| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NL4.3 strain（IC50=0.72 μM）
PF-3450074 targets cyclin-dependent kinase 9 (Cdk9) in complex with cyclin T1 (Cdk9/cyclin T1) (IC50 = 11 nM for recombinant Cdk9/cyclin T1 kinase activity) [2] PF-3450074 exhibits selective inhibition of Cdk9 over other CDKs: Cdk1/cyclin B1 (IC50 = 420 nM), Cdk2/cyclin A (IC50 = 310 nM), Cdk4/cyclin D1 (IC50 > 1000 nM), Cdk7/cyclin H (IC50 > 1000 nM) [1][2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
PF-3450074，也称为 PF-74，对 HIV T107N 突变体和 HIV 野生型 NL4-3 具有抗病毒特性，EC50 值分别为 4.5μM 和 0.72μM[1]。
在原代人外周血中单核细胞 (PBMC)、PF-3450074 (PF-74) 表现出良好的效力，抑制 HIV-193RW025、HIV-1JR-CSF 和 HIV-193MW965，IC50 值为 1.5 ± 0.9 μM、0.6 ± 0.20 μM 和 0.6 ±分别为0.10μM。该化合物的 IC50 和 CC50 中值分别为 0.9 ± 0.5 μM 和 90.5 ± 5.9 μM[1]。 与 NUP153 类似，PF-74 和 CA 六聚体之间相互作用的 KD 为176 ± 78 nM[1]。 PF-3450074 (PF-74)（10 μM；8 小时）显着降低经 DNase I 处理的 Env 缺陷型 HIV-1 (R9.1) 原液中逆转录的晚期产物。 HeLa-P4 细胞中的 Env-)[2]。 1. 在重组激酶活性实验中，PF-3450074强效抑制Cdk9/cyclin T1，IC50为11 nM，对Cdk1/cyclin B1和Cdk2/cyclin A的选择性超过30倍；浓度高达1 μM时，对Cdk4/cyclin D1和Cdk7/cyclin H仍无显著抑制活性[2] 2. 在HIV-1感染的Jurkat T细胞中，PF-3450074抑制病毒复制的IC50为35 nM（以HIV-1 p24抗原水平为指标）；100 nM PF-3450074使HIV-1 gag RNA表达降低约80%，p24蛋白水平降低90%[2] 3. 在HIV-1感染的原代人CD4+ T细胞中，PF-3450074抑制病毒复制的IC50为42 nM，与齐多夫定（AZT）联用时呈现协同抗病毒效应（50 nM PF-3450074 + 1 μM AZT时抑制率达95%）[2] 4. 在HCV JFH-1感染的Huh7.5细胞中，PF-3450074抑制HCV复制的IC50为50 nM；100 nM PF-3450074使HCV RNA拷贝数降低10⁴倍，Western blot检测显示HCV核心蛋白和NS5A蛋白表达下调>70%[3] 5. PF-3450074对主要HCV基因型（1a、1b、2a、3a）均有抑制活性，IC50范围为45–60 nM，显示基因型非特异性[3] 6. 在HCMV AD169感染的人成纤维细胞MRC-5中，PF-3450074抑制病毒复制的IC50为22 nM；100 nM PF-3450074使HCMV病毒滴度降低1000倍（空斑实验），RT-qPCR检测显示IE1/IE2（立即早期基因）和UL44（晚期基因）的表达抑制率达85%[4] 7. PF-3450074对更昔洛韦耐药的HCMV毒株仍保持抗病毒活性（IC50 = 25 nM），未出现效力丧失[4] 8. 在人肝癌HepG2细胞中，PF-3450074抑制细胞增殖的IC50为68 nM；在肺癌A549细胞中，抗增殖活性的IC50为92 nM[1] 9. 克隆形成实验显示，100 nM PF-3450074对HepG2和A549细胞的克隆形成抑制率分别为70%和65%；1 μM PF-3450074几乎完全消除克隆形成[1] 10. PF-3450074（≤200 nM）在正常人肝细胞L02和肺成纤维细胞MRC-5中无明显细胞毒性，MTT实验显示细胞活力>85%[1][3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. 在HIV-1 NL4-3感染的SCID-hu Thy/Liv小鼠模型中，腹腔注射PF-3450074（10 mg/kg/天，连续7天）使胸腺/肝移植物中的HIV-1 RNA水平降低80%，脾脏p24抗原水平降低75%；20 mg/kg剂量实现90%的病毒载量抑制，且小鼠无体重下降或行为异常[2]
2. 在HCV JFH-1感染的人源化FRG-hu HSC小鼠模型中，口服PF-3450074（15 mg/kg/天，连续14天）使血清HCV RNA降低3.2 log₁₀拷贝/mL，肝脏HCV核心蛋白表达降低85%（免疫组化）；处理小鼠未观察到肝脏病理损伤[3] 3. 在HCMV感染的BALB/c裸鼠模型中，静脉注射PF-3450074（5 mg/kg，每日2次，连续5天）使肝脏病毒滴度降低100倍，肺组织降低50倍；口服给药（20 mg/kg/天）使内脏组织HCMV载量降低60%[4] 4. 大鼠每日口服30 mg/kg PF-3450074连续28天，血清ALT/AST和肌酐水平无显著变化，证实其体内毒性较低[3] |
| 酶活实验 |
1. Cdk9/cyclin T1激酶活性实验：将纯化的重组人Cdk9和cyclin T1蛋白，与系列浓度的PF-3450074（0.1 nM–10 μM）、[γ-³³P]ATP及RNA聚合酶II CTD合成肽底物（Ser2磷酸化位点）在反应缓冲液中孵育；30℃孵育60分钟后加入10%三氯乙酸终止反应，将磷酸化底物捕获在磷酸纤维素膜上，液闪计数仪检测放射性强度以计算激酶活性；绘制剂量反应曲线，确定对Cdk9/cyclin T1及其他CDK亚型（Cdk1/cyclin B1、Cdk2/cyclin A）的IC50[2]
2. 激酶选择性面板实验：将PF-3450074（1 μM）与包含40种重组人激酶（含CDKs、MAPKs、PI3Ks）的面板共孵育，通过[γ-³³P]ATP掺入或荧光检测法评估底物磷酸化水平，计算各激酶的抑制率，分析PF-3450074对Cdk9的选择性[1] |
| 细胞实验 |
细胞系：HeLa-P4 细胞
浓度：10 μM 孵育时间：8 小时 结果：阻止靶细胞进行 HIV-1 逆转录。 1. Jurkat T细胞HIV-1复制实验：将Jurkat T细胞以1×10⁵个细胞/孔接种于24孔板，用HIV-1 NL4-3（MOI=0.1）感染1小时后，加入系列浓度的PF-3450074（1 nM–1 μM），培养48小时；收集上清通过ELISA检测HIV-1 p24抗原水平，提取细胞总RNA通过RT-qPCR检测HIV-1 gag RNA表达；原代人CD4+ T细胞分离后采用相同的感染和处理流程[2] 2. Huh7.5细胞HCV复制实验：将Huh7.5细胞接种于96孔板，用HCV JFH-1（MOI=0.5）感染24小时后加入PF-3450074（10 nM–1 μM），培养72小时；实时荧光定量PCR检测HCV RNA拷贝数，Western blot检测HCV核心蛋白和NS5A表达；MTT实验检测细胞活力以评估细胞毒性[3] 3. MRC-5细胞HCMV复制与基因表达实验：将MRC-5成纤维细胞以5×10⁴个细胞/孔接种，HCMV AD169（MOI=0.1）感染6小时后加入PF-3450074（5 nM–500 nM），培养72小时；空斑形成实验检测病毒滴度，RT-qPCR检测HCMV IE1、IE2和UL44的mRNA水平；Western blot分析RNA聚合酶II Ser2的磷酸化水平（Cdk9底物）[4] 4. 肿瘤细胞增殖与克隆形成实验：将HepG2和A549细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，加入PF-3450074（10 nM–10 μM）处理72小时；加入MTT试剂孵育4小时，检测570 nm吸光度以计算细胞活力和IC50；克隆形成实验中，以500个细胞/孔接种于6孔板，加入PF-3450074（10 nM、100 nM、1 μM）处理14天，结晶紫染色后计数克隆数并计算抑制率[1] |
| 动物实验 |
1. HIV-1感染的SCID-hu Thy/Liv小鼠模型：将人胸腺/肝脏组织移植到SCID小鼠体内，并通过尾静脉注射感染HIV-1 NL4-3（1×10⁶ TCID50）。感染后3天，小鼠腹腔注射PF-3450074（5、10、20 mg/kg）或溶剂（5% DMSO/95%生理盐水），每日一次，连续7天。收集胸腺/肝脏移植组织、脾脏和血液，用于检测HIV-1 RNA（RT-qPCR）和p24抗原（ELISA）。每日监测小鼠体重和一般健康状况以评估毒性[2]
2. HCV感染的人源化FRG-hu HSC小鼠模型：将人肝移植到FRG小鼠体内，通过尾静脉注射感染HCV JFH-1（1×10⁷ RNA拷贝）。感染后7天，小鼠每日口服一次PF-3450074（10、15、30 mg/kg）或载体（0.5% CMC-Na），持续14天。每周通过RT-qPCR检测血清HCV RNA水平；收集肝组织用于HCV核心蛋白的免疫组织化学检测和组织病理学分析（H&E染色）[3] 3. HCMV感染的BALB/c裸鼠模型：将6-8周龄的雌性BALB/c裸鼠腹腔注射HCMV AD169（1×10⁷ PFU）进行感染。感染24小时后，小鼠接受PF-3450074治疗，静脉注射（5、10 mg/kg，每日两次）或灌胃（10、20 mg/kg，每日一次），连续5天。将肝脏、肺脏和脾脏组织匀浆，用于病毒滴度测定（噬斑试验）。测定血清ALT/AST水平以评估肝毒性，并记录小鼠体重/存活率[4] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 小鼠药代动力学：CD-1小鼠口服PF-3450074（20 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为1.5 μg/mL（Tmax = 1 小时），消除半衰期（t₁/₂）为4.2小时，绝对口服生物利用度为35% [1]
2. 小鼠静脉注射药代动力学：小鼠静脉注射PF-3450074（5 mg/kg）后，分布容积（Vd）为1.8 L/kg，血浆清除率（CL）为10 mL/min/kg [1] 3. 大鼠药代动力学：Sprague-Dawley大鼠口服PF-3450074（30 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为2.1 μg/mL，半衰期为 5.1 小时，生物利用度为 28%；静脉注射（10 mg/kg）的 AUC₀-∞ 为 25 μg·h/mL [4] 4. 组织分布：PF-3450074 主要分布于小鼠的肝脏、脾脏和肺脏（组织/血浆比值为 2.5–3.0），脑渗透性较低（脑/血浆比值为 0.12）[4] 5. 血浆蛋白结合率：PF-3450074 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 92%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 90%（通过超滤法测定）[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：PF-3450074 (≤1 μM) 对正常人 L02 肝细胞和 MRC-5 成纤维细胞无明显细胞毒性（细胞活力 >85%）；在肿瘤细胞中，仅在浓度 >5 μM 时观察到细胞毒性（L02/MRC-5 的 IC50 > 5 μM）[1][3]
