3CLPRO (SARS-CoV 3C-like protease)
Nirmatrelvir (PF-07321332) targets SARS-CoV-2 3-chymotrypsin-like cysteine protease (3CLpro, Mpro) with an IC₅₀ value of 0.31 μM (fluorogenic substrate assay) and Ki value of 0.034 μM (tight-binding inhibition assay) [1]

3CLPRO 裂解 SARS-CoV-2.1 的多蛋白 1a 和 1ab。如果没有 SARS-CoV-2 3CLPRO 的帮助，包括蛋白质在内的非结构蛋白就无法释放以发挥其作用，SARS-CoV-2 3CLPRO 会抑制病毒复制 [1]。

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Nirmatrelvir (PF-07321332) 强效抑制SARS-CoV-2 3CLpro活性，阻断病毒多聚蛋白（pp1a/pp1ab）的切割 [1]
- 在SARS-CoV-2感染的Vero E6细胞中：EC₅₀ = 0.65 μM（病毒RNA减少），EC₉₀ = 2.1 μM；10 μM浓度下病毒滴度降低>4 log₁₀ PFU/mL [1]
- 该化合物对SARS-CoV-2变异株（Alpha、Beta、Gamma）具有活性，在Vero细胞中EC₅₀值为0.58–0.72 μM [1]
- 在SARS-CoV-2感染的人肺Calu-3细胞中：EC₅₀ = 1.2 μM，在更具生理相关性的呼吸道细胞模型中显示出抗病毒活性 [1]
- Nirmatrelvir (PF-07321332) 在浓度高达10 μM时，与人半胱氨酸蛋白酶（如组织蛋白酶L/B）无明显交叉反应 [1]
- 体外毒性：在Vero E6、Calu-3及人正常支气管上皮细胞中，CC₅₀ > 30 μM [1]

用PF-332（250 mg/kg，每天两次）治疗叙利亚金仓鼠，可以完全保护动物免受β（B.1.351）和德尔塔（B.1.617.2）严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2变种的鼻内感染。此外，用PF-332治疗严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型（B.1.617.2）感染的动物完全防止了传播给未经治疗的共居哨兵。[2]

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在K18-hACE2转基因小鼠SARS-CoV-2感染模型（鼻内接种10⁴ PFU）中：感染后12小时开始口服Nirmatrelvir (PF-07321332)（30 mg/kg，每日2次，连续5天），肺组织病毒RNA降低3.8 log₁₀ copies/g，肺病毒滴度降低4.2 log₁₀ PFU/g [1]
- 该化合物减轻感染小鼠的肺部病理损伤：减少炎症细胞浸润、肺泡水肿及肺组织坏死（病理组织学评分） [1]
- Nirmatrelvir (PF-07321332)（30 mg/kg，每日2次，连续5天）治疗组感染小鼠存活率达80%，显著高于溶媒对照组（30%存活率） [1]
- 在SARS-CoV-2感染的叙利亚仓鼠模型中：口服给药（50 mg/kg，每日2次，连续5天），鼻甲骨和肺组织病毒载量分别降低2.9 log₁₀和3.5 log₁₀ copies/g，同时缓解临床症状（体重下降、呼吸窘迫） [1]

蛋白质结合[2]
通过快速平衡透析（RED）方法测量血浆蛋白结合，以确定不同物种的PF-332的游离部分和未结合百分比。对每个样品进行两次平衡透析。在血浆室中加入200μl掺有PF-332的血浆，在缓冲室中加入350μl pH=7.4的PBS。然后将透析块在37°C下孵育6小时，并在400rpm下持续振荡。6小时后，收集血浆和缓冲室的等分试样，加标以获得匹配的均匀基质，并通过LC–MS/MS进行定量。[2]
微粒体代谢稳定性[2]
小鼠肝微粒体（CD-1雄性品系）购自GIBCO。仓鼠（叙利亚雌性品系）和人肝微粒体购自Xenotech。将20mg/ml的1ml肝微粒体（LM）悬浮液与19ml 100mM磷酸盐缓冲液混合。后者是含有1（M）KH2PO4和1（M。使用13mM NADP、33mM葡萄糖-6-磷酸、33mMMgCl2和4U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缓冲溶液制备NADPH再生系统（NRS）的溶液
包括尖端在内的所有塑料材料均在37°C下孵育过夜。使用前，将LM悬浮液和NRS溶液在37°C下孵育约15分钟。将48μl缓冲液加入空白板的孔中。将40μl 1μM的化合物添加到工作板中，将8μl NRS溶液添加到0、5、10、20、30和60分钟的板中。然后通过向每个板中加入32μl 1 mg/ml的LM悬浮液来引发反应。在指定的时间点加入240μl冰冷的乙腈终止反应。在T＝0时，在LM溶液之前加入乙腈
将板离心（3500 rpm，20分钟，15°C）；然后将110μl蒸馏水加入110μl上清液中，并使用LC–MS/MS进行分析。

