| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ribonucleotide Reductase (RR) small subunit M2 (RRM2) [1]
IC50 for recombinant RR enzyme activity = 8.23 μM [1] IC50 for cellular RR activity in HepG2.2.15 cell lysates = 760.8 μM [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
研究确定奥沙米德可能是一种核糖核苷酸还原酶小亚基M2 (RRM2) 分子。奥沙米德以时间和剂量依赖的方式显著降低HepG2.2.15细胞中HBV DNA和cccDNA的合成。它对核糖核苷酸还原酶(RR)活性的抑制作用是羟基脲的十倍。奥沙米德处理8天后，细胞内HBV DNA抑制的EC50值为16.5 μM，培养上清液中为11.1 μM。奥沙米德以浓度依赖性效应抑制RR活性，IC50值为8.23 μM。奥沙米德对3TC耐药的HBV毒株具有强效作用已得到证实[1]，表明其可用于治疗耐药HBV感染。
抑制重组RR活性：使用重组RRM1和RRM2蛋白进行[³H]CDP还原试验，奥沙米德以浓度依赖的方式抑制RR活性。其IC50为8.23 μM，而羟基脲(HU)的IC50为95.7 μM，表明其效力比HU高约10倍。[1] 抑制细胞RR活性：在HepG2.2.15细胞中，奥沙米德以时间和剂量依赖的方式降低细胞RR活性。处理36小时后，细胞裂解液中的IC50为760.8 μM。相比之下，HU 即使在高达 10 mM 的剂量下也未显示出对细胞 RR 活性的显著抑制作用。[1] HBV DNA 复制抑制：Osalmid 以时间和剂量依赖的方式显著抑制 HepG2.2.15 细胞中的 HBV DNA 复制。治疗 8 天后，培养上清液中 HBV DNA 抑制的 EC50 为 11.1 μM，细胞中为 16.5 μM。选择性指数 (SI = CC50/EC50) >10，表明其对 HBV 具有高效的抑制作用，且细胞毒性有限。[1] HBV cccDNA 合成抑制：Osalmid 治疗 8 天后，以剂量依赖的方式抑制 HepG2.2.15 细胞中的 HBV cccDNA 水平，EC50 为 45.8 μM。这表明它可以抑制HBV基因组DNA和病毒cccDNA的合成。[1] 抑制HBsAg和HBeAg分泌：Osalmid能有效抑制经8天处理的HepG2.2.15细胞中HBsAg（EC50 = 55.2 μM）和HBeAg（EC50 = 61.7 μM）的分泌。[1] 对抗3TC耐药HBV突变株的活性：Osalmid对野生型和3TC耐药（rtL180M/M204V双突变）HBV毒株均表现出相似的活性，EC50值分别为15.8 μM和19.8 μM。 [1] 与拉米夫定 (3TC) 的协同作用：奥沙米德与 3TC 以 40:1 的摩尔比联合使用，与单独使用任一药物相比，其 HBV 抑制活性显著增强。联合指数 (CI) <1.0，表明存在协同作用。联合用药的 EC50 值仅为各药物单独使用 EC50 值的约 20%。联合用药的细胞毒性与各药物单独使用相似。[1] 细胞毒性 (CC50)：奥沙米德在 HepG2.2.15 细胞中治疗 8 天后的 CC50（细胞存活率降低 50% 的浓度）为 122.5 μM。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在HBV转基因小鼠中，奥沙米德可降低受体活性和HBV复制。它与3TC具有协同作用，且无明显毒性。口服奥沙米德400 mg/kg/d可观察到HBV DNA复制的抑制呈时间依赖性。与对照组相比，治疗4周后，奥沙米德可使小鼠血清和肝组织中的HBV DNA复制降低约40-45%[1]。
转基因小鼠中的抗HBV疗效：在HBV转基因小鼠中，口服奥沙米德400 mg/kg/d，持续28天，可导致HBV DNA复制的抑制呈时间依赖性。4周后，与对照组相比，奥沙米德可使血清和肝组织中的HBV DNA复制降低约40-45%。 [1] 体内与 3TC 的协同作用：osalmid (400 mg/kg) 与 3TC (100 mg/kg) 联合用药显示出协同抗 HBV 作用，在血清和肝组织中，HBV DNA 的降低幅度均显著高于单独使用任一药物。[1] 体内 RR 活性抑制：Osalmid 治疗 28 天后，小鼠肝组织中的 RR 活性显著受到抑制，验证了其体内作用机制。[1] |
| 酶活实验 |
重组RR活性测定（[³H]CDP还原测定）：在大肠杆菌中表达His标签的RRM1和RRM2重组蛋白，并使用镍-次氮基三乙酸-琼脂糖树脂亲和层析法进行纯化。采用[³H]CDP还原测定法测定RR活性。100 μL反应体系包含0.125 μmol/L [³H]CDP、50 mM HEPES（pH 7.2）、100 mM KCl、6 mM DTT、4 mM乙酸镁、2 mM ATP、0.05 mM CDP和0.25 μM RR全酶（5 μg RRM1和2.5 μg RRM2）。37°C孵育15-30分钟后进行脱磷酸化，然后通过高效液相色谱（HPLC）和液体闪烁计数法分析样品。 RR活性计算公式为：RR活性 = dCDP/(CDP+dCDP) × 100%。抑制分析中，将系列稀释的osalmid与重组RR蛋白在室温下孵育30分钟，然后测定酶活性。[1]
