PF-573228   中文名称: PF573228

FAK (IC50 = 4 nM)
Focal Adhesion Kinase (FAK): IC₅₀ ≈ 1.5 μM (for FAK kinase activity); Pyk2 (a FAK family kinase): IC₅₀ ≈ 36 μM (showing selective inhibition of FAK over Pyk2) [1]
- Focal Adhesion Kinase (FAK) confirmed to inhibit FAK phosphorylation (Tyr397) in vitro and in vivo [2]
Focal Adhesion Kinase (FAK), also known as Protein-Tyrosine Kinase 2 (PTK2). PF-573228 potently inhibits the catalytic activity of FAK with an IC50 of 4 nM against the purified recombinant fragment in biochemical assays. In cellular contexts, it inhibits FAK autophosphorylation at Tyr397 with IC50s ranging from 11 nM in A431 cells to 500 nM in MDCK cells. It has also been reported to activate BKCa channels with an EC50 of 3.2 μM, an off-target effect independent of FAK inhibition.

PF-573228 抑制纯化的 FAK 重组催化部分，IC50 为 4 nM [1]。 PF-573228 抑制 Tyr397 上的 FAK 磷酸化，IC50 为 30-100 nM[1]。 PF-573228 显着降低 FAK Tyr397 磷酸化 [1]。 PF-573228 减少趋化性和趋化性迁移，同时也减少粘着斑周转 [1]。

---

在A549（肺腺癌细胞）、HeLa（宫颈癌细胞）和MDA-MB-231（乳腺癌细胞）中：PF-573228（1 μM、5 μM、10 μM）可浓度依赖性降低FAK在Tyr397位点的磷酸化水平（Western blot检测），而总FAK蛋白水平无变化。这种抑制作用在基础状态和纤连蛋白诱导的FAK激活状态下均可见[1]
- 在A549细胞Transwell迁移实验中：PF-573228（5 μM、10 μM）可显著抑制细胞迁移，迁移细胞数量较溶剂对照组减少约50%-70%[1]
- 在纤连蛋白包被板的细胞黏附实验中：PF-573228（10 μM）可降低A549/MDA-MB-231细胞与纤连蛋白的黏附能力，黏附率下降约40%[1]
- 在MDA-MB-231细胞软琼脂克隆形成实验中：PF-573228（5 μM）可显著减少克隆数量并缩小克隆体积，克隆形成率较对照组下降约60%[1]
- 在人肺微血管内皮细胞（HMVEC-L）中：IL-4（10 ng/mL）可诱导VCAM-1的mRNA和蛋白表达；PF-573228（1 μM、5 μM）预处理可浓度依赖性抑制该诱导效应。在5 μM浓度下，VCAM-1 mRNA水平（qPCR检测）下降约60%，蛋白水平（Western blot检测）下降约55%[2]
- 在嗜酸性粒细胞（eosinophil）与HMVEC-L的黏附实验中：IL-4处理可增加eosinophil与HMVEC-L的黏附；PF-573228（10 μM）预处理可使黏附率下降约50%[2]
- 在HMVEC-L细胞中：PF-573228（1 μM、5 μM）可浓度依赖性抑制IL-4诱导的FAK（Tyr397）及其下游效应分子STAT6（Tyr641）的磷酸化，且不影响总FAK和总STAT6的蛋白水平[2]

在几种人类 sc 异种移植模型中，PF-562271 表现出剂量依赖性肿瘤生长抑制作用，并在 25 至 50 mg/剂量时对 PC-3M、BT474、BxPc3 和 LoVo 产生最大肿瘤抑制作用，抑制范围为 78% 至 94%每天两次体重减轻，没有体重减轻、发病或死亡。 PF-562271（25 mg/kg，口服）可显着减少皮下和骨转移 PC3M-luc-C6 异种移植模型中的肿瘤进展。在 Huh7.5 肝细胞癌异种移植模型中，舒尼替尼和 PF-562271 的联合治疗针对血管生成和肿瘤侵袭性，通过阻断肿瘤生长并影响肿瘤停药后恢复的能力，产生比单药更显着的抗肿瘤效果的治疗。