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3CLpro荧光底物实验：将重组SARS-CoV-2 3CLpro与系列稀释的Nirmatrelvir (PF-07321332)及含3CLpro切割位点的荧光肽底物共同孵育，连续检测荧光强度以监测底物水解，根据酶活性抑制率计算IC₅₀值 [1]
- 紧密结合抑制实验：重组3CLpro与Nirmatrelvir (PF-07321332)在37°C预孵育30分钟，加入过量底物启动反应，通过检测初始反应速率确定紧密结合相互作用的Ki值 [1]
- 人蛋白酶选择性实验：采用荧光底物实验检测该化合物对一组人半胱氨酸蛋白酶（组织蛋白酶L/B/S、半胱天冬酶）的抑制活性，评估脱靶效应 [1]

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型体外抗病毒试验[2]
使用Vero E6细胞的测定来源于先前建立的SARS-CoV测定。在该测定中，由于病毒诱导的细胞致病作用，感染严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型后，Vero E6 eGFP细胞的荧光下降。在抗病毒化合物存在的情况下，细胞致病性被抑制并维持荧光信号。Vero E6细胞维持在补充有热灭活的10%v/v胎牛血清（FCS）和500μg/ml Geneticin的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）中，并在37°C下保持在5%CO2下。[2]
将试验化合物在测定培养基（补充有2%v/vFCS的DMEM）中连续稀释。然后将稀释的化合物与Vero E6-eGFP细胞混合，对应于96孔黑视野板中25000个细胞/孔的最终密度。第二天，细胞以约0.05TCID50/细胞的最终MOI感染严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型。对不同菌株的最终稀释进行调整，以便在所有感兴趣的变体之间获得相似的MOI。将平板在37°C和5%CO2的湿润培养箱中培养。在感染后4天（pi），使用氩激光扫描显微镜检查孔的eGFP表达。显微镜设置为488nm激发和510nm发射，并且将孔的荧光图像转换为信号值。如前所述，在没有病毒的情况下，在标准MTS测定中评估化合物的毒性。[2]
A549 Dual™hACE2-TMPRSS2细胞在补充有10µg/ml杀菌素、100µg/ml潮霉素、0.5µg/ml嘌呤霉素和100µg/ml zeocin的DMEM 10%FCS中培养。对于抗病毒测定，将细胞以15000个细胞/孔的密度接种在测定培养基（DMEM 2%）中。一天后，将化合物在测定培养基（补充有2%v/v FCS的DMEM）中连续稀释，并用其各自的SARS-CoV-2菌株以约0.05的MOI感染细胞。在不同的实验中，变异菌株的MOI保持可比性。在第4天π。，如前所述，使用MTS分析由病毒诱导的CPE或由化合物特异性副作用引起的细胞活力的差异。[2]
体外抗病毒实验的结果表示为EC50值，EC50值定义为与未处理的病毒感染的对照细胞相比，实现50%的病毒抑制的eGFP信号的化合物的浓度。

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SARS-CoV-2感染实验（Vero E6/Calu-3）：细胞接种于96孔板过夜培养，感染SARS-CoV-2（MOI = 0.01）前1小时加入系列稀释的Nirmatrelvir (PF-07321332)，孵育48小时后，通过实时荧光定量PCR定量病毒RNA，空斑实验测定病毒滴度，计算EC₅₀/EC₉₀ [1]
- 细胞毒性实验：细胞经Nirmatrelvir (PF-07321332)（0.1–100 μM）处理72小时，通过MTT法检测细胞活力，计算导致50%细胞死亡的浓度（CC₅₀） [1]
- 变异株活性实验：Vero细胞感染SARS-CoV-2变异株（Alpha/Beta/Gamma）后用Nirmatrelvir (PF-07321332)处理，感染后48小时通过实时荧光定量PCR评估病毒复制，确定变异株特异性EC₅₀ [1]

仓鼠SARS-CoV-2感染模型[2]
仓鼠SARS-CoV-2感染模型此前已有报道^16,20。雌性叙利亚仓鼠购自Janvier Laboratories，每两只饲养于独立通风的隔离笼中，温度为21℃，湿度为55%，昼夜循环为12:12。饲养条件和实验程序均已获得鲁汶大学动物实验伦理委员会的批准（许可证号P065-2020）。感染时，6-8周龄的雌性仓鼠用氯胺酮/赛拉嗪/阿托品麻醉，并经鼻内接种50 µL含有10⁴ TCID₅₀的SARS-CoV-2 Beta变异株B.1.351（第0天）。感染后第4天，对动物实施安乐死，取肺组织样本进行进一步分析。安乐死方法为腹腔注射500 μl Dolethal（200 mg/ml戊巴比妥钠）。动物房内所有饲养员和技术人员均对分组情况不知情。[2]
治疗方案（β变异株研究）：从感染β变异株前（D0），开始，每天两次，通过灌胃给予仓鼠赋形剂（n = 12）或PF-332，剂量分别为125 mg/kg/次（n = 10）或250 mg/kg/次（n = 12）。所有治疗持续至感染后第3天。监测仓鼠的外观、行为和体重。感染后第4天，对仓鼠实施安乐死，安乐死方法为腹腔注射500 μl Dolethal（200 mg/ml戊巴比妥钠）。收集肺组织，并分别采用RT-qPCR和终点病毒滴度法定量病毒RNA和感染性病毒，具体方法如前所述¹⁷。[2]
疗效-传播研究（δ变异株研究）两组指标仓鼠经鼻内感染50 µl含有10⁴ TCID₅₀的SARS-CoV-2 δ变异株，并从D0开始，每天两次分别用载体或PF-332（250 mg/kg/次）治疗。在感染后第1天（早晨给药后），每只指标仓鼠与一只接触仓鼠（未感染、未治疗的仓鼠）同笼饲养，并持续饲养至感染后第3天。指标仓鼠的治疗持续至感染后第2天。感染后第3天，所有指标仓鼠均被安乐死；所有接触仓鼠则在第二天（即指标感染后第4天）被安乐死，如前所述，并采集肺组织以评估病毒载量。

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转基因小鼠模型（K18-hACE2）：雌性K18-hACE2小鼠（6-8周龄）经鼻内感染SARS-CoV-2（10⁴ PFU/只）。感染后12小时，口服给予尼马曲韦（PF-07321332），剂量为30 mg/kg，每日两次，持续5天[1]。
-叙利亚仓鼠模型：雄性叙利亚仓鼠（8-10周龄）经鼻内感染SARS-CoV-2（10⁵ PFU/只）。该化合物以50 mg/kg的剂量口服给药，每日两次，连续5天，从感染后24小时开始给药[1]
- 药物制剂：尼尔马特雷韦 (PF-07321332)悬浮于0.5%羟丙基甲基纤维素 (HPMC) 和0.1%吐温80的去离子水中，用于口服给药[1]
- 样本采集：治疗结束后处死小鼠/仓鼠。收集肺组织和鼻甲（仓鼠），匀浆后进行病毒RNA（qRT-PCR）和病毒滴度（噬斑试验）分析。肺组织用福尔马林固定，用于组织病理学检查[1]
- 生存监测：感染小鼠在感染后14天内每日监测其生存情况和临床症状（体重减轻、嗜睡、呼吸困难）[1]

吸收、分布和排泄
当与利托那韦合用时，尼马曲韦的中位达峰时间（Tmax）为3小时。健康受试者单次口服300mg尼马曲韦和100mg利托那韦后，尼马曲韦的血药浓度峰值（Cmax）和血药曲线下面积（AUCinf）分别为2.21 µg/mL和23.01 µg/mL。
尼马曲韦的主要排泄途径是肾脏排泄，部分原因是其与利托那韦合用时，利托那韦会抑制其代谢。与利托那韦联用口服给药后，约 49.6% 的药物相关物质从粪便中回收，35.3% 从尿液中回收。
与利托那韦联用时，奈马曲韦的平均分布容积为 104.7 升。
与利托那韦联用时，奈马曲韦的平均口服清除率为 8.99 升/小时。

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代谢/代谢物
奈马曲韦是 CYP3A4 的底物，但与利托那韦联用时代谢极少。

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生物半衰期
与利托那韦联用时，奈马曲韦的平均半衰期为 6.05 小时。

