Parishin A   中文名称: 巴利森苷A

Sir2/Uth1/TOR
Silent information regulator 2 (Sir2) – parishin significantly increased SIR2 gene expression.
Superoxide dismutase (SOD1 and SOD2) – parishin increased SOD enzyme activity; the replicative lifespan of sod1 and sod2 mutants was not affected by parishin.
UTH1 and SKN7 – parishin did not affect the replicative lifespan of uth1 and skn7 mutants.
TOR signaling pathway (TORC1, RPS26A, RPL9A) – parishin significantly decreased gene expressions of TORC1, RPS26A, and RPL9A. [1]

浓度为 3、10 和 30 μM 的 parishin 可延长 K6001 酵母的复制寿命 [1]。

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parishin 在浓度为 3、10 和 30 µM 时显著延长了 K6001 酵母的复制寿命（平均寿命分别为 8.83±0.56、9.20±0.52 和 8.98±0.58 代），与未处理的对照组（7.38±0.44 代）相比；阳性对照白藜芦醇在 10 µM 时产生了 9.23±0.59 代（p<0.05 和 p<0.01）。 [1] 在正常条件下，parishin 显著提高了 SIR2 基因的表达（浓度分别为 3、10 和 30 µM 时 p<0.05、p<0.05 和 p<0.01）。[1] 在氧化应激（H₂O₂）下，parishin 提高了 BY4741 酵母的存活率：浓度为 3、10 和 30 µM 时，存活率均显著高于阳性对照组（所有 p<0.001）。[1] parishin 提高了酵母中 SOD 酶的活性：仅在 30 µM 浓度下处理 24 小时后（p<0.05）；在 3 µM（p<0.01）、10 µM（p<0.05）和 30 µM（p<0.05）浓度下处理 48 小时后均观察到 SOD 酶活性的提高。 [1]
parishin在10 µM (p<0.05) 和30 µM (p<0.01) 浓度下降低了酵母中的活性氧(ROS)水平。[1]
parishin在24小时时降低了酵母中的丙二醛(MDA)水平：10 µM和30 µM浓度下均p<0.001；在48小时时降低了MDA水平：3 µM (p<0.001)、10 µM (p<0.001) 和30 µM (p<0.05)。[1]
parishin不影响K6001酵母的sod1、sod2、uth1和skn7突变体的复制寿命。 [1]
parishin 在 3、10 和 30 µM 浓度下显著降低了 TORC1 的基因表达（p<0.05，p<0.05，p<0.01）；在 10 和 30 µM 浓度下降低了 RPS26A 和 RPL9A 的基因表达（p<0.05）。[1]
在 BY4741 的 uth1 突变体和 uth1、sir2 双突变体中，parishin 显著降低了 RPS26A 和 RPL9A 的基因表达（RPS26A 的 p<0.01，p<0.01；RPL9A 的 p<0.01，p<0.05）。 [1]在K6001的uth1突变体中，parishin显著降低了TORC1基因的表达（p<0.05）。[1]