---

在卵清蛋白（OVA）诱导的过敏性气道炎症模型（雌性BALB/c小鼠，6-8周龄）中：PF-573228以25 mg/kg的剂量通过腹腔注射给药，每日1次，连续7天（OVA激发阶段）。与模型组相比：（1）支气管肺泡灌洗液（BALF）中的嗜酸性粒细胞数量减少约65%；（2）肺组织中VCAM-1蛋白表达（免疫组化/Western blot检测）下降约50%；（3）肺组织炎症评分（HE染色评估）降低，炎症细胞浸润减少、黏膜增厚减轻；（4）肺组织中FAK（Tyr397）和STAT6（Tyr641）的磷酸化水平显著下调[2]

重组激酶试验[1]
纯化活化的FAK激酶结构域（氨基酸410-689）与50 μm ATP和10 μg/孔的随机肽聚合物Glu和Tyr（摩尔比为4:1），poly（Glu/Tyr）在激酶缓冲液（50 mm HEPES, pH 7.5, 125 mm NaCl, 48 mm MgCl2）中反应15分钟。从1 μm的最高浓度开始，用1 / 2 -Log浓度的连续稀释化合物对poly（Glu/Tyr）的磷酸化进行挑战。每个浓度运行三次。用抗磷酸酪氨酸（PY20）抗体检测聚Glu/Tyr的磷酸化，然后用辣根过氧化物酶偶联山羊抗小鼠IgG抗体检测聚Glu/Tyr的磷酸化。加入标准辣根过氧化物酶底物3,3 ',5,5 ' -四甲基联苯胺，加入停止液（2 m H2SO4）后，在450 nm处获得光密度读数。IC50值采用Hill斜率模型确定。广泛的激酶选择性分析使用KinaseProfiler™选择性筛选服务，可通过获得。欲了解更多信息，请访问：www.upstate.com/discovery/services/kp_overview.q.

---

细胞激酶测定[1]
利用Invitrogen公司的GeneSwitch诱导系统，在米非司酮的诱导调节下，生成稳定的A431上皮癌克隆，表达野生型v5标记的FAK蛋白或突变型FAK Y397F v5标记的蛋白。稳定克隆在Dulbecco改良Eagle培养基、10%胎牛血清、750 μg/ml Zeocin和50 μg/ml Hygromycin中生长。在进行FAK细胞ELISA检测前一天，将A431·FAKwt细胞以1.2 × 106个/ml的浓度接种于96孔u型板的生长培养基中。37℃、5% CO2作用4 ~ 6 h后，用0.1 nm米非司酮诱导FAK表达。包括非诱导对照组。随后在山羊抗小鼠或抗兔板上涂有抗v5或抗fak （1.0 μg/ml）或在Superblock tris缓冲盐水缓冲液中涂有不相关的抗体对照。抗v5或抗fak包被板在3%牛血清白蛋白，0.5% Tween中阻断，室温下1小时。细胞在37°C， 5% CO2条件下，以1 μm的最高浓度开始½-Log连续稀释30 min。用指定浓度的化合物处理细胞的裂解物在p -裂解缓冲液中制备（50 mm Tris-HCl, pH 7.4, 1% Nonidet P-40, 0.25%脱氧胆酸钠，150 mm NaCl, 1 mm EDTA, 1 mm Na3VO4, 1 mm NaF和蛋白酶抑制剂），并将其转移到抗v5或抗FAK包被板上以捕获总诱导蛋白或总FAK蛋白。采用抗磷特异性FAK[Y397]检测自磷酸化FAK Tyr397，然后检测二级报告抗体。加入辣根过氧化物酶底物，在450 nm处读板。IC50值采用Hill斜率模型确定。为了进行Western blot分析，在CH缓冲液（50 mm HEPES, 0.15 m NaCl, 2mm EDTA， 1% Nonidet P-40和0.5%脱氧胆酸钠，pH 7.2）裂解前，用指定浓度的抑制剂处理REF52细胞，缓冲液中含有1 mm苯基甲基磺酰氟，100 mm lepeptin和0.05 TIU/ml抑酶蛋白，1 mm Na3VO4, 40 mm NaF和10 mm Na4P2O7。在悬浮/复制实验中，无论是否存在指定浓度的抑制剂，将REF52细胞悬浮在无血清培养基中，在继续存在或不存在抑制剂的情况下，允许重新附着在5 μg/ml FN包被的板上30分钟。用ch缓冲液裂解细胞，用25-50 μg的蛋白对全细胞裂解液进行Western blot分析。

---

FAK激酶活性测定实验：将重组人FAK催化结构域与底物（poly(Glu,Tyr) 4:1或FAK特异性肽段）在含ATP和MgCl₂的反应缓冲液中孵育。加入不同浓度的PF-573228（0.1 μM、0.5 μM、1 μM、5 μM、10 μM、50 μM），以溶剂作为对照。37℃孵育30分钟后，用EDTA终止反应。通过检测磷酸化底物的量评估激酶活性：或使用³²P标记的ATP进行闪烁计数，或使用抗磷酸化底物抗体进行ELISA检测。计算不同药物浓度下的抑制率，进而确定FAK的IC₅₀[1]

伤口愈合试验[1]
用10 μl移液针尖在35 mm Bioptechs delta-T培养皿上损伤融合的REF52单层，在37℃下用延时显微镜拍摄细胞迁移到创口9 h。划痕时加入PF-573,228，划痕1 h后开始拍摄。延时显微镜采用尼康TE200倒置显微镜，配有20倍差干涉对比物镜和Bioptechs加热台。这些图像是用滨松虎鲸相机拍摄的，并使用Improvision Openlab软件进行编译。在图像捕获之后，随着时间的推移，单个细胞的细胞核被跟踪，因为它们迁移到伤口，细胞速度通过细胞轨迹的长度除以电影的总时间来计算。

---

免疫荧光与细胞扩散[1]
在无血清的情况下，对贴壁的REF52细胞进行洗涤，并用浓度逐渐增加的PF-573,228处理1小时。在重复实验中，将REF52细胞在无血清和增加FAK抑制剂量的情况下悬浮30分钟。在抑制剂持续存在的情况下，将细胞镀于fn包被（5 μg/ml）的盖片（用于免疫荧光）或delta-T皿（用于差干涉对比延时电影）上60分钟。用新鲜的4%多聚甲醛固定细胞20分钟，用0.5% Triton X-100渗透2分钟，用20%山羊血清、2%牛血清白蛋白阻断30分钟。然后用paxillin或FAK Tyr(P)397抗体染色。二抗用Alexa Fluor 488或594染料标记。使用尼康Eclipse E600显微镜（60倍油物镜）、滨松数码相机和Openlab成像软件包获取图像。

---

TIRF显微镜与粘附周转分析[1]
用FLP-In系统稳定转染NIH-3T3细胞。用PF-573,228处理δ - t培养皿上的融合单层，并按上述方法用移液管尖端损伤。使用配备60 × 1.45 N.A. TIRF物镜的Nikon TE2000-E Eclipse倒置TIRF显微镜、Retiga数码相机和QCapture Pro采集软件，在37°C下观察荧光粘附。每5分钟采集一次图像，持续60-90分钟。使用Openlab软件进行图像分析。随着时间的推移，测量每种粘附的强度，并确定每种粘附的峰值（最大）强度。粘附寿命计算为粘附从其半峰强度达到峰值强度所需的时间和粘附从其峰值强度返回到其半峰强度所需的时间的总和。每个细胞至少分析了7个粘连。