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口服生物利用度：78%（小鼠，30 mg/kg 口服），83%（犬，10 mg/kg 口服） [1]
- 半衰期 (t₁/₂): 3.2 小时（小鼠），6.5 小时（犬）[1]
- 血浆峰浓度 (Cmax): 3.8 μg/mL（小鼠，口服 30 mg/kg），2.9 μg/mL（犬，口服 10 mg/kg）[1]
- 血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC₀–24h): 12.6 μg·h/mL（小鼠），21.8 μg·h/mL（犬）[1]
- 分布容积 (Vd): 1.5 L/kg（小鼠），2.1 L/kg（犬）[1]
- 血浆清除率: 0.7 L/h/kg（小鼠），0.3 L/h/kg（犬）[1]
- 血浆蛋白结合率: 86%（人血浆，超滤法） [1]

肝毒性
在注册前临床试验中，血清转氨酶升高并不常见且程度较轻，且与安慰剂组相比，Paxlovid组的发生率并无显著差异。此外，在上市前研究中，超过1000名患者接受了Paxlovid（尼马曲韦300 mg联合利托那韦100 mg，每日两次）治疗5天，未报告任何临床上明显的肝损伤事件。然而，令人困惑的是，血清转氨酶升高在有症状的SARS-CoV-2感染期间很常见，高达70%的患者会出现这种情况，并且在重症患者以及具有COVID-19重症已知风险因素（例如男性、高龄、高体重指数和糖尿病）的患者中更为常见。因此，尚未证实帕洛维会导致肝损伤，但其临床应用经验总体有限。
可能性评分：E（不太可能引起临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
尼马曲韦与利托那韦联合用药，利托那韦可提高其生物利用度。母乳中尼马曲韦的浓度较低。利托那韦会以可测量的浓度分泌到乳汁中，并且一些母乳喂养的婴儿血液中可检测到低浓度的利托那韦。尚未有母乳喂养婴儿出现不良反应的报告。更多信息，请参阅 LactMed 中关于利托那韦的记录。由于尼马曲韦口服生物利用度低，且乳汁中两种药物的含量都很低，因此这种组合不太可能对哺乳婴儿产生不良影响。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
在一项针对感染 COVID-19 并接受尼马曲韦联合利托那韦治疗的女性的横断面研究中，有两名女性进行了母乳喂养。未报告婴儿出现不良反应。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
尼马曲韦与利托那韦联用时，血浆蛋白结合率为 69%。

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体外毒性：在多种人和动物细胞系中，CC₅₀ > 30 μM，表明其治疗指数高 [1]
- 急性毒性：小鼠口服剂量高达 200 mg/kg 时，未出现死亡或明显的毒性症状 [1]
- 亚慢性毒性（14 天，犬）：尼马曲韦 (PF-07321332)（30 mg/kg，口服，每日两次）未引起显著的体重减轻、血液学/生化异常或主要器官（肝脏、肾脏、肺脏、心脏）的组织病理学改变。 [1]
- 细胞色素 P450 抑制：对 CYP3A4 的抑制作用较弱（IC₅₀ = 8.2 μM），在浓度高达 20 μM 时对 CYP1A2/2C9/2C19/2D6 无抑制作用。[1]

[1]. Considerations for the Discovery and Development of 3-Chymotrypsin-Like Cysteine Protease Inhibitors Targeting SARS-CoV-2 Infection. Current Opinion in Virology Available online 27 April 2021.

药效学
奈马曲韦与强效CYP3A酶抑制剂利托那韦一起给药，以抑制其代谢并增加血浆奈马曲韦浓度。利托那韦虽然具有治疗益处，但由于其强效的抑制特性，使用利托那韦会带来显著的药物相互作用风险——患者和临床医生应在开始服用帕洛维（尼尔马特雷韦和利托那韦）之前查阅处方信息，以评估其与现有药物之间可能存在的药物相互作用。

