-氰基-2-[2-(4-氟萘-1-基)丙酰氨基]苯基}丁酸 (AE3-208)，以及一种 EP4 激动剂，ONO-AE1-734，甲基-7-[(1R, 2R, 3R)-3-羟基-2-[(E)-(3S)-3-羟基-4-(间甲氧基甲基苯基)-1-丁烯基]-5-氧代环戊基]-5-硫庚酸酯 (AE1-734)。通过竞争性结合等温线法测定ONO-AE3-208取代放射性配体与相应前列腺素受体结合的Ki值，EP4、EP3、FP和TP受体的Ki值分别为1.3、30、790和2400 nM，其他前列腺素受体的Ki值均大于10000 nM。AE1-734的Ki值，EP4、EP3和EP2受体的Ki值分别为0.7、56和620 nM，其余前列腺素受体的Ki值均大于10000 nM。ONO-AE3-208以10 mg/kg/天的剂量，通过饮用水口服给药。当以10 mg/kg的剂量口服该化合物时，给药后0.25小时达到血浆峰浓度677 ng/ml，生物利用度为18%。静脉注射实验测得该化合物的血浆半衰期为0.2小时。AE1-734从DSS处理前1天开始，每天两次皮下注射（每次0.1 mg/kg），直至实验结束。当以该剂量皮下注射AE1-734时，注射后10分钟达到血浆峰浓度100 ng/ml，生物利用度超过70%。血浆浓度下降的半衰期为30分钟。
\n\n\n为了评估黏膜完整性，采用了FITC-葡聚糖测定法。野生型C57BL/6小鼠分别在饮用水中添加ONO-AE3-208或载体。1天后，两组小鼠均在饮用水中添加3% DSS，并继续添加或不添加ONO-AE3-208。24小时后，每组小鼠口服200 μl FITC-葡聚糖（平均分子量4400）（溶于生理盐水，浓度为2 mg/ml）。给药4小时后测定血清FITC-葡聚糖浓度。EP4^–/–小鼠及其野生型对照小鼠也采用相同方法处理，分别给予3% DSS和FITC-葡聚糖。将结肠组织速冻，并使用10 μm厚的冰冻切片进行荧光显微镜分析。\n\n

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\n\n动物模型2：骨转移动物模型和生物发光成像[3]
\n\n为了建立骨转移模型，将1 × 10⁵个PC3/Luc细胞悬浮于100 µl PBS中，按照先前描述的方法接种到5周龄雄性裸鼠（NU/NU）的左心室（第0天）。在接种癌细胞前一天（第-1天），将小鼠分为两组（每组9只），然后对治疗组腹腔注射每日10 mg/kg的ONO-AE3-208，对对照组腹腔注射蒸馏水。后续转移情况的评估是通过在小鼠腹腔注射荧光素后7分钟，使用IVIS 100体内成像系统测量光子通量来进行的。每5-10天注射一次荧光素，持续60天，小鼠用1-3%异氟烷麻醉。\n

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\n\n\n将34只6周龄裸鼠随机分为实验组和对照组，每组数量相等，分别腹腔注射ONO-AE3-208和双蒸水。然后，通过将荧光素稳定转染到前列腺癌PC3细胞中构建PC3/LUC细胞，并将这些细胞接种到小鼠左心室，以建立全身性骨转移动物模型。比较了两组小鼠的转移形成时间、光子肿瘤负荷以及建模后生存曲线的变化。[4]\n

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\n\n\n动物模型3：链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病eNOS−/−小鼠[5]
\n\n研究对象为8周龄的雄性C57BL/6和eNOS−/−（C57BL/6遗传背景）小鼠。小鼠禁食4小时后，连续5天，每天腹腔注射STZ（55 mg/kg，溶于0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.5）或仅注射柠檬酸缓冲液。从首次注射STZ当天开始，连续3周，每天在饮用水中添加ONO-AE3-208（10 mg/kg），或仅饮用饮用水。在之前的报告中，小鼠口服10 mg/kg剂量的ONO-AE3-208后，0.25小时达到血浆峰浓度677 ng/ml，生物利用度为18%。将小鼠置于独立的代谢笼中饲养24小时后，采用ELISA法测定尿肾素含量（Exocell，费城，宾夕法尼亚州）和尿白蛋白排泄量。血糖采用OneTouch UltraMini血糖仪测定。为了确定广谱COX抑制剂的作用，雄性对照组、STZ糖尿病/6小鼠和eNOS−/−小鼠分别接受吲哚美辛（4 mg/kg/天，溶于饮用水中⁴⁴，Cayman Chemical，Ann Arbor，MI）或仅饮用水处理，从首次腹腔注射STZ开始，持续两周（每组n = 10）。

