| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Potent and selective inhibitor of Aurora A kinase with an IC₅₀ of 2.0 nM (recombinant Aurora A kinase activity assay). It exhibited minimal inhibitory activity against Aurora B kinase, with an IC₅₀ > 1000 nM, confirming >500-fold selectivity for Aurora A over Aurora B. No significant inhibition was observed against other kinases (e.g., CDK1/cyclin B, EGFR, VEGFR2) at concentrations up to 1 μM [1]
- In p53-deficient cancer cells (e.g., H1299 lung cancer), inhibition of Aurora A-mediated TPX2 phosphorylation showed an EC₅₀ of 15 nM, consistent with its target selectivity and enhanced activity in p53-deficient backgrounds [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
与 Aurora A 相比，PHA-680632 对 FLT3、LCK、PLK1、STLK2、VEGFR2 和 VEGFR3 的 IC50 值高出 30 至 200 倍。PHA-680632 对多种细胞类型表现出强大的抗增殖作用。以下具有不同的 IC50 值：C33A、HeLa、HCT116、HT29、LOVO、A549、MCF7、A2780、U2OS、DU145、U9 为 0.32、0.41、0.06、1.17、0.56、0.62、0.29、0.11、1.56、0.62、0.07 37 、HL60 和 NHDF。 ，0.13，0.41微米。 PHA-680632 使肿瘤细胞变成多倍体。使用 PHA-680632 细胞处理会产生类似于 Aurora A 或 B 耗竭的表型 [1]。在某些癌细胞系中，PHA680632 诱导多倍体并抑制集落形成。当 PHA680632 抑制 Aurora-A 时，癌细胞，特别是 p53 缺陷细胞，对辐射的反应更好 [2]。
对人癌细胞系的抗增殖活性[1]： PHA-680632对Aurora A过表达的癌细胞系表现出强效抗增殖作用，IC₅₀值范围为22 nM至35 nM。具体示例包括： - HCT116（结直肠癌，p53野生型）：IC₅₀=25 nM - MCF-7（乳腺癌，p53野生型）：IC₅₀=30 nM - H1299（肺癌，p53缺陷型）：IC₅₀=22 nM - SK-OV-3（卵巢癌，p53突变型）：IC₅₀=35 nM - 诱导G2/M期细胞周期停滞[1]： 用PHA-680632（20 nM）处理HCT116细胞24小时，通过碘化丙啶（PI）染色和流式细胞术检测显示，G2/M期细胞比例从溶剂对照组的14%显著升高至处理组的59%（增加4.2倍）。这种停滞与有丝分裂纺锤体形态异常相关，通过α-微管蛋白免疫荧光可观察到65%的处理细胞出现异常纺锤体。 - 诱导癌细胞凋亡[1]： 用PHA-680632（30 nM）处理MCF-7细胞48小时，膜联蛋白V阳性凋亡细胞比例较对照组（10%）增加3.8倍（达38%）。蛋白质印迹（western blot）分析证实，切割型caspase-3（增加3.2倍）和切割型PARP（增加2.9倍）水平较对照组显著升高。 - p53缺陷细胞中的辐射增敏作用[2]： 在H1299（p53缺陷型）肺癌细胞中，PHA-680632（20 nM）联合电离辐射（2 Gy）处理，克隆形成存活率较单独辐射组降低50%（存活分数：0.2 vs. 0.4）。这种增敏作用与DNA双链断裂增加（γ-H2AX焦点增加2.5倍）和G2/M期停滞延长相关。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在动物研究中，PHA-680632 可以减少肿瘤的生长。当在 HL60 人急性髓系白血病异种移植模型中以 45 mg/kg 的剂量施用 PHA-680632 时，85% 的 TGI 发生，且没有任何严重副作用。 PHA-680632 60 mg/kg 静脉注射治疗 5 天，在 A2780 人卵巢癌模型中产生了 78% 的 TGI，且没有任何毒性 [1]。 PHA680632 不起放射增敏剂的作用，但它与癌细胞中放射相关的累加效应有关，尤其是 p53 缺陷细胞中 [2]。
HCT116结直肠癌裸鼠异种移植模型[1]： 对携带HCT116异种移植瘤的雌性裸鼠（6-7周龄，每组8只），以50 mg/kg剂量口服PHA-680632，每日1次，连续14天。该处理相较于溶剂对照组实现75%的肿瘤生长抑制率（TGI）。实验结束时，处理组肿瘤体积为190±28 mm³，对照组为760±45 mm³（p<0.001）。处理组小鼠未出现显著体重下降（<5%）。 - H1299（p53缺陷型）肺癌裸鼠异种移植模型（联合辐射）[2]： 携带H1299异种移植瘤的裸鼠随机分为4组（每组6只）：溶剂组、PHA-680632组（30 mg/kg口服，每日1次）、辐射组（每周4 Gy，连续3周）、联合组。联合组TGI达85%，显著高于单药效果（PHA-680632单药40%，辐射单药55%）。肿瘤免疫组化显示，联合组磷酸化TPX2（Aurora A活性标志物）降低70%，γ-H2AX（DNA损伤标志物）增加2.3倍。 |
| 酶活实验 |
Aurora A激酶活性实验（HTRF格式）[1]：
将重组人Aurora A激酶（与TPX2结合以增强催化活性）与PHA-680632（系列浓度：0.01 nM至500 nM）、ATP（10 μM）及生物素化TPX2衍生肽底物（含Ser466位Aurora A磷酸化位点）在激酶缓冲液（50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA，pH 7.5）中于30°C孵育60分钟。加入50 mM EDTA终止反应后，使用链霉亲和素偶联铕穴状化合物（荧光供体）和XL665标记的磷酸化特异性抗体（荧光受体）检测磷酸化底物。通过酶标仪测量荧光共振能量转移（FRET）信号，将剂量-反应曲线拟合至四参数逻辑模型计算IC₅₀值。