细胞RR活性测定：将培养的HepG2.2.15细胞置于冰上，用27号针头在低盐匀浆缓冲液（10 mM Hepes，pH 7.2，2 mM DTT）中裂解。加入等体积的高盐缓冲液（1 M Hepes，pH 7.2，2 mM DTT）及蛋白酶抑制剂。离心后收集上清液，并按上述方法测定RR活性。 [1] 组织RR活性测定：将小鼠肝组织用液氮研磨，并在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.6）、2 mM DTT和蛋白酶抑制剂的缓冲液中匀浆。将混合物在4℃下以14,000 g离心30分钟，收集上清液，用于测定RR活性，方法如上所述。[1] |
| 细胞实验 |
HBV DNA复制检测：将HepG2.2.15细胞（1×10⁵个细胞/孔，24孔板）用不同浓度的osalmid处理6或8天，每2天更换一次培养基。分别通过离心收集培养上清液和细胞。使用病毒DNA提取试剂盒从上清液中提取HBV DNA，并使用苯酚/氯仿抽提和乙醇沉淀法从细胞中提取HBV DNA。使用SYBR Green染料和特异性引物（正义链：5'-CTGGAAAGTAAAGCGCTACTAA-3'；反义链：5'-CCTCGGCAGTCAAAAGGAG-3'）通过定量PCR（Q-PCR）检测HBV DNA水平。EC50值定义为抑制HBV DNA合成至对照组50%所需的浓度。 [1]
HBV cccDNA 检测：使用 QIAamp Mini DNA 试剂盒从 3×10⁵ 个 HepG2.2.15 细胞中提取 HBV cccDNA。提取物经绿豆核酸酶进一步纯化以去除 HBV 松弛环状 DNA。纯化反应体系包含 44 μL 提取的 DNA、1 μL 绿豆核酸酶（10,000 U/mL）和 5 μL 10× 绿豆核酸酶缓冲液，于 37°C 孵育 30 分钟，然后加入 2 μL 100 mM EGTA（pH 7.4）终止反应。使用引物 5'-TGAATCCTGCGGACGACC-3' 和 5'-ACAGCTTGGAGGCTTGAACAG-3' 通过 Q-PCR 对 cccDNA 进行定量。 [1] 细胞活力检测 (CCK-8)：使用化合物处理后，采用 CCK-8 法检测 HepG2.2.15 细胞的活力。计算 CC50 值（细胞活力降低 50% 的浓度）。[1] 药物组合效应分析：基于 EC50 值，将奥沙利定和 3TC 以不同的摩尔比（20:1 至 80:1）混合，并进行两倍系列稀释，分别加入 EC90、EC75、EC50 和 EC25 的溶液。8 天后，采用 Q-PCR 检测 HBV DNA。使用 CalcuSyn 程序，采用 Chou 和 Talalay 的中位效应法确定组合效应。组合指数 (CI) < 1.0 表示具有协同作用。 [1] 抗 3TC 耐药 HBV 突变株活性：将编码野生型或 3TC 耐药突变株 (rtL180M/rtM204V) HBV 1.3 拷贝基因组的质粒转染至 HepG2 细胞。24 小时后，用系列稀释的osalmid处理细胞 8 天。通过 Q-PCR 检测上清液中的 HBV DNA 水平。[1] HBsAg 和 HBeAg 检测：通过 ELISA 检测经处理的 HepG2.2.15 细胞中 HBsAg 和 HBeAg 的分泌。[1] |
| 动物实验 |
HBV转基因小鼠研究：** 本研究使用携带1.3个HBV ayw完整基因组拷贝的8周龄BALB/c背景的HBV转基因小鼠。将奥沙米德悬浮于0.05% CMC-Na溶液中，每日灌胃一次，剂量为400 mg/kg，持续28天。联合用药研究中，小鼠接受奥沙米德（400 mg/kg）和3TC（100 mg/kg）的混合液灌胃。对照组小鼠接受0.05% CMC-Na溶液灌胃。在不同时间点采集血样，用于血清HBV DNA和ALT/AST活性检测。28天后，处死小鼠，取出肝组织。取左肝叶进行组织学分析，剩余肝组织冷冻于-80℃，用于HBV DNA和RR活性检测。 [1]
* **血清ALT和AST活性测定：**治疗28天后采集血清样本。使用商业检测试剂盒，按照制造商说明书测定ALT和AST活性。[1] * **组织病理学检查：**将小鼠肝组织用福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚度为5 μm，苏木精-伊红（HE）染色，并在光学显微镜下观察。[1] HBV转基因小鼠研究：使用含有1.3个HBV ayw完整基因组拷贝的HBV转基因小鼠（BALB/c背景，8周龄）。将Osalmid悬浮于0.05% CMC-Na溶液中，每日灌胃一次，剂量为400 mg/kg，持续28天。在联合用药研究中，小鼠接受了奥沙米德（400 mg/kg）和3TC（100 mg/kg）的混合物。对照组小鼠接受了0.05% CMC-Na溶液。在不同时间点采集血样，用于血清HBV DNA和ALT/AST活性测定。28天后，处死小鼠，取出肝组织。取左肝叶进行组织学分析，剩余肝组织冷冻于-80°C，用于HBV DNA和RR活性测定。[1] 血清ALT和AST活性测定：治疗28天后采集血清样本。使用商业检测试剂盒，按照制造商说明书测定ALT和AST活性。[1] 组织病理学检查：将小鼠肝组织用福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚度为5 μm，苏木精-伊红（HE）染色，并在光学显微镜下观察。 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外细胞毒性：在 HepG2.2.15 细胞中，osalmid 显示出可接受的选择性指数 (SI > 10)，8 天后对 HBV DNA 的抑制 CC50 为 122.5 μM，EC50 为 11.1 μM。 [1]