---

FAK磷酸化检测（Western blot）：将A549/MDA-MB-231细胞接种于6孔板，培养至80%汇合后，用0.5% FBS血清饥饿过夜。加入PF-573228（0 μM、1 μM、5 μM、10 μM）处理1-4小时，随后用10 μg/mL纤连蛋白刺激15分钟（或不刺激，检测基础磷酸化）。裂解细胞提取总蛋白，定量后进行SDS-PAGE电泳并转印至PVDF膜。膜经封闭后，加入抗p-FAK（Tyr397）、抗总FAK和抗β-actin（内参）一抗孵育过夜，再加入二抗孵育。采用ECL化学发光显影，用ImageJ软件定量条带灰度值，分析p-FAK/总FAK的比值变化[1]
- 细胞迁移实验（Transwell）：将Transwell小室放入24孔板，下室加入含10% FBS的培养基（趋化因子）。上室接种A549细胞（5×10⁴个细胞/孔）和PF-573228（0 μM、5 μM、10 μM）。37℃、5% CO₂培养24小时后，用棉签擦去上室未迁移的细胞。下室膜下表面的迁移细胞用甲醛固定、结晶紫染色，在显微镜下计数5个随机视野的细胞数，计算迁移细胞的平均数量及抑制率[1]
- 细胞黏附实验：96孔板用10 μg/mL纤连蛋白4℃包被过夜，随后用BSA封闭。对数期细胞经胰酶消化后，重悬于无血清培养基，用PF-573228（0 μM、10 μM）预处理30分钟，然后接种到包被好的孔中，37℃孵育1小时。吸去未黏附细胞，用PBS洗涤2次，结晶紫染色后溶解，在570 nm处测定吸光度（吸光度值与黏附细胞数正相关），计算黏附率[1]
- 软琼脂克隆形成实验：6孔板铺0.6%琼脂糖底层（含10% FBS的培养基配制），凝固后铺0.3%琼脂糖上层（含MDA-MB-231细胞（1×10³个细胞/孔）和PF-573228（0 μM、5 μM））。37℃、5% CO₂培养21天后，结晶紫染色，计数直径>0.1 mm的克隆数，计算克隆形成率[1]
- VCAM-1表达检测（RT-PCR/Western blot）：将HMVEC-L细胞接种于6孔板，培养至汇合后，用0.5% FBS血清饥饿4小时。加入PF-573228（0 μM、1 μM、5 μM）预处理1小时，再加入10 ng/mL IL-4共同孵育6小时（检测mRNA）或24小时（检测蛋白）。mRNA检测：提取总RNA，逆转录为cDNA后进行实时定量PCR（qPCR），以GAPDH为内参，测定VCAM-1 mRNA相对表达量；蛋白检测：提取总蛋白，用抗VCAM-1抗体进行Western blot检测（β-actin为内参）[2]
- 嗜酸性粒细胞-内皮细胞黏附实验：96孔板中的HMVEC-L细胞用PF-573228（10 μM）预处理1小时，再加入10 ng/mL IL-4孵育24小时。通过密度梯度离心分离人外周血嗜酸性粒细胞，用Calcein-AM荧光染料标记后，加入HMVEC-L细胞孔中。37℃孵育30分钟后，吸去未黏附的嗜酸性粒细胞，PBS洗涤3次，检测荧光强度（激发波长485 nm，发射波长535 nm），定量黏附的嗜酸性粒细胞数量并计算黏附率[2]
- FAK/STAT6磷酸化检测（Western blot）：HMVEC-L细胞处理方式同VCAM-1检测实验，IL-4孵育时间为15分钟（检测磷酸化）。提取总蛋白后，用抗p-FAK（Tyr397）、抗总FAK、抗p-STAT6（Tyr641）和抗总STAT6抗体进行Western blot，定量分析磷酸化蛋白与总蛋白的比值[2]