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动物模型4：db/db小鼠[5]
8周龄的BKS背景的雄性db/m和db/db小鼠被随机分配接受ONO-AE3-208（10 mg/kg/天，溶于饮用水中）或仅饮用水处理，持续八周。另一组db/db小鼠同时接受卡托普利治疗，剂量为20 mg/kg/天，溶于饮用水中¹⁸。血糖和尿白蛋白排泄量的测定方法如前所述。收缩压（SBP）采用CODA无创血压系统测定。血清肌酐采用高效液相色谱法（HPLC）测定。银染法中，将含0.5 µg肌酐的尿液样品溶解于样品缓冲液中，经SDS-PAGE电泳分离后，使用ProteoSilver Stain试剂盒进行染色。\n

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\n\n动物模型5：部分肾切除大鼠[5]
\n\n8周龄雄性Sprague Dawley大鼠接受假手术或部分肾切除术，具体方法如前所述⁴⁵。简而言之，在异氟烷麻醉下，对大鼠进行次全肾切除术，通过肾包膜下切除术切除右肾，并通过选择性结扎左肾动脉三支分支中的两支，使左肾三分之二发生梗死。假手术组则进行开腹手术，并在缝合伤口前对双肾进行操作。一周后，将大鼠随机分为两组，一组在饮用水中添加ONO-AE3-208（1 mg/kg/天或10 mg/kg/天），另一组仅饮用普通饮用水，并继续观察七周。采用尾套容积描记法测定收缩压（SBP），方法如前所述⁴⁶。采用单次注射FITC菊粉清除率法，并通过尾静脉重复取样测定肾小球滤过率（GFR），方法如前所述。采用苯扎氯铵法测定24小时代谢笼养后的尿蛋白排泄量，并使用自动分析仪测定尿肌酐。

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\nONO-AE3-208以10 mg/kg/天的剂量通过饮用水灌胃给予C57BL/6小鼠。为诱导结肠炎，在饮用水中加入3% DSS，持续7天，并分别给予或不给予AE3-208。每日监测体重、粪便性状和隐血。第7天采集血液进行血细胞比容和白细胞计数，并取结肠进行组织学评分。[1]
\n为评估黏膜完整性，小鼠先用AE3-208或载体处理1天，然后给予3% DSS 24小时，最后灌胃给予FITC-葡聚糖（2 mg/ml，200 μl）。 4小时后测定血清FITC-葡聚糖水平。[1]
\n在恢复期实验中，小鼠先用7% DSS处理7天，随后用AE3-208处理3天，但不使用DSS。处死前2小时注射BrdU以标记增殖细胞。[1]

口服单次剂量为 10 mg/kg 时，ONO-AE3-208 在给药后 0.25 小时达到血浆峰浓度 677 ng/ml，生物利用度为 18%。静脉注射后的血浆半衰期为 0.2 小时。[1]

[1]. The prostaglandin receptor EP4 suppresses colitis, mucosal damage and CD4 cell activation in the gut. J Clin Invest. 2002 Apr;109(7):883-93.

[2]. Prostaglandin E2 mediates connecting tubule glomerular feedback. Hypertension. 2013 Dec;62(6):1123-8.

[3]. An EP4 Antagonist ONO-AE3-208 Suppresses Cell Invasion, Migration, and Metastasis of Prostate Cancer. Cell Biochem Biophys. 2014 Apr 18.

[4]. Inhibitory effect of ONO-AE3-208 on the formation of bone metastasis of prostate cancer in mice. Zhonghua Nan Ke Xue. 2014 Aug;20(8):684-9.

[5]. EP4 inhibition attenuates the development of diabetic and non-diabetic experimental kidney disease. Sci Rep. 2017 Jun 13;7(1):3442.