小鼠体内毒性：在HBV转基因小鼠中，以400 mg/kg/天的剂量连续28天给予Osalmid治疗，未观察到明显的毒性，具体表现为：[1] 体重测量：治疗期间无显著变化[1] 肝功能检查：血清ALT和AST活性无显著升高[1] 组织病理学检查：肝组织切片未见显著病理改变[1] 临床安全性：研究指出，Osalmid在临床用于治疗肝胆疾病中未见严重毒性报道，表明其体内安全性良好。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
奥沙米德是一种有机分子实体。目前正在Khellinical临床试验NCT03670173（评估奥沙米德在多发性骨髓瘤中的安全性和有效性）中进行奥沙米德的研究。
背景和鉴定：奥沙米德是一种已获批准的利胆药物，其分子靶点和作用机制此前未知。通过使用综合药物化学（CMC）数据库，对RRM2晶体结构（PDB：3OLJ）进行计算机辅助虚拟筛选，发现奥沙米德是一种潜在的RRM2靶向化合物。分子对接结果显示，奥沙米德与RRM2的关键残基之间存在相互作用，包括氢键。[1] 作用机制：奥沙米德通过靶向核糖核苷酸还原酶小亚基M2（RRM2）抑制HBV复制，从而抑制RR活性并减少HBV DNA和cccDNA合成所需的dNTP池。这代表了一种与目前抗乙肝病毒药物（如核苷类似物）不同的全新作用机制。 [1] 主要优势：与现有RR抑制剂相比：[1] 抑制RR活性的效力约为羟基脲（HU）的10倍[1] 具有选择性抗HBV活性，选择性指数可接受，而HU和吉西他滨的选择性活性较低[1] 对3TC耐药的HBV毒株有效[1] 与拉米夫定（3TC）具有协同作用，且不增加细胞毒性[1] 抑制HBV cccDNA合成，解决了现有疗法的一个关键局限性[1] 潜在应用：Osalmid有望成为治疗慢性HBV感染以及潜在的HBV相关肝细胞癌（HCC）的新型抗HBV候选药物，因为RRM2在HCC中也过表达，并且对癌细胞增殖至关重要。[1] |
| 精确质量 |
229.073
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|---|---|
| CAS号 |
526-18-1
|
| PubChem CID |
4602
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
350.8±27.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
179ºC
|
| 闪点 |
165.9±23.7 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±0.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.711
|
| LogP |
2.53
|
| tPSA |
69.56
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
17
|
| 分子复杂度/Complexity |
261
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(NC1=CC=C(O)C=C1)C2=CC=CC=C2O
|
| InChi Key |
LGCMKPRGGJRYGM-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H11NO3/c15-10-7-5-9(6-8-10)14-13(17)11-3-1-2-4-12(11)16/h1-8,15-16H,(H,14,17)
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| 化学名 |
2-hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)benzamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~436.24 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03670173 | UNKNOWN STATUS | Drug: Osalmid | Multiple Myeloma | Shanghai 10th People's Hospital | 2018-10-01 | Phase 1 Phase 2 |
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463611831