25 mg/kg；灌胃给药
PC3M-luc-C6 异种移植模型 为了更好地了解 FAK 在白细胞募集中的作用，我们使用了一种 FAK 特异性抑制剂 (PF-573228)，并检测了其对体内 IL-4 诱导的嗜酸性粒细胞募集的影响。PF-573228 在体外抑制了 IL-4 刺激的人内皮细胞中 VCAM-1 和 CCL26 的表达。因此，嗜酸性粒细胞的黏附和跨内皮迁移被阻断。PF-573228 在体内也抑制了 IL-4 诱导的 VCAM-1 表达。利用明场活体显微镜，我们发现 PF-573228 降低了白细胞的滚动通量、黏附和迁移。我们利用嗜酸性粒细胞-GFP报告小鼠，专门研究了体内嗜酸性粒细胞的募集，发现PF-573228可减弱嗜酸性粒细胞的迁移。这项研究表明，FAK抑制剂通过影响嗜酸性粒细胞的募集来调控炎症。[2]

---

---

实验动物：雌性BALB/c小鼠（6-8周龄，18-22克）饲养于SPF级动物房（22-25℃，湿度50%-60%，12小时光照/黑暗循环），自由摄取食物和水。[2]
- 过敏性气道炎症模型的建立：小鼠分为对照组、模型组（OVA诱导）和PF-573228治疗组。致敏：在第0天和第7天，小鼠腹腔注射OVA-明矾致敏溶液。挑战：从第14天到第20天，小鼠每天经鼻给予1% OVA溶液（20 μL/只），持续7天[2]
- 药物制备和给药：将PF-573228溶解于溶剂（5% DMSO、10% Cremophor EL、85%生理盐水）中。治疗组从第14天到第20天每天腹腔注射PF-573228（25 mg/kg，10 μL/g体重）；对照组和模型组注射等体积的溶剂[2]
- 样本采集和分析：第21天，小鼠用戊巴比妥钠麻醉。通过气管插管采集支气管肺泡灌洗液（BALF）；离心后，进行白细胞总数和分类计数（嗜酸性粒细胞、中性粒细胞）。收集肺组织：一部分用4%多聚甲醛固定，用于石蜡包埋、HE染色（炎症评估）和免疫组织化学（VCAM-1检测）；另一部分用于总蛋白提取和Western blot（p-FAK、总FAK、p-STAT6、总STAT6）[2]

[1]. Cellular characterization of a novel focal adhesion kinase inhibitor. J Biol Chem. 2007 May 18;282(20):14845-52.

[2]. Inhibiting focal adhesion kinase (FAK) blocks IL-4 induced VCAM-1 expression and eosinophil recruitment in vitro and in vivo. J Leukoc Biol . 2018 Jul;104(1):147-158.

6-[[4-[(3-甲基磺酰基苯基)甲基氨基]-5-(三氟甲基)-2-嘧啶基]氨基]-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮属于喹啉类化合物。

---

黏着斑激酶 (FAK) 属于非受体蛋白酪氨酸激酶家族，该家族调控整合素和生长因子信号通路，参与细胞迁移、增殖和存活。FAK 在多种癌症中表达升高，包括乳腺癌和前列腺癌。本文描述了 FAK 抑制剂 PF-573,228 对黏着介导信号通路的干扰作用。体外实验表明，该化合物对纯化的重组 FAK 催化片段具有抑制作用，IC50 值为 4 nM。在培养细胞中，PF-573,228 以 30-100 nM 的 IC50 值抑制 FAK 在 Tyr(397) 位点的磷酸化。用显著降低 FAK Tyr(397) 磷酸化的 PF-573,228 处理细胞，并未抑制细胞生长或诱导细胞凋亡。相反，PF-573,228 处理抑制了趋化性和触觉趋化性迁移，同时抑制了黏着斑的周转。这些研究表明，PF-573,228 可作为解析 FAK 在正常细胞和癌细胞中整合素依赖性信号通路功能的有效工具，并为开发适用于临床前和患者试验的化合物奠定了基础。[1]