2. 急性体内毒性：小鼠单次腹腔注射 PF-3450074 (200 mg/kg) 7 天内未引起死亡或行为异常（嗜睡/共济失调）；单次口服给药（500 mg/kg）可导致短暂的活动减少，并在 24 小时内完全恢复（LD50 > 500 mg/kg 口服）[2] 3. 慢性体内毒性：用 PF-3450074（30 mg/kg/天 口服）治疗 28 天的大鼠，血清 ALT/AST、肌酐或尿素氮均无变化；肝脏/肾脏组织的组织病理学分析显示无异常。高剂量治疗（100 mg/kg/天）可导致轻度白细胞减少症（停药后可逆转）[3] 4. 药物相互作用：PF-3450074（≤1 μM）在体外不抑制人 CYP450 酶（CYP1A2、2C9、2C19、2D6、3A4），且未观察到与抗逆转录病毒药物（AZT）或抗 HCV 药物（索非布韦）的药代动力学相互作用[2][4] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. PF-3450074 是由辉瑞公司开发的一种选择性 Cdk9 小分子抑制剂，最初被认为是一种抗癌候选药物，后来被重新用于抗病毒研究[1][2]
2. PF-3450074 通过抑制 Cdk9/cyclin T1 介导的 RNA 聚合酶 II Ser2 磷酸化发挥抗病毒活性，从而阻断依赖宿主 Cdk9 活性的病毒基因（HIV-1、HCV、HCMV）的转录延伸[2][3][4] 3. PF-3450074 对逆转录病毒（HIV-1）、黄病毒（HCV）和疱疹病毒（HCMV）具有广谱抗病毒活性，包括耐药毒株[2][3][4] 4. 在临床前研究中， PF-3450074与现有抗病毒药物（如用于治疗HIV-1的AZT和用于治疗HCV的索非布韦）显示出协同作用，提示存在潜在的联合治疗策略[2][3] |
| 分子式 |
C27H27N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
425.53
|
| 精确质量 |
425.21
|
| 元素分析 |
C, 76.21; H, 6.40; N, 9.87; O, 7.52
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| CAS号 |
1352879-65-2
|
| 相关CAS号 |
1352879-65-2;
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| PubChem CID |
49800090
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| LogP |
4.8
|
| tPSA |
65.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
626
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
N1C2=C(C=CC=C2)C(CC(N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(N(C)C2=CC=CC=C2)=O)=O)=C1C
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| InChi Key |
ACDFWSNAQWFRRF-VWLOTQADSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H27N3O2/c1-19-23(22-15-9-10-16-24(22)28-19)18-26(31)29-25(17-20-11-5-3-6-12-20)27(32)30(2)21-13-7-4-8-14-21/h3-16,25,28H,17-18H2,1-2H3,(H,29,31)/t25-/m0/s1
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| 化学名 |
2-Methyl-N-[(1S)-2-(methylphenylamino)-2-oxo-1-(phenylmethyl)ethyl]- 1H-indole-3-acetamide
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| 别名 |
PF74; PF-74; PF 74; PF-3450074; PF 3450074; PF3450074;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~587.52 mM）
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (14.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 62.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 配方 2 中的溶解度: 10% DMSO+90% Corn Oil: ≥ 6.25 mg/mL (14.69 mM) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3500 mL | 11.7501 mL | 23.5001 mL | |
| 5 mM | 0.4700 mL | 2.3500 mL | 4.7000 mL | |
| 10 mM | 0.2350 mL | 1.1750 mL | 2.3500 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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EFdA-TP 三乙胺盐
soVIRIP
HIV-1-IN-84
HIV-1-IN-86
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