研究人员利用缺乏八种不同类型和亚型前列腺素受体的小鼠，研究了前列腺素在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎中的作用。在这些前列腺素受体缺陷小鼠中，只有EP4缺陷小鼠（而非DP、EP1、EP2、EP3、FP、IP或TP缺陷小鼠）在3% DSS处理后出现严重的结肠炎，而野生型小鼠仅出现轻微的结肠炎。在野生型小鼠中，给予EP4选择性拮抗剂（AE3-208）可模拟这种表型。EP4缺陷会损害黏膜屏障功能，并导致结肠上皮细胞丢失、隐窝损伤以及中性粒细胞和淋巴细胞聚集。相反，对野生型小鼠施用EP4选择性激动剂（AE1-734）可减轻通常由7% DSS诱导的严重结肠炎，而施用AE3-208则抑制结肠炎的恢复并显著诱导CD4+ T细胞增殖。体外实验表明，AE3-208增强了结肠固有层单核细胞的增殖和Th1细胞因子产生，而AE1-734则抑制了这些细胞的增殖和Th1细胞因子产生。DNA微阵列分析显示，EP4缺陷小鼠结肠中与免疫反应相关的基因表达升高，而与黏膜修复和重塑相关的基因表达降低。我们得出结论，EP4 通过维持黏膜完整性和下调免疫反应来维持肠道稳态。[1]连接小管-肾小球反馈 (CTGF) 是一种机制，其中连接小管 (CNT) 中的钠重吸收引起入球小动脉 (Af-Art) 扩张。CTGF 由类花生酸介导，包括前列腺素和环氧二十碳三烯酸；然而，它们的确切性质和来源仍然未知。我们假设在 CTGF 过程中，CNT 释放前列腺素 E2，后者与其 4 型受体 (EP4) 结合并扩张 Af-Art。我们显微解剖了具有完整附着 CNT 的兔 Af-Art，并对其进行灌注，然后用去甲肾上腺素预收缩。通过将 CNT 管腔内 NaCl 浓度从 10 mmol/L 增加到 80 mmol/L 来诱导 CTGF。我们在环氧二十碳三烯酸合成抑制剂MS-PPOH存在的情况下，分别在浴液中加入或不加入EP4受体阻断剂ONO-AE3-208来诱导CTGF。ONO-AE3-208完全抑制了CTGF的表达（对照组：9.4 ± 0.5 μM；MS-PPOH+ONO-AE3-208组：-0.6 ± 0.2 μM；P<0.001；n=6）。为了验证这些结果，我们使用了另一种特异性EP4阻断剂L161982（10⁻⁵ mol/L），结果也显示其同样抑制了CTGF的表达（对照组：8.5 ± 0.9 μM；MS-PPOH+L161982组：0.8 ± 0.4 μM；P<0.001；n=6）。为了证实介导 CTGF 的二十碳酸类物质是从 CNT 而非 Af-Art 释放的，我们首先使用抗体和补体破坏了 Af-Art 的内皮细胞。内皮细胞破坏并未影响 CTGF（7.9 ± 0.9 μm 对比 8.6 ± 0.6 μm；P=NS；n=7）。然后，我们在灌注液中保持 NaCl 浓度为零的情况下，向 CNT 管腔内添加花生四烯酸。花生四烯酸引起所连接的 Af-Art 呈剂量依赖性扩张（从 8.6 ± 1.2 μm 增至 15.3 ± 0.7 μm；P<0.001；n=6），并且这种作用可被 ONO-AE3-208 (10⁻⁷ mol/L) 阻断。我们得出结论，在CTGF期间，CNT释放前列腺素E2，后者作用于Af-Art上的EP4，诱导内皮非依赖性扩张。[2]

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EP4是前列腺素E2受体之一，前列腺素E2是最常见的类前列腺素，与炎症性疾病和癌症相关。我们之前报道过，EP4的过表达是导致去势抵抗性前列腺癌进展的机制之一，而EP4拮抗剂ONO-AE3-208在体内通过调节雄激素受体的激活来抑制去势抵抗性进展。本研究旨在分析EP4与前列腺癌转移的关联以及ONO-AE3-208抑制转移的疗效。我们评估了前列腺癌细胞系LNCaP和PC3中EP4 mRNA的表达水平。构建了EP4过表达的LNCaP细胞系，并将其侵袭能力与对照LNCaP细胞（LNCaP/mock）进行比较。在不同浓度的ONO-AE3-208处理下，检测了这些细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。通过将表达荧光素酶的PC3细胞接种到裸鼠左心室，构建了体内骨转移小鼠模型。利用生物发光成像技术观察了给予或不给予ONO-AE3-208处理后的骨转移情况。结果显示，PC3细胞中EP4 mRNA的表达水平高于LNCaP细胞，且LNCaP细胞中EP4的过表达增强了其侵袭能力。ONO-AE3-208以剂量依赖的方式抑制了LNCaP细胞的体外侵袭和迁移，且不影响细胞增殖。ONO-AE3-208处理也抑制了PC3细胞的体内骨转移。 EP4表达水平与前列腺癌细胞的侵袭性相关，而EP4特异性拮抗剂ONO-AE3-208可抑制细胞侵袭、迁移和骨转移，表明其可能是一种治疗转移性前列腺癌的新型潜在疗法。[3]

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目的：探讨EP4拮抗剂ONO-AE3-208对小鼠前列腺癌骨转移形成的影响。方法：将34只6周龄裸鼠随机分为实验组和对照组，每组数量相同，分别腹腔注射ONO-AE3-208和双蒸水。然后，将稳定转染荧光素的PC3/LUC细胞构建于前列腺癌PC3细胞中，并接种于小鼠左心室，建立全身性骨转移动物模型。本研究比较了两组小鼠在造模后转移灶形成时间、光子肿瘤负荷以及生存曲线的变化。结果：造模30天后，生物发光成像分析显示，与实验组相比，对照组的光子肿瘤负荷随时间显著增加（P < 0.01）。对照组的转移灶形成率也显著高于实验组（93.3% vs 33.3%，P < 0.001）。实验组动物骨转移形成的中位时间为 29 天（95% CI 26.547 - 35.262），而对照组为 21 天（95% CI 17.213 - 24.787）（P < 0.001）。结论：EP4 拮抗剂 ONO-AE3-208 可抑制小鼠前列腺癌骨转移的形成。[4] 连接小管-肾小球反馈 (CTGF) 是一种机制，其中连接小管 (CNT) 中的钠重吸收引起入球小动脉 (Af-Art) 扩张。CTGF 由类花生酸介导，包括前列腺素和环氧二十碳三烯酸；然而，它们的确切性质和来源仍不清楚。我们假设在CTGF期间，CNT释放前列腺素E2，后者与其4型受体（EP4）结合并扩张Af-Art。我们显微解剖了附着有完整CNT的兔Af-Art，进行灌注，并用去甲肾上腺素预收缩。通过将CNT管腔内NaCl浓度从10 mmol/L增加到80 mmol/L来诱导CTGF。我们在灌注液中加入或不加入EP4受体阻滞剂ONO-AE3-208，并在环氧二十碳三烯酸合成抑制剂MS-PPOH存在的情况下诱导CTGF。ONO-AE3-208完全抑制了CTGF（对照组：9.4 ± 0.5 μm；MS-PPOH+ONO-AE3-208组：-0.6 ± 0.2 μm；P<0.001；n=6）。为了验证这些结果，我们使用了一种不同的特异性EP4阻断剂L161982（10⁻⁵ mol/L），该阻断剂同样能消除CTGF（对照组：8.5 ± 0.9 μm；MS-PPOH+L161982组：0.8 ± 0.4 μm；P<0.001；n=6）。为了确认介导CTGF的二十碳酸类物质是从连接小管（CNT）而非动静脉内皮（Af-Art）释放的，我们首先使用抗体和补体破坏了Af-Art的内皮细胞。内皮细胞的破坏并未影响CTGF（7.9 ± 0.9 μm vs. 8.6 ± 0.6 μm；P=NS；n=7）。然后，我们在灌注液中保持NaCl浓度为零的情况下，向连接小管的管腔内添加了花生四烯酸。花生四烯酸可剂量依赖性地扩张附着的动静脉内膜（Af-Art）（从 8.6 ± 1.2 μm 扩张至 15.3 ± 0.7 μm；P<0.001；n=6），而这种作用可被 ONO-AE3-208 (10⁻⁷ mol/L) 阻断。我们得出结论，在 CTGF 期间，CNT 释放前列腺素 E2，后者作用于动静脉内膜上的 EP4，诱导内皮非依赖性扩张。[5]

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ONO-AE3-208 是一种 EP4 选择性拮抗剂，用于研究 EP4 在结肠炎中的作用。它通过损害黏膜屏障功能和增强 CD4+ T 细胞活化来加剧 DSS 诱导的结肠炎。[1]
该药物由日本小野药品工业株式会社提供。[1]

C24H21FN2O3

404.4335

404.153

C, 71.27; H, 5.23; F, 4.70; N, 6.93; O, 11.87

402473-54-5

10111831

White to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

662.4±55.0 °C at 760 mmHg

354.4±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.637

4.56

90.19

2

5

7

30

660

0

FC1=C([H])C([H])=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C21)C([H])(C([H])([H])[H])C(N([H])C1C([H])=C(C#N)C([H])=C([H])C=1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)O[H])=O

MTDIMKNAJUQTIO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H21FN2O3/c1-15(18-11-12-21(25)20-7-3-2-6-19(18)20)24(30)27-22-13-16(14-26)9-10-17(22)5-4-8-23(28)29/h2-3,6-7,9-13,15H,4-5,8H2,1H3,(H,27,30)(H,28,29)

4-[4-cyano-2-[2-(4-fluoronaphthalen-1-yl)propanoylamino]phenyl]butanoic acid

AE 3-208; AE-3-208; AE3-208; ONO AE3 208; ONO-AE3-208; 4-[4-cyano-2-[2-(4-fluoronaphthalen-1-yl)propanoylamino]phenyl]butanoic Acid; 4-Cyano-2-[[2-(4-fluoro-1-naphthalenyl)-1-oxopropyl]amino]benzenebutanoic acid; DTXSID20435810; 4-(4-Cyano-2-(2-(4-fluoronaphthalen-1-yl)propanamido)phenyl)butanoic acid; 4-Cyano-2-[[2-(4-fluoro-1-naphthalenyl)-1-oxopropyl]amino]Benzenebutanoic acid; ONO-AE-3-208; ONO-AE 3-208

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~33.33 mg/mL (~82.4 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 5%DMSO + 40%PEG300 + 5%Tween 80 + 50%ddH2O: 4.05mg/ml (10.01mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。