---

白细胞募集在正常炎症和慢性炎症性疾病中均发挥着关键作用，目前的研究致力于更好地理解这一过程的复杂性。黏着斑激酶 (FAK) 因其在癌症中的作用而广为人知，但研究表明，它也能通过快速影响内皮细胞黏着斑动力学和连接开放来调节中性粒细胞和 B16 黑色素瘤细胞的募集。最近，我们发现 FAK 相关非激酶 (FRNK)（一种常被用作 FAK 显性负性抑制剂的蛋白）能够抑制血管细胞黏附分子-1 (VCAM-1) 和嗜酸性粒细胞趋化因子-3 (CCL26) 的转录，从而阻断嗜酸性粒细胞的跨内皮迁移。令人惊讶的是，即使在内源性 FAK 缺失的情况下，这种阻断作用仍然存在。为了更好地了解 FAK 在白细胞募集中的作用，我们使用了一种 FAK 特异性抑制剂 (PF-573228)，并检测了其对体外和体内 IL-4 诱导的嗜酸性粒细胞募集的影响。结果表明，PF-573228 能够抑制体外 IL-4 刺激的人内皮细胞中 VCAM-1 和 CCL26 的表达。因此，嗜酸性粒细胞的黏附和跨内皮迁移受到阻断。PF-572338 还抑制了体内 IL-4 诱导的 VCAM-1 表达。利用明场活体显微镜，我们发现 PF-573228 降低了白细胞的滚动通量、黏附和迁移。我们使用嗜酸性粒细胞-GFP 报告基因小鼠专门检测了体内嗜酸性粒细胞的募集，发现 PF-573228 减弱了嗜酸性粒细胞的迁移。这项研究揭示了 FAK 抑制剂通过其对嗜酸性粒细胞募集的作用来影响炎症。[2] PF-573228 是一种新型的选择性小分子 FAK 抑制剂。它通过直接抑制 FAK 激酶活性发挥生物学效应，从而干扰 FAK 介导的信号通路（例如 PI3K/Akt、MAPK），并调节细胞黏附、迁移、增殖和存活。它是一种用于研究 FAK 生物学功能和探索 FAK 靶向癌症疗法的宝贵工具化合物 [1]
- PF-573228 通过阻断 FAK 活性来抑制 IL-4 诱导的 STAT6 磷酸化和 VCAM-1 表达，从而减少嗜酸性粒细胞向炎症部位的募集。这表明 PF-573228 在嗜酸性粒细胞相关炎症性疾病（例如过敏性哮喘）中具有潜在的治疗价值，并为炎症性疾病的治疗提供了一种新的靶点/策略 [2]

C22H20F3N5O3S

491.486113548279

491.123

C, 53.76; H, 4.10; F, 11.60; N, 14.25; O, 9.77; S, 6.52

869288-64-2

11612883

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.616

1.03

121.46

3

10

6

34

822

0

O=C1CCC2C(=CC=C(NC3N=C(NCC4C=C(S(C)(=O)=O)C=CC=4)C(C(F)(F)F)=CN=3)C=2)N1

HESLKTSGTIBHJU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H20F3N5O3S/c1-34(32,33)16-4-2-3-13(9-16)11-26-20-17(22(23,24)25)12-27-21(30-20)28-15-6-7-18-14(10-15)5-8-19(31)29-18/h2-4,6-7,9-10,12H,5,8,11H2,1H3,(H,29,31)(H2,26,27,28,30)

3,4-Dihydro-6-[[4-[[[3-(methylsulfonyl)phenyl]methyl]amino]-5-(trifluoromethyl)-2-pyrimidinyl]amino]-2(1H)-quinolinone

PF573,228; PF 573,228; PF-573,228; PF573228; 869288-64-2; PF-573228; PF 573228; PF573228; PF-228; 3,4-Dihydro-6-[[4-[[[3-(methylsulfonyl)phenyl]methyl]amino]-5-(trifluoromethyl)-2-pyrimidinyl]amino]-2(1H)-quinolinone; 6-((4-((3-(Methylsulfonyl)benzyl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-yl)amino)-3,4-dihydroquinolin-2(1H)-one; 6-(4-(3-(methylsulfonyl)benzylamino)-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-ylamino)-3,4-dihydroquinolin-2(1H)-one; PF 573228; PF-573228;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.09 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:30 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。