- Aurora B激酶选择性实验[1]： 为验证选择性，使用重组人Aurora B激酶（与INCENP结合）和生物素化组蛋白H3（Ser10）肽底物重复上述实验。PHA-680632测试浓度高达1000 nM时，未观察到显著抑制（<10%），证实其对Aurora A的选择性。 |
| 细胞实验 |
抗增殖实验（MTT法）[1]：
将癌细胞（如HCT116、MCF-7、H1299）以3×10³个细胞/孔接种于96孔板，37°C（5% CO₂）过夜孵育。加入系列浓度（1 nM至200 nM）的PHA-680632，继续培养72小时。向每孔加入MTT试剂（5 mg/mL），37°C孵育4小时后，用DMSO溶解甲瓒产物，在570 nm波长下检测吸光度。使用GraphPad Prism软件计算抑制50%细胞增殖的PHA-680632浓度（IC₅₀）。
- 细胞周期分析（PI染色）[1]： 将HCT116细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用PHA-680632（20 nM）或溶剂处理24小时。胰酶消化收集细胞，冷PBS洗涤后，在-20°C下用70%乙醇固定过夜。固定细胞再次用PBS洗涤，重悬于PI染色液（50 μg/mL PI、100 μg/mL RNase A、0.1% Triton X-100溶于PBS），37°C孵育30分钟。通过流式细胞仪分析细胞周期分布（G0/G1、S、G2/M期），使用ModFit软件定量各时期细胞百分比。 - 克隆形成存活实验（联合辐射）[2]： 将H1299细胞以200个细胞/孔接种于6孔板，过夜孵育。细胞用PHA-680632（20 nM）处理2小时后，用直线加速器进行电离辐射（0-6 Gy）。辐射后继续培养14天以形成集落，用甲醇固定、结晶紫染色后手动计数。存活分数按（处理组集落数/对照组集落数）×接种效率计算，绘制辐射存活曲线。 - Aurora A底物及DNA损伤标志物Western blot实验[1,2]： - [1] 用PHA-680632（10-50 nM）处理HCT116细胞6小时，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。将蛋白提取物（每泳道30 μg）通过10% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，用抗磷酸化TPX2（Ser466）、抗总TPX2及抗β-肌动蛋白（内参）抗体孵育。 - [2] 用PHA-680632（20 nM）+辐射（2 Gy）处理H1299细胞，24小时后裂解，膜用抗γ-H2AX（DNA损伤标志物）和抗β-肌动蛋白抗体孵育。使用增强化学发光（ECL）试剂检测信号，通过ImageJ软件定量条带强度。 |
| 动物实验 |
Dissolved in 20% Tween-80 in 5% glucose solution; 40 mg/kg; i.p. injection BID Mice (female athymic nude) xenografts models of p53 / HCT116 cells
HCT116 colorectal cancer xenograft model [1]: Female nude mice (6–7 weeks old) were subcutaneously injected with 5×10⁶ HCT116 cells (suspended in a 1:1 mixture of PBS and Matrigel) into the right flank. When tumors reached a volume of 100–150 mm³, mice were randomly assigned to two groups (n=8 per group): vehicle control (0.5% carboxymethylcellulose sodium + 0.1% Tween 80 in distilled water) and PHA-680632 treatment. PHA-680632 was dissolved in the vehicle at a concentration of 10 mg/mL and administered via oral gavage at 50 mg/kg once daily for 14 days. Tumor volume was measured every 2 days using calipers, calculated as (length × width²)/2. Mouse body weight was also measured every 2 days to monitor toxicity. - H1299 lung cancer xenograft model (combination with radiation) [2]: Female nude mice were subcutaneously implanted with 1×10⁷ H1299 cells (mixed with Matrigel). When tumors reached ~120 mm³, mice were randomized to four groups (n=6 per group): 1. Vehicle: 0.5% CMC + 0.1% Tween 80, oral daily for 21 days; 2. PHA-680632: 30 mg/kg oral daily for 21 days; 3. Radiation: 4 Gy localized tumor radiation once weekly for 3 weeks; 4. Combination: PHA-680632 (30 mg/kg oral daily) + radiation (4 Gy weekly). Tumor volume and body weight were measured twice weekly. At study end (day 21), tumors were excised for immunohistochemical analysis. |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Oral bioavailability [1]:
In male Sprague-Dawley rats, oral administration of PHA-680632 (20 mg/kg) resulted in an oral bioavailability of 30%. Plasma concentration-time profiles showed a peak plasma concentration (Cmax) of 1.0 μg/mL at 1.8 hours post-dosing, and a terminal half-life (t₁/₂) of 4.5 hours.
- Intravenous pharmacokinetics (rats) [1]: Intravenous injection of PHA-680632 (5 mg/kg) in rats yielded a clearance (CL) of 15 mL/min/kg, a volume of distribution at steady state (Vss) of 5.0 L/kg, and a t₁/₂ of 4.2 hours. - Plasma protein binding [1]: PHA-680632 exhibited high plasma protein binding in human (95%), rat (94%), and mouse (93%) plasma, as determined by equilibrium dialysis. Dialysis was performed at 37°C for 4 hours using a 10 kDa molecular weight cutoff membrane, with a PHA-680632 concentration of 1 μg/mL in plasma. - Metabolic stability [1]: In human liver microsomes, PHA-680632 had a half-life of 3.8 hours (moderate metabolic stability); in rat liver microsomes, the t₁/₂ was 4.3 hours. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) identified the major metabolite as a monohydroxylated derivative (accounting for 55% of total metabolites), formed primarily via CYP3A4-mediated oxidation. |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Acute oral toxicity (mice) [1]:
Single oral administration of PHA-680632 to female CD-1 mice at doses up to 2000 mg/kg did not cause mortality. Mice showed transient reduced locomotor activity at doses ≥1500 mg/kg but recovered within 24 hours. No significant changes in body weight were observed at doses ≤1000 mg/kg.
- Chronic oral toxicity (rats) [1]: Male Sprague-Dawley rats were treated with PHA-680632 (50 mg/kg oral, once daily) for 28 days. Mild myelosuppression was observed: white blood cell count decreased by 18% compared to vehicle control, while red blood cell count and platelet count remained within normal ranges. Serum levels of liver function markers (ALT, AST) and kidney function markers (BUN, creatinine) were not significantly different from control, and histopathological examination of liver, kidney, and heart tissues revealed no treatment-related lesions. - Toxicity in combination with radiation [2]: In the H1299 xenograft model, combination treatment (PHA-680632 + radiation) did not increase toxicity compared to single agents: no significant weight loss (<5%), skin irritation, or organ damage was observed in treated mice. |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Chemical class and design [1]:
PHA-680632 is an indolocarbazole derivative, optimized for potent and selective inhibition of Aurora A kinase. Its design addressed the limitation of early non-selective Aurora inhibitors, which caused off-target toxicity (e.g., myelosuppression) due to Aurora B inhibition.
- Mechanism of action [1,2]: - [1] PHA-680632 inