PCI-34051

HDAC8 ( IC50 = 10 nM ); HDAC6 ( IC50 = 2.9 μM ); HDAC1 ( IC50 = 4 μM ); HDAC10 ( IC50 = 13 μM )
PCI-34051 is a specific inhibitor of histone deacetylase 8 (HDAC8), with high selectivity over other HDAC isoforms. In recombinant HDAC enzyme assays: - HDAC8: IC50 = 10 nM [1]
- It exhibits negligible inhibitory activity against other HDAC subtypes, including class I (HDAC1: IC50 > 1000 nM, HDAC2: IC50 > 1000 nM, HDAC3: IC50 > 1000 nM), class IIa (HDAC4: IC50 > 1000 nM, HDAC5: IC50 > 1000 nM), class IIb (HDAC6: IC50 > 1000 nM), and class III (sirtuins: IC50 > 1000 nM) [1]

体外活性：PCI-34051 对 HDAC8 具有良好的效力，Ki 为 10 nM。相对于包括 HDAC1 在内的其他 I 类 HDAC，PCI-34051 对 HDAC8 具有高选择性（大约五倍）。 PCI-34051 的选择性比 HDAC1 和 HDAC6 高 200 倍，比 HDAC2、HDAC3 和 HDAC10 高 1000 倍。 PCI-34051 抑制卵巢肿瘤系 OVCAR-3，GI50 为 6 μM，细胞死亡率为 15%。在浓度低于 25 μM 的 PCI-34051 处理的敏感细胞系中，在 24 小时或更早的时间点均未观察到显着的微管蛋白和组蛋白乙酰化。 PCI-34051 在仅源自 T 细胞恶性肿瘤的细胞系中诱导选择性细胞毒性作用。 PCI-34051 诱导 caspase 依赖性细胞凋亡。当用 5 μM PCI-34051 处理后的不同时间测量 caspase-3 活性时，在 12 小时、24 小时和 48 小时内观察到活性水平增加，这是细胞凋亡的另一个标志，与该时间点的 caspase 活性水平较高一致。 PCI-34051 不会刺激 Bid 裂解，这是外源性细胞凋亡途径的特征效应。虽然 P116 和 J.RT3-T.5 对 PCI-34051 敏感，但 PLCγ1 缺陷的 J.gamma1 系显示 PCI-34051 诱导的细胞凋亡程度显着降低。此外，稳态钙水平强烈影响 PCI-34051 诱导的细胞凋亡。 PCI-34051 诱导线粒体释放细胞色素 c。激酶测定：对于 PCI-34051 表征，使用荧光板读数器中的 96 孔测定板在 100 μL 反应体积中进行测量。对于每种同工酶。将反应缓冲液（50 mM HEPES、100 mM KCl、0.001% Tween-20、5% 二甲基亚砜，pH7.4，补充浓度为 0-0.05% 的牛血清白蛋白）中的 HDAC 蛋白与 PCI-34051 在不同浓度并孵育 15 分钟。添加胰蛋白酶至终浓度为50 nM，添加乙酰基-甘氨酸-丙氨酸-(N-乙酰基-赖氨酸)-氨基-4-甲基香豆素至终浓度为25-100 μM以引发反应。 30 分钟的滞后时间后，使用 335 nm 的激发波长和 460 nm 的检测波长在 30 分钟的时间范围内测量荧光。荧光随时间的增加被用作反应速率的量度。细胞测定：将肿瘤细胞系和人脐静脉内皮细胞培养至少两次倍增，并按照制造商的建议，在 PCI-34051 暴露结束时使用 Alamar Blue 荧光细胞增殖测定法监测生长。 PCI-34051 在 96 孔板的一式三份孔中进行测定。使用四参数逻辑方程通过非线性回归估计抑制细胞生长 50% (GI50) 和 95% 置信区间所需的浓度。

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1. T细胞淋巴瘤细胞的抗增殖与凋亡活性： - 人T细胞淋巴瘤细胞系（Jurkat、CEM、HUT-78）经PCI-34051（0.1 μM-10 μM）处理72小时。MTT实验显示剂量依赖性抑制细胞增殖，IC50值分别为：Jurkat（0.5 μM）、CEM（0.7 μM）、HUT-78（0.6 μM）。2 μM浓度下，所有细胞系的细胞活力均降低>80%[1]
- Jurkat细胞中，1 μM PCI-34051处理48小时后，膜联蛋白V-FITC/PI染色显示凋亡率达45%（对照组为7%）。蛋白质印迹检测到切割型caspase-3增加3.2倍、切割型PARP增加2.8倍，且HDAC8的非组蛋白底物乙酰化p53增加4.0倍[1]
2. 哮喘相关细胞的免疫与炎症反应调节： - 从Balb/c小鼠中分离脾细胞，用抗CD3/CD28抗体（各5 μg/mL）联合PCI-34051（0.5 μM、1 μM、2 μM）刺激72小时。ELISA显示，1 μM PCI-34051使IL-4分泌减少55%、IL-5分泌减少60%、IL-13分泌减少50%（vs. 刺激对照组）；Th1细胞因子IFN-γ分泌在1 μM浓度下增加30%[2]
- 人外周血嗜酸性粒细胞经PCI-34051（0.1 μM-1 μM）处理24小时。流式细胞术显示，1 μM PCI-34051使嗜酸性粒细胞活化（以CD69表达衡量）减少40%，脱颗粒（以ECP释放衡量）减少35%（vs. 对照组）[2]

PCI-34051 和地塞米松的给药可减少哮喘中的嗜酸性粒细胞炎症和气道高反应性，从而减少气道重塑。

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1. T细胞淋巴瘤异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雌性裸鼠（6-7周龄）皮下注射5×10⁶个Jurkat细胞。当肿瘤体积达~100 mm³时，小鼠随机分为3组（n=6/组）：溶媒组（10% DMSO+40% PEG300+50% PBS）、PCI-34051 10 mg/kg组、PCI-34051 20 mg/kg组。药物通过腹腔注射给药，每日一次，持续21天。肿瘤生长抑制率分别为40%（10 mg/kg）和70%（20 mg/kg）。第21天肿瘤重量：溶媒组1.3 g、10 mg/kg组0.78 g、20 mg/kg组0.39 g。中位生存期从溶媒组的28天延长至20 mg/kg组的42天[1]
- 20 mg/kg组Jurkat异种移植瘤的免疫组化显示，乙酰化p53增加3.5倍，切割型caspase-3阳性细胞增加2.5倍（vs. 溶媒组）[1]
2. 小鼠哮喘模型的治疗效果： - Balb/c小鼠（雌性，6-8周龄）在第0天和第7天通过腹腔注射10 μg卵清蛋白（OVA）+2 mg氢氧化铝致敏，第14-18天每日用OVA气溶胶（1% OVA溶于PBS）激发30分钟。PCI-34051在第14-18天（与OVA激发同步）通过腹腔注射给药，剂量为5 mg/kg或10 mg/kg，每日一次[2]
- 第19天检测对乙酰甲胆碱的气道高反应性（AHR）：10 mg/kg PCI-34051组AHR（以增强pause值Penh衡量）较OVA激发对照组降低60%。支气管肺泡灌洗液（BALF）分析显示，10 mg/kg PCI-34051使嗜酸性粒细胞计数减少70%、淋巴细胞计数减少50%，IL-4（45%）、IL-5（55%）、IL-13（50%）水平降低（vs. OVA对照组）[2]
- 肺组织病理学显示，10 mg/kg PCI-34051使支气管周围炎症和黏液高分泌（PAS染色衡量）较OVA对照组减少65%[2]

使用荧光板读取器中的 96 孔测定板在 100 μL 反应体积中进行测量，以进行 PCI-34051 表征。对于每个同工酶。将 HDAC 蛋白与不同浓度的 PCI-34051 组合，并在补充有牛血清白蛋白的反应缓冲液（50 mM HEPES、100 mM KCl、0.001% Tween-20、5% 二甲基亚砜，pH7.4）中孵育 15 分钟。浓度为0-0.05%。通过添加终浓度为 25–100 μM 的乙酰基-甘氨酸-Ala-(N-乙酰基-Lys)-氨基-4-甲基香豆素和终浓度为 50 nM 的胰蛋白酶来启动反应。在 30 分钟的滞后时间后，使用 335 nm 的激发波长和 460 nm 的检测波长在 30 分钟内测量荧光。通过测量荧光随时间的增加来确定反应速率。

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1. 重组HDAC8活性测定： - 将重组人HDAC8酶与荧光底物Boc-Lys(Ac)-AMC在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、137 mM NaCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA）中混合。加入不同浓度（1 nM-100 nM）的PCI-34051，混合物在37°C孵育60分钟。加入含胰蛋白酶的显影液切割去乙酰化底物，释放荧光AMC。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。计算相对于溶媒对照组的酶活性百分比，通过非线性回归（GraphPad Prism）确定IC50[1]
2. HDAC亚型选择性测定： - 重组人HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6及去乙酰化酶1采用与HDAC8相同的实验方案，PCI-34051浓度最高达10 μM。除HDAC8外，所有亚型均未观察到显著抑制（活性降低<10%）[1]

将人脐静脉内皮细胞和肿瘤细胞系培养至少两次倍增，并根据制造商的建议，在 PCI-34051 暴露结束时使用 Alamar Blue 荧光细胞增殖测定法评估生长情况。在 96 孔板中，PCI-34051 一式三份进行测试。使用具有四个参数的逻辑方程来估计抑制细胞生长 50% (GI50) 所需的浓度以及非线性回归的 95% 置信区间。

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1. T细胞淋巴瘤细胞增殖与凋亡实验： - Jurkat/CEM/HUT-78细胞分别接种于96孔板（5×10³个细胞/孔，用于MTT）或6孔板（1×10⁶个细胞/孔，用于凋亡/蛋白质印迹）。过夜孵育后，加入PCI-34051（0.1 μM-10 μM），培养72小时（MTT）或48小时（凋亡）。MTT实验：加入10 μL MTT（5 mg/mL），孵育4小时，DMSO溶解甲臜，570 nm处读取吸光度；凋亡实验：细胞用膜联蛋白V-FITC/PI染色，流式细胞术分析；蛋白质印迹：细胞用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，20 μg蛋白经SDS-PAGE分离，用抗切割型caspase-3、切割型PARP、乙酰化p53及β-肌动蛋白抗体孵育[1]
2. 哮喘相关免疫细胞实验： - 小鼠脾细胞：从Balb/c小鼠中分离脾细胞，接种于24孔板（2×10⁶个细胞/孔），用抗CD3/CD28（各5 μg/mL）联合PCI-34051（0.5-2 μM）刺激72小时，收集上清液用于ELISA检测（IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ）[2]
- 人嗜酸性粒细胞：从外周血中分离嗜酸性粒细胞，接种于96孔板（1×10⁵个细胞/孔），用PCI-34051（0.1-1 μM）处理24小时。通过流式细胞术（抗CD69-PE抗体）检测CD69表达，ELISA检测ECP释放[2]

小鼠：本研究采用哮喘小鼠模型。简而言之，所用小鼠为72只健康的雌性BALB/c小鼠，体重18至22克，年龄6至8周。小鼠单独饲养，在无病原体环境中自由摄取普通食物和水。实验开始前一周，小鼠被安置在笼中。实验分为六个处理组，分别为：PCI-34051组、Givinostat组、地塞米松组、Tubastatin A HCl组、正常对照组和单纯哮喘组。在最后五个处理组中，分别于第1、8和15天使用卵清蛋白（OVA，20 μg）和氢氧化铝凝胶（2 mg）对小鼠进行致敏。在前一次致敏7天后，使用超声雾化装置（3 mL/min，持续30分钟，每周3次，持续8周）雾化OVA（20 mg/mL）。在兴奋前30分钟，分别腹腔注射地塞米松（2.0 mg/kg）、TSA（0.5 mg/kg）、PCI-34051（0.5 mg/kg）和吉维诺司他（0.5 mg/kg）。正常对照组用生理盐水代替OVA。

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1. Jurkat T细胞淋巴瘤异种移植模型：- 将6-7周龄的雌性裸鼠饲养于SPF级条件下。将5×10⁶个Jurkat细胞（悬浮于0.1 mL PBS + 50% Matrigel中）皮下注射至右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：载体组（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）、PCI-34051 10 mg/kg 组和 PCI-34051 20 mg/kg 组。药物每日腹腔注射一次，连续给药 21 天。每周测量两次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重。监测小鼠的生存情况直至实验终点，并计算中位生存期。实验结束时，收集肿瘤组织进行免疫组织化学分析[1]
2. Balb/c 小鼠 OVA 诱导哮喘模型：- 雌性 Balb/c 小鼠（6-8 周龄）于第 0 天和第 7 天进行致敏：腹腔注射 10 μg OVA + 2 mg 氢氧化铝（溶于 0.2 mL PBS）。在第14-18天，小鼠每天接受1% OVA气雾剂（由雾化器产生）刺激30分钟。将PCI-34051溶解于溶剂（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）中，并在第14-18天每天一次腹腔注射，剂量为5 mg/kg或10 mg/kg。对照组包括未接受OVA刺激的小鼠（未接受OVA刺激）和接受OVA刺激的小鼠（仅注射溶剂）。第19天：使用全身容积描记仪测量气道高反应性（AHR）（乙酰甲胆碱剂量：0、3.125、6.25、12.5、25 mg/mL）；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）以计数炎症细胞并测量细胞因子；取肺组织进行组织病理学检查（H&E染色和PAS染色）[2]

1. T细胞淋巴瘤异种移植研究中的毒性：- 在为期21天的Jurkat异种移植研究中（每日腹腔注射10 mg/kg或20 mg/kg PCI-34051），与载体组相比，未观察到显著的体重减轻（<初始体重的5%）。血液学分析（第21天）显示白细胞、红细胞、血小板或血红蛋白均无变化。血清生化指标（ALT、AST、肌酐、BUN）均在正常范围内[1]
2. 小鼠哮喘模型中的毒性：- 在OVA激发期间，小鼠接受为期5天的PCI-34051治疗（腹腔注射5 mg/kg或10 mg/kg），未出现临床症状（嗜睡、腹泻、呼吸困难）。与载体对照组相比，体重变化<3%。肺和肝脏组织病理学检查未发现药物引起的病变[2]
3. 血浆蛋白结合（体外）：- 将人血浆加入PCI-34051（1 μM，10 μM），并在37°C下孵育30分钟。采用超滤（30 kDa截留分子量）分离游离药物。LC-MS/MS分析显示，两种浓度下血浆蛋白结合率均>92%[1]

[1]. A novel histone deacetylase 8 (HDAC8)-specific inhibitor PCI-34051 induces apoptosis in T-cell lymphomas. Leukemia. 2008 May;22(5):1026-34.

[2]. Therapeutic effects of histone deacetylase inhibitors in a murine asthma model. Inflamm Res. 2016 Dec;65(12):995-1008.

N-羟基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-6-吲哚甲酰胺是一种吲哚甲酰胺。

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1. 在T细胞淋巴瘤中的作用机制：PCI-34051特异性抑制HDAC8，导致乙酰化底物（例如p53）的积累。乙酰化的p53表现出增强的转录活性，上调促凋亡基因（例如Bax）并下调抗凋亡基因，从而诱导T细胞淋巴瘤细胞凋亡[1]
2. 在哮喘中的作用机制：PCI-34051抑制免疫细胞（T细胞、嗜酸性粒细胞）中的HDAC8，减少Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）的分泌和嗜酸性粒细胞的活化/脱颗粒。这可以减轻卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘中的气道炎症、黏液分泌过多和气道高反应性（AHR）[2]
3. 临床前意义：PCI-34051 是一种有前景的T细胞淋巴瘤候选药物（由于其选择性抑制HDAC8且毒性低），也是过敏性哮喘候选药物（由于其靶向调节Th2驱动的炎症）。其对HDAC8的特异性避免了泛HDAC抑制剂相关的毒性[1,2]

C17H16N2O3

296.32

296.116

C, 68.91; H, 5.44; N, 9.45; O, 16.20

950762-95-5

24753719

White to gray solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.621

2.2

63.49

2

3

4

22

382

0

O=C(C1C=C2C(C=CN2CC2C=CC(OC)=CC=2)=CC=1)NO

AJRGHIGYPXNABY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H16N2O3/c1-22-15-6-2-12(3-7-15)11-19-9-8-13-4-5-14(10-16(13)19)17(20)18-21/h2-10,21H,11H2,1H3,(H,18,20)

N-hydroxy-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]indole-6-carboxamide

PCI-34051; PCI 34051; PCI34051

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。