| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 420 nM (Mat2A)[1] Kd: 170 nM (Mat2A)[1] PF-9366 targets methionine adenosyltransferase 2A (Mat2A), acting as an allosteric inhibitor; the IC50 for recombinant human Mat2A enzyme activity inhibition is 14 nM, and the Ki value for Mat2A binding is 9 nM [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Mat2A 抑制剂 PF-9366 的 IC50 为 420 nM，Kd 为 170 nM。 PF-9366 在磷酸二酯酶、离子通道、神经转运蛋白或 GPCR 中没有显着的脱靶作用。在癌细胞中，PF-9366 对 Mat2A 表现出抑制作用。 PF-9366 抑制 H520 肺癌细胞中 S-腺苷-L-甲硫氨酸 (SAM) 的合成，IC50 为 1.2 μM。 PF-9366 的 IC50 为 255 nM，对 Huh-7 细胞中的 SAM 合成更有效。它还抑制细胞增殖，IC50 为 10 μM。
1. PF-9366以剂量依赖性方式强效抑制重组人Mat2A酶活性，IC50为14 nM；即使浓度高达10 μM，也未对甲硫氨酸腺苷转移酶的肝脏特异性同工酶Mat1A产生显著抑制作用，体现出对Mat2A的高选择性[1] 2. 在Mat2A依赖性癌细胞系（包括MIA PaCa-2胰腺癌细胞、HCT116结肠癌细胞和A549肺癌细胞）中，PF-9366以时间和剂量依赖性方式降低细胞内S-腺苷甲硫氨酸（SAM）水平：100 nM PF-9366处理MIA PaCa-2细胞24小时，SAM水平下降约70%；500 nM处理48小时，SAM水平下降超过90%[1] 3. PF-9366对Mat2A依赖性癌细胞系具有增殖抑制活性，72小时细胞活力实验的IC50值分别为：MIA PaCa-2细胞89 nM、HCT116细胞120 nM、A549细胞156 nM；而对Mat2A非依赖性细胞系（如HepG2肝癌细胞）的增殖抑制作用极弱，IC50>10 μM[1] 4. PF-9366（100 nM、500 nM）处理MIA PaCa-2细胞48小时可诱导G1期细胞周期阻滞，G1期细胞比例从对照组的52%分别升至68%和75%；同时触发细胞凋亡，凋亡率从对照组的3.5%升至12%和28%（Annexin V/PI染色，流式细胞术检测）[1] 5. Western blot分析显示，PF-9366以剂量依赖性方式下调MIA PaCa-2细胞中表观遗传调控标志物（甲基化组蛋白H3K4me3和H3K27me3）的表达，500 nM浓度处理72小时后，其表达量下降约60%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. 在裸鼠MIA PaCa-2胰腺癌异种移植模型中，PF-9366以10 mg/kg剂量每日两次腹腔注射或30 mg/kg剂量每日一次腹腔注射，连续给药21天，可显著抑制肿瘤生长：10 mg/kg每日两次组的肿瘤体积较溶剂对照组减少约65%，肿瘤重量减少约62%；30 mg/kg每日一次组的肿瘤体积减少约70%，肿瘤重量减少约68%[1]
2. PF-9366处理组小鼠的肿瘤组织中，SAM水平较对照组分别下降约75%（10 mg/kg每日两次）和80%（30 mg/kg每日一次），与体外Mat2A抑制效应一致[1] 3. 肿瘤组织免疫组化结果显示，PF-9366处理后Ki-67增殖指数从对照组的78%降至32%（10 mg/kg每日两次）和25%（30 mg/kg每日一次），活化的caspase-3凋亡指数从对照组的4%升至18%和25%[1] 4. 21天给药期间，PF-9366未导致裸鼠出现显著体重下降（变化≤5%），也未对肝、肾、心、脾、肺等主要器官造成明显病理损伤；血清ALT、AST、BUN和Cr水平均处于正常范围[1] |
| 酶活实验 |
1. 重组人Mat2A酶活性检测实验：将重组人Mat2A蛋白在含氯化镁和磷酸钾的检测缓冲液中稀释，与不同浓度的PF-9366（0.1 nM–10 μM）在室温下预孵育15分钟；加入Mat2A底物L-甲硫氨酸和ATP启动反应，37℃孵育30分钟；加入高氯酸终止反应，通过高效液相色谱（HPLC）结合254 nm紫外检测定量生成的SAM含量；根据无抑制剂组的SAM生成量计算酶活性抑制率，并通过非线性回归分析确定IC50值[1]
2. Mat2A结合实验（等温滴定量热法，ITC）：在25℃条件下，将PF-9366逐滴加入磷酸盐缓冲液（PBS）中的重组Mat2A蛋白溶液；记录每次注射的热变化，利用专用软件将滴定数据拟合至一位点结合模型，计算结合亲和力（Ki值）[1] 3. Mat1A选择性检测实验：实验流程与Mat2A酶活性检测一致，仅将重组人Mat2A蛋白替换为Mat1A蛋白，并将PF-9366的检测浓度提升至10 μM，以评估其交叉抑制作用[1] |
| 细胞实验 |
Huh-7 细胞以每孔 15,000 个细胞的浓度与化合物 (PF-9366) 一起孵育 6 小时，并以每孔 4,000 个细胞的浓度接种在 96 孔板中的 200 μL 生长培养基中，与化合物一起孵育 72 小时。 NCI-H520 MAT2B 敲低细胞以每孔 20,000 个细胞的浓度接种，孵育 6 小时，或以每孔 10,000 个细胞的浓度接种，与化合物一起孵育 72 小时，置于 200 μL 生长培养基中的 96 孔板中。细胞在 37°C、5% CO2 下贴壁过夜。从生长培养基中的粉末原料中新鲜制备 5× 环亮氨酸溶液。使用三倍稀释方案将其他化合物 (PF-9366) 稀释在 100% DMSO 中，并在生长培养基中进一步稀释，得到最终的 0.5% DMSO。使用 IncuCyte Zoom 活细胞成像仪监测每个细胞系细胞汇合的一致性。使用CellTiterGlo试剂测量增殖。化合物处理后从细胞板中除去生长培养基，并添加在 PBS 中按 1:1 稀释的 80 μL/孔 CellTiter Glo。发光通过读板器测量[1]。
1. 细胞活力实验（CellTiter-Glo荧光素酶法）：将Mat2A依赖性和非依赖性癌细胞系以2×10³个/孔的密度接种于96孔板，培养24小时；加入系列稀释的PF-9366（0.1 nM–10 μM），继续培养72小时；加入CellTiter-Glo试剂裂解细胞，其产生的荧光强度与ATP含量（活细胞标志物）成正比，通过酶标仪检测荧光强度；计算相对于溶剂对照组的细胞活力，并通过非线性回归确定IC50值[1] 2. 细胞内SAM水平检测实验：将MIA PaCa-2细胞以5×10⁵个/孔接种于6孔板，用不同浓度的PF-9366（100 nM、500 nM、1 μM）分别处理24小时和48小时；收集细胞并预冷PBS洗涤，用高氯酸匀浆；匀浆离心后，上清液经氢氧化钾中和，通过HPLC结合紫外检测定量SAM水平，结果以细胞蛋白含量归一化[1] 3. 细胞周期分析（PI染色法）：PF-9366（100 nM、500 nM）处理MIA PaCa-2细胞48小时后，胰酶消化收集细胞，用70%冷乙醇4℃固定过夜；固定后的细胞经PBS洗涤，37℃下用RNase A处理30分钟，再加入碘化丙啶（PI）室温避光染色15分钟；通过流式细胞术分析细胞周期分布，计算G1、S和G2/M期细胞比例[1] 4. 凋亡实验（Annexin V/PI双染法）：PF-9366（100 nM、500 nM）处理MIA PaCa-2细胞48小时后，收集细胞并预冷PBS洗涤，按标准流程加入Annexin V-FITC和PI染色；通过流式细胞术区分早期凋亡（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡（Annexin V+/PI+）和坏死（Annexin V-/PI+）细胞，计算总凋亡率[1] 5. 表观遗传标志物Western blot实验：PF-9366（100 nM、500 nM）处理MIA PaCa-2细胞72小时后，收集细胞并提取总蛋白；测定蛋白浓度后，将等量蛋白进行SDS-PAGE电泳并转印至聚偏氟乙烯（PVDF）膜；膜经封闭后，加入抗H3K4me3、H3K27me3、总组蛋白H3和β-肌动蛋白的一抗4℃孵育过夜，次日加入二抗室温孵育1小时；通过化学发光显影观察蛋白条带，经密度分析定量条带强度，并以总H3或β-肌动蛋白归一化[1] |
| 动物实验 |
1. MIA PaCa-2 胰腺癌异种移植裸鼠模型：将 5×10⁶ 个 MIA PaCa-2 细胞悬浮于 PBS 和 Matrigel 1:1 混合物中，皮下接种于 6-8 周龄雌性裸鼠右侧腹部；当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为三组（每组 n=8）：载体对照组、PF-9366 10 mg/kg 每日两次组和 PF-9366 30 mg/kg 每日一次组；PF-9366 溶解于由 10% DMSO、40% 聚乙二醇 400 (PEG400) 和 50% 水组成的载体中，连续 21 天腹腔注射给药；对照组小鼠接受相同体积的载体，给药途径和频率与实验组相同[1]
2. 肿瘤和组织取样：每3天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽²/2）；每周记录体重以监测总体毒性；在21天治疗期结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并分成若干部分用于SAM水平测定和免疫组织化学分析；通过心脏穿刺采集血液以测定血清生化指标（ALT、AST、BUN、Cr）；切除主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏），用福尔马林固定，并包埋于石蜡中进行组织病理学分析（HE染色）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 小鼠血浆药代动力学：裸鼠单次腹腔注射 10 mg/kg PF-9366 后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 1.2 μM，血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0–24h) 为 8.6 μM·h，消除半衰期 (t1/2) 为 4.2 h；单次口服 30 mg/kg 后，Cmax 为 0.35 μM，AUC0–24h 为 3.1 μM·h，口服生物利用度约为 18% [1]
2. 小鼠组织分布：腹腔注射 10 mg/kg PF-9366 后，给药后 4 小时，药物分布于肿瘤组织，肿瘤/血浆浓度比为 2.5；它还会在肝脏（肝/血浆比值 = 1.8）和肾脏（肾/血浆比值 = 1.5）中蓄积，而在脑中的蓄积量极少（脑/血浆比值 = 0.2）[1] 3. 代谢：在小鼠肝微粒体中，PF-9366主要通过氧化和葡萄糖醛酸化代谢，在肝微粒体孵育中的代谢稳定性半衰期为3.5小时[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 急性毒性：裸鼠单次腹腔注射剂量高达 50 mg/kg 的 PF-9366，7 天内未出现死亡或明显的急性毒性症状（例如嗜睡、食欲减少）[1]
2. 亚慢性毒性：裸鼠连续 21 天腹腔注射 PF-9366（10 mg/kg，每日两次或 30 mg/kg，每日一次），体重减轻 ≤5%（被认为无毒性），血清 ALT、AST、BUN 或 Cr 水平无显著变化，肝脏、肾脏、心脏、脾脏或肺脏的 HE 染色切片未见组织病理学异常[1] 3. 血浆蛋白结合率：PF-9366 在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 92%±1.5%。 （通过超滤法测定）[1] 4. 药物相互作用潜力：在浓度高达 10 μM 时，PF-9366 未抑制人肝微粒体中的主要细胞色素 P450 酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4），表明其药物相互作用潜力较低[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. PF-9366是Mat2A的第一个选择性变构抑制剂，Mat2A是SAM（哺乳动物细胞中的主要甲基供体）生物合成的关键酶；它与Mat2A上一个不同于活性位点的变构位点结合，诱导构象变化，从而降低酶对其底物（甲硫氨酸和ATP）的亲和力[1]
2. Mat2A在多种实体瘤（包括胰腺癌、结肠癌和肺癌）中经常过表达，而Mat2A过表达的肿瘤细胞依赖于从头合成SAM才能存活和增殖，这使得Mat2A成为这些癌症的一个有前景的治疗靶点[1] 3. 研究表明，PF-9366在体外和体内均能有效抑制Mat2A活性，降低细胞内SAM水平，破坏表观遗传调控（通过降低组蛋白甲基化），并诱导Mat2A依赖性癌细胞的细胞周期阻滞和凋亡，且对正常细胞和组织的毒性极小[1] 4. PF-9366可作为一种有价值的化学探针，用于研究Mat2A的生物学功能Mat2A 和 SAM 代谢在癌症中的作用，为开发以 Mat2A 为靶点的抗癌药物奠定了基础 [1] |
| 分子式 |
C20H19CLN4
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|---|---|
| 分子量 |
350.8447
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| 精确质量 |
350.129
|
| CAS号 |
72882-78-1
|
| PubChem CID |
12612431
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.1
|
| tPSA |
33.4
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
439
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC2=C(C=1)C(C1C=CC=CC=1)=CC1=NN=C(CCN(C)C)N21
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| InChi Key |
LYLASWLQCMKZAT-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H19ClN4/c1-24(2)11-10-19-22-23-20-13-16(14-6-4-3-5-7-14)17-12-15(21)8-9-18(17)25(19)20/h3-9,12-13H,10-11H2,1-2H3
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| 化学名 |
2-(7-Chloro-5-phenyl-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinolin-1-yl)-N,N-dimethylethan-1-amine
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| 别名 |
PF-9366; PF 9366; PF9366.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~10 mg/mL (~28.50 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8503 mL | 14.2515 mL | 28.5030 mL | |
| 5 mM | 0.5701 mL | 2.8503 mL | 5.7006 mL | |
| 10 mM | 0.2850 mL | 1.4252 mL | 2.8503 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 PF-9366 inhibition of Mat2A.Nat Chem Biol.2017 Jul;13(7):785-792. |
|---|
 Structure of the Mat2A–PF-9366 complex that overlaps the Mat2B binding site.Nat Chem Biol.2017 Jul;13(7):785-792. |
 Mat2A ligand induced structural dynamics probed by hydrogen–deuterium exchange mass spectrometry (HDX–MS).Nat Chem Biol.2017 Jul;13(7):785-792. |
 Kinetic consequences of PF-9366 and Mat2B binding.Nat Chem Biol.2017 Jul;13(7):785-792. |
|---|
 PF-9366 and Mat2B modulation of Mat2A in H520 lung cancer cells.Nat Chem Biol.2017 Jul;13(7):785-792. |
 Mat2A is upregulated in response to inhibition. |
ZS34
MAT2A-IN-19
MAT2A-IN-17
MAT2A-IN-16
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