为了进行复制寿命测定，将K6001酵母菌株在半乳糖培养基中复苏，并在28℃下以160 rpm的转速培养24-28小时。取约1 mL培养物，以1500 rpm离心3分钟，用PBS洗涤三次，并进行稀释。将约4000个细胞接种于含有白藜芦醇（10 µM，阳性对照）或帕里辛（0、3、10、30 µM）的葡萄糖琼脂平板上。平板在28℃下培养2天，并在显微镜下随机观察40个微菌落。计数每个母细胞产生的子细胞数量。对具有 K6001 背景的 sod1、sod2、uth1 和 skn7 突变体也采用了相同的方法。[1]
对于抗氧化应激测定（点涂法），将 BY4741 酵母在 28 °C 下用 parishin（0、3、10、30 µM）或白藜芦醇（10 µM）处理 48 小时。然后将约 0.1 OD 的酵母培养物点涂在含有 9 mM H₂O₂ 的琼脂平板上。在 28 °C 下培养 3 天后观察并拍摄生长情况。 [1]
为进行抗氧化应激测定（碘化丙啶染色），将BY4741酵母与parishin（0、3、10、30 µM）或白藜芦醇（10 µM）孵育24小时，然后用0或180 mM H₂O₂处理3小时。取约0.1 OD的酵母细胞，用冷PBS洗涤三次，并用15%乙醇处理20分钟。PBS洗涤后，将细胞在37 °C避光条件下与10 µg/mL碘化丙啶孵育20分钟。使用荧光显微镜（激发波长535 nm，发射波长615 nm）观察细胞。取约100个细胞计算存活率。 [1]
对于SOD和MDA测定，将BY4741酵母细胞在含有不同浓度（0、3、10、30 µM）的parishin葡萄糖培养基中培养24或48小时。取约1×10⁹个细胞，用PBS洗涤三次，并重悬于1 mL PBS中。将细胞进行超声处理（每次1分钟），重复5次，然后进行冻融处理（液氮中5分钟，37 °C水浴中2分钟），并再次进行超声处理5次。将裂解液在4 °C下以12,000 rpm离心15分钟，取上清液，使用试剂盒按照制造商说明书测定SOD活性和MDA水平。 [1]
对于ROS检测，将BY4741酵母细胞在葡萄糖培养基中于28℃下与不同浓度的parishin（0、3、10、30 µM）孵育23小时。加入DCFH-DA至终浓度为40 µM，并在28℃下避光孵育1小时。用PBS洗涤细胞三次，并使用荧光酶标仪（激发波长488 nm，发射波长525 nm）检测1×10⁷个细胞的DCF荧光强度。[1]
对于RT-PCR分析，将BY4741、uth1突变体和uth1、sir2双突变体（BY4741背景）用对照或parishin处理，并在28℃下摇床培养过夜。将K6001的野生型和uth1突变体在半乳糖培养基中培养过夜。收集细胞，并采用热酚法提取RNA。纯化RNA后，取5 µg总RNA进行逆转录。RT-PCR反应的热循环条件如下：RPS26A和RPL9A——95 °C 15 s，60 °C 35 s，40个循环；SIR2——94 °C 15 s，60 °C 25 s，72 °C 20 s，40个循环；TORC1——95 °C 15 s，59 °C 25 s，72 °C 20 s，40个循环。所用引物：RPS26A（正义链 5′‑TCAGAAACTTTGTAGACGCCG‑3′，反义链 5′‑ACAATTCTGGCGTGAATAGCAC‑3′），RPL9A（正义链 5′‑ATGGTGCCAAATTCATTGAAGTC‑3′，反义链 5′‑AGTTACCTGACAAGACAATTTCG‑3′），SIR2（正义链 5′‑CGTTCCCCAAGTCCTGATTA‑3′，反义链 5′‑CCACATTTTTGGGCTACCAT‑3′），TORC1（正义链 5′‑TTGGTACAAGGCATGGCATA‑3′，反义链 5′‑TACCGTCAATCCGCACATTA‑3′），TUB1（正义链 5′‑CCAAGGGCTATTTACGTGGA‑3′，反义链 5′‑GGTGTAATGGCCTCTTGCAT‑3′）。采用 2^‑ΔΔCT 法分析相对基因表达，以 TUB1 作为归一化对照。[1]

[1]. Parishin from Gastrodia elata Extends the Lifespan of Yeast via Regulation of Sir2/Uth1/TOR Signaling Pathway. Oxid Med Cell Longev. 2016;2016:4074690.

有报道指出，青蒿（Artemisia annua）和天麻（Gastrodia elata）中均发现了帕里辛A（Parishin A），相关数据可供参考。

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帕里辛是从天麻（Gastrodia elata）的根茎（干重200 g）中通过甲醇提取分离得到的，提取液经乙酸乙酯和水萃取，然后依次进行ODS柱层析、硅胶柱层析和高效液相色谱（HPLC）（Developal ODS-UG-5，甲醇/水 28:72，流速 8 mL/min，保留时间 36 min）。通过核磁共振氢谱（¹H NMR）、质谱（MS）和旋光度测定证实了其结构。[1]
帕里辛通过抗氧化应激、增加SIR2基因表达和抑制Uth1/TOR信号通路，在酵母中发挥抗衰老作用。 Uth1 可以上调 TOR 信号通路。该研究表明，parishin 可能是一种用于研发治疗衰老相关疾病药物的先导化合物。[1]

C45H56O25

996.9112

996.311

62499-28-9

10557926

Off-white to light yellow solid

1.6±0.1 g/cm3

1137.0±65.0 °C at 760 mmHg

330.0±27.8 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.657

-3.37

397.27

13

25

23

70

1540

15

O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]1([H])C([H])([H])O[H])O[H])O[H])O[H])OC1C([H])=C([H])C(C([H])([H])OC(C(C([H])([H])C(=O)OC([H])([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])O[C@@]2([H])[C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])O[H])O2)O[H])O[H])O[H])(C([H])([H])C(=O)OC([H])([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])O[C@@]2([H])[C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])O[H])O2)O[H])O[H])O[H])O[H])=O)=C([H])C=1[H]

WYKQPGOKTKQHQG-SHGJSZTHSA-N

InChI=1S/C45H56O25/c46-15-27-32(51)35(54)38(57)41(68-27)65-24-7-1-21(2-8-24)18-62-30(49)13-45(61,44(60)64-20-23-5-11-26(12-6-23)67-43-40(59)37(56)34(53)29(17-48)70-43)14-31(50)63-19-22-3-9-25(10-4-22)66-42-39(58)36(55)33(52)28(16-47)69-42/h1-12,27-29,32-43,46-48,51-59,61H,13-20H2/t27-,28-,29-,32-,33-,34-,35+,36+,37+,38-,39-,40-,41-,42-,43-/m1/s1

tris[[4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyphenyl]methyl] 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~125.39 mM)
H2O : ~100 mg/mL (~100.31 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (6.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 62.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (6.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 62.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (6.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 62.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。