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尼尔马特雷韦 (PF-07321332)是一种口服有效的SARS-CoV-2 3CLpro可逆共价抑制剂[1]
- 其作用机制是与3CLpro的催化半胱氨酸残基（Cys145）形成共价键，从而阻断该酶将病毒多聚蛋白切割成病毒复制所需的活性蛋白的能力[1]
- 该化合物旨在靶向3CLpro的高度保守区域，这解释了其对SARS-CoV-2变异株仍具有活性的原因[1]
- 它适用于治疗……对于有发展为重症风险的成人，轻度至中度 COVID-19 患者可考虑使用 Nirmatrelvir (PF-07321332) [1]
- Nirmatrelvir (PF-07321332) 常与利托那韦 (CYP3A4 抑制剂) 联合用药，以增加其血浆暴露量和半衰期 [1]
Nirmatrelvir 是一种氮杂双环己烷，其结构为 (1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷，分别在 2S、3、6 和 6 位被 {(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基}氨基酰基、3-甲基-N-(三氟乙酰基)-L-缬氨酰胺、甲基和甲基取代。它是辉瑞公司开发的首个口服SARS-CoV-2主蛋白酶抑制剂，并与利托那韦联合用于治疗COVID-19。它是一种EC 3.4.22.69（SARS冠状病毒主蛋白酶）抑制剂和抗冠状病毒药物。它是一种腈类化合物，属于吡咯烷-2-酮类、仲酰胺类、吡咯烷酰胺类、叔酰胺类、有机氟化合物和氮杂双环己烷类化合物。
尼尔马特雷韦（PF-07321332）是一种口服生物利用度高的3C样蛋白酶（3CLPRO）抑制剂，目前正在进行临床试验NCT04756531。3CLPRO负责切割SARS-CoV-2的多聚蛋白1a和1ab。如果SARS-CoV-2 3CLPRO活性丧失，非结构蛋白（包括蛋白酶）就无法释放并发挥其功能，从而抑制病毒复制。2020年，辉瑞公司正在研究另一种潜在的SARS-CoV-2治疗药物[PF-07304814]。这两种药物都是SARS-CoV-2 3CLPRO抑制剂，但尼马曲韦的优势在于其口服生物利用度更高。尼马曲韦的优势在于可以在患者住院前开具处方，而[PF-07304814]则需要在住院期间进行静脉注射。2021年12月，FDA授予Paxlovid（一种含有尼马曲韦和利托那韦的复方制剂）紧急使用授权，用于治疗某些轻度至中度COVID-19患者。 2023年5月25日，Paxlovid获得美国食品药品监督管理局（FDA）的全面批准。2022年1月，Paxlovid在加拿大获准用于治疗轻度至中度COVID-19成人患者，随后于2022年1月27日获得欧盟委员会的有条件上市许可。
Paxlovid是由第二代蛋白酶抑制剂尼尔马特雷韦和药理增强剂利托那韦组成的复方制剂，用于治疗由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的感染，SARS-CoV-2是2019新型冠状病毒病（COVID-19）的病原体。在感染早期，患者需口服帕洛维（Paxlovid）5天，且未发现其与血清转氨酶升高或临床上明显的肝损伤相关。
尼尔马特雷韦（Nirmatrelvir）是一种口服生物利用度高的肽模拟物，可抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的主要蛋白酶（Mpro；3C样蛋白酶；3CL蛋白酶；3CLpro；nsp5蛋白酶），具有潜在的抗SARS-CoV-2和其他冠状病毒的病毒活性。口服后，尼尔马特雷韦可选择性地靶向、结合并抑制SARS-CoV-2 Mpro的活性。它抑制病毒多聚蛋白的蛋白水解切割，从而抑制包括解旋酶、单链RNA结合蛋白、RNA依赖性RNA聚合酶、20-O-核糖甲基转移酶、核糖核酸内切酶和核糖核酸外切酶在内的病毒蛋白的形成。这可以阻止病毒的转录和复制。
NIRMATRELVIR是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为IV期（涵盖所有适应症），于2023年首次获批，并有8个在研适应症。
它是COVID-19药物Paxlovid的成分之一。

C23H32F3N5O4

499.5265

499.24

C, 55.30; H, 6.46; F, 11.41; N, 14.02; O, 12.81

2628280-40-8

Nirmatrelvir-d9;2861202-76-6

155903259

White to off-white solid powder

2.2

131Ų

3

8

7

35

964

6

CC1([C@@H]2[C@H]1[C@H](N(C2)C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)C(F)(F)F)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]3CCNC3=O)C#N)C

LIENCHBZNNMNKG-OJFNHCPVSA-N

InChI=1S/C23H32F3N5O4/c1-21(2,3)16(30-20(35)23(24,25)26)19(34)31-10-13-14(22(13,4)5)15(31)18(33)29-12(9-27)8-11-6-7-28-17(11)32/h11-16H,6-8,10H2,1-5H3,(H,28,32)(H,29,33)(H,30,35)/t11-,12-,13-,14-,15-,16+/m0/s1

(1R,2S,5S)-N-((S)-1-cyano-2-((S)-2-oxopyrrolidin-3-yl)ethyl)-3-((S)-3,3-dimethyl-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoyl)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane-2-carboxamide

Nirmatrelvir; PF-07321332; PF 07321332; P7R9A5P7H32; Nirmatrelvir; Paxlovid; PF-07321332; PF07321332; Nirmatrelvir [USAN]; UNII-7R9A5P7H32; F07321332; brand name Paxlovid;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 100~140 mg/mL ( 200.18~280.26 mM )
Ethanol : 50 ~100 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+90% Corn Oil: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。