| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
PBOX-6 targets the cytoskeleton, specifically acting as a microtubule-depolymerizing agent. It inhibits the assembly of purified tubulin in cell-free assays and causes microtubule depolymerization in MCF-7 cells by binding to a tubulin site distinct from those targeted by vinblastine and colchicine. This disruption of microtubule dynamics leads to cell cycle arrest and apoptosis. In leukemia cells, it selectively induces apoptosis through c-Jun NH2 terminal kinase-dependent phosphorylation and inactivation of Bcl-2 and Bcl-XL.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
PBOX 6 是一种强效的凋亡诱导蛋白，但在大鼠 R2C Leydig 细胞系中，它并无普遍的有害作用。PBOX 6（0-25 μM，16 小时）以剂量和时间依赖的方式诱导 HL-60 细胞凋亡。在 10 μM 浓度下，它还能使 DNA 断裂。PBOX 6（10 μM）激活 HL-60 细胞中的 caspase 3 样蛋白酶，导致细胞凋亡。PBOX 6（10 μM）引起细胞凋亡和细胞质中细胞色素的积累；然而，氧化应激并非造成这种影响的原因，也不依赖于 NF-κB 或外周苯二氮卓受体 (PBR)[1]。PBOX 6（25 μM）通过激活 caspase-7 诱导 MCF-7 细胞凋亡[2]。在K562细胞中，PBOX 6 (10 μM) 可导致cypA从细胞核重新分布到细胞质。PBOX 6 (10 μM) 以JNK依赖的方式诱导cypA和pin1的核质转位，需要上游的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶被激活。该结果与K562细胞的G2/M期阻滞相关[3]。在MCF-7细胞中，PBOX-6以剂量依赖性（0-50 µM，16 h）和时间依赖性（25 µM，4-72 h）的方式诱导细胞凋亡，细胞凋亡通过细胞涂片和RapiDiff染色进行检测。 [2] 在MCF-7细胞中，PBOX-6（25 µM，24 h）诱导DNA片段化，经TUNEL染色和流式细胞术证实（亚G1期凋亡峰值：22%，而对照组<3%）。[2] 在MCF-7细胞中，PBOX-6（25 µM，24 h）激活caspase-7（DEVDase活性），但不激活caspase-6（DEIDase活性）。用caspase-7抑制剂z-DEVD-cmk（200 µM）预处理可显著降低caspase-7活性和凋亡的形态学特征。 [2] 在 K562 CML 细胞中，PBOX-6 (10 µM) 可诱导环孢亲和素 A (cypA) 和 pin1 从细胞核向细胞质的核质重分布，该过程呈时间依赖性 (1-8 小时) 和剂量依赖性 (0.1-10 µM)，并通过免疫荧光定量分析。[3] 在 K562 细胞中，PBOX-6 (10 µM) 可诱导 G2/M 期阻滞，该过程呈时间和剂量依赖性（8 小时时阻滞率高达约 60%），与 cypA 和 pin1 的重分布相关，并先于细胞凋亡（24 小时后出现）。 [3]在K562细胞中，JNK抑制剂CEP-11004（5 µM，预处理1小时）和胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂TLCK（200 µM，预处理1小时）可阻断PBOX-6诱导的cypA和pin1的重新分布，但胰凝乳蛋白酶样抑制剂TPCK（20 µM）则无此作用。[3]在多种造血细胞系（KYO.1、LAMA 84、Jurkat、HL-60）和实体瘤细胞（HeLa、H1299）中，PBOX-6（10 µM，16小时）可诱导cypA和pin1的核质重新分布，但不同细胞类型的基线定位有所不同。 [3]
通过蛋白质印迹和密度分析法检测发现，与正常外周血单核细胞 (PBMC) 相比，CypA 和 pin1 在慢性粒细胞白血病 (CML) 细胞系（KYO.1、LAMA 84、K562）中过表达（4 至 10 倍）。[3] 体外实验表明，PBOX-6（0-25 μM，16 小时）以剂量和时间依赖的方式诱导 HL-60 细胞凋亡，并在 10 μM 浓度下导致 DNA 片段化。它激活 HL-60 细胞中的 caspase 3 样蛋白酶，导致细胞凋亡和细胞色素 c 在细胞质中积累，该过程不依赖于氧化应激、NF-κB 或外周苯二氮卓受体。PBOX-6（25 μM）通过激活 caspase-7 诱导 MCF-7 细胞凋亡。在K562细胞中，该化合物以JNK依赖的方式导致cypA从细胞核重新分布到细胞质，并引起cypA和pin1的核质转位，进而导致G2/M期阻滞。该化合物抑制乳腺癌细胞生长，并选择性地诱导白血病细胞凋亡，且对大鼠R2C Leydig细胞无普遍毒性作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内研究已证实PBOX-6具有抗癌和抗肿瘤活性。作为一种微管解聚剂和强效促凋亡化合物，PBOX-6在癌症治疗中具有潜在的应用价值。它能够选择性地诱导癌细胞凋亡，同时对正常细胞的毒性有限，使其成为抗癌研究的有力候选药物。尽管公开资料中关于PBOX-6体内研究的具体数据有限，但已有研究在多种动物模型中考察了其对肿瘤生长的影响。该化合物独特的作用机制和选择性特征支持其作为多种恶性肿瘤治疗药物的潜力。
|
| 酶活实验 |
半胱天冬酶活性测定：将经PBOX-6处理的细胞的胞质提取物（50 µg 蛋白）与含有 10% (w/v) 蔗糖、0.1% (w/v) CHAPS、10 mM 二硫苏糖醇和 20 µM 荧光底物（caspase-7 使用 Ac-DEVD-AMC，caspase-6 使用 Ac-DEID-AMC）的 100 mM HEPES pH 7.5 缓冲液混合，总体积为 3 ml。在 25°C 下孵育 60 分钟后，在激发波长 380 nm 和发射波长 460 nm 处监测荧光强度，并使用标准曲线定量 AMC 的释放量。 [2]
为了通过质谱鉴定cypA：将用PBOX-6（10 µM，45 min）处理的K562细胞的质膜提取物进行SDS-PAGE电泳分离，并进行银染。切取蛋白条带（~16 kDa），脱色，用胰蛋白酶消化，并用MALDI-TOF质谱进行分析。使用Mascot软件在SwissProt数据库中搜索肽质量指纹图谱；该蛋白被鉴定为人类亲环蛋白A（登录号P05092），Mascot概率评分为60，序列覆盖率为55%。[3] 在无细胞生化实验中，PBOX-6抑制纯化微管蛋白的组装，证实了其作为微管解聚剂的作用机制。该化合物结合于微管蛋白上一个不同于长春碱和秋水仙碱靶向位点的位点。采用高效液相色谱（HPLC）和质谱等分析技术测定了该化合物的纯度（>98%）和分子量（396.44 g/mol）。其在二甲基亚砜（DMSO）中的溶解度也得到了充分表征。这些分析证实了该化合物作为微管蛋白靶向剂的作用机制，并为其在细胞系统中的促凋亡活性提供了理论基础。 |
| 细胞实验 |
诱导细胞凋亡：将MCF-7细胞以3×10⁵个细胞/ml的密度接种，并用PBOX-6（0-50 µM）处理16小时或用25 µM处理4-72小时。取100 µl细胞悬液进行细胞离心，涂布于聚赖氨酸包被的载玻片上，用RapiDiff试剂盒染色，并通过光镜计数每个样本约300个细胞来确定细胞凋亡/坏死情况。[2] DNA片段化（TUNEL）：用PBOX-6（25 µM，48小时）处理的MCF-7细胞用4%多聚甲醛固定，用0.1% Triton X-100透化，并用末端转移酶和辣根过氧化物酶进行标记。使用二氨基联苯胺进行比色检测。 [2]
细胞周期分析：收集经PBOX-6处理的MCF-7或K562细胞，于4°C下用70%乙醇固定过夜，然后重悬于含RNase A（0.5 mg/ml）和碘化丙啶（200 µM）的PBS缓冲液中，于37°C孵育30分钟，并通过流式细胞术进行分析。亚G1期峰表明DNA片段化。 [2][3] 免疫荧光染色：将细胞（3×10^5/ml）用PBOX-6（10 µM，16 h）处理后进行细胞离心，用3%多聚甲醛固定30 min，用0.1% Triton X-100透化3 min，用2% BSA封闭30 min，然后与抗cypA（1:50或1:100）或抗pin1（1:10或1:100）一抗孵育1 h，再与Alexa Fluor 594或488二抗（1:200）孵育1 h。细胞核用DAPI（1 µg/ml）染色。使用荧光显微镜采集图像。 [3] 蛋白质印迹实验：将正常外周血单核细胞 (PBMC) 或慢性粒细胞白血病 (CML) 细胞（KYO.1、LAMA 84、K562）的全细胞提取物（30 µg 蛋白）经 15% SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜上，用 5% 脱脂奶粉封闭，然后用抗 cypA 或抗 pin1 一抗（1:1000）孵育，再用 HRP 标记的二抗（1:1000）孵育，最后用 ECL 法显色。膜经脱色后，用抗 β-肌动蛋白抗体进行复染，作为上样对照。使用 Image J 软件进行密度分析。[3] 在细胞实验中，评估了 PBOX-6 对多种癌细胞系中微管动力学、细胞凋亡和细胞增殖的影响。该化合物可导致 MCF-7 细胞中微管解聚。用PBOX-6（0-25 μM，16小时）处理HL-60细胞可诱导剂量和时间依赖性的细胞凋亡，并在10 μM浓度下导致DNA片段化。它能激活caspase 3样蛋白酶，并导致细胞色素c在胞质中积累。研究人员还评估了PBOX-6对白血病细胞中Bcl-2和Bcl-XL磷酸化和失活的影响。此外，该化合物诱导K562细胞发生G2/M期阻滞的能力也已被证实。 |
| 动物实验 |
PBOX-6 的动物模型包括乳腺癌和其他实体瘤的异种移植模型。该化合物通常通过注射给药。研究已考察了其对肿瘤生长、细胞凋亡诱导和存活的影响。它能够抑制癌细胞生长，同时对正常细胞的毒性有限，这支持了其作为抗癌疗法的潜力。然而，公开资料中关于其体内研究方案的详细数据有限。该化合物的药代动力学特性和耐受性已在临床前研究中得到表征。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
PBOX-6 的药代动力学数据显示，该化合物的分子量为 396.44 g/mol，分子式为 C25H20N2O3。CAS 编号为 290814-68-5。该化合物为白色至类白色固体粉末，密度为 1.2±0.1 g/cm3，沸点为 580.6±50.0 °C，LogP 值为 5.69。它可溶于 DMSO。该化合物应以粉末形式储存于 -20°C 下，最长可保存 3 年；或在 4°C 下，最长可保存 2 年；或在溶剂中储存于 -80°C 下，最长可保存 1 年。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PBOX-6 的毒性特征表明，它不会对大鼠 R2C Leydig 细胞系产生普遍毒性作用，这表明其对癌细胞的选择性高于正常细胞。这种选择性支持了其作为抗癌治疗药物的潜力。该化合物的作用机制涉及微管解聚和细胞凋亡诱导，这可能会影响快速分裂的细胞。处理药物研究化合物时应遵循标准安全预防措施。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。在研究剂量下进行的临床前研究中，未报告任何显著不良反应。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
PBOX-6 是一种微管解聚剂，它能与微管蛋白结合并破坏微管动力学，从而导致 G2/M 期阻滞和细胞凋亡。PBOX-6 已在多种癌细胞系中进行研究，包括 MCF-7（乳腺癌）、K562（慢性粒细胞白血病）、KYO.1、LAMA 84、Jurkat（T 淋巴瘤）、HL-60（早幼粒细胞白血病）、HeLa（宫颈癌）和 H1299（非小细胞肺癌）。[2][3] PBOX-6 诱导细胞凋亡的机制涉及 c-Jun N 端激酶 (JNK) 和一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的激活，且不需要 caspase-3。在 caspase-3 缺陷的 MCF-7 细胞中，PBOX-6 通过激活 caspase-7 诱导 DNA 片段化。 [2][3]
PBOX-6 可导致肽基脯氨酰异构酶环孢菌素A和pin1的核质重分布，而这两种酶在血液系统恶性肿瘤中过度表达。这种重分布与有丝分裂停滞相关，并先于细胞死亡。[3] PBOX-6 是一种吡咯并-1,5-苯并恶唑并氮杂卓 (PBOX) 化合物，可作为微管解聚剂和强效促凋亡剂。它具有显著的抗癌和抗肿瘤活性，可在体外抑制乳腺癌细胞的生长，并通过JNK依赖性磷酸化和Bcl-2和Bcl-XL的失活选择性地诱导白血病细胞凋亡。该化合物与微管蛋白结合位点不同于长春碱和秋水仙碱。其分子量为396.44 g/mol，分子式为C25H20N2O3。该化合物的CAS编号为290814-68-5。目前尚未确定该研究化合物的上市状态。 |
| 分子式 |
C25H20N2O3
|
|---|---|
| 分子量 |
396.437906265259
|
| 精确质量 |
396.147
|
| CAS号 |
290814-68-5
|
| PubChem CID |
9865511
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
580.6±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
305.0±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.640
|
| LogP |
5.69
|
| tPSA |
43.7
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
675
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
SOIZAFVNIXAZFQ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H20N2O3/c1-26(2)25(28)30-24-21-14-8-16-27(21)20-13-5-6-15-22(20)29-23(24)19-12-7-10-17-9-3-4-11-18(17)19/h3-16H,1-2H3
|
| 化学名 |
(6-naphthalen-1-ylpyrrolo[2,1-d][1,5]benzoxazepin-7-yl) N,N-dimethylcarbamate
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~33.33 mg/mL (~84.07 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5224 mL | 12.6122 mL | 25.2245 mL | |
| 5 mM | 0.5045 mL | 2.5224 mL | 5.0449 mL | |
| 10 mM | 0.2522 mL | 1.2612 mL | 2.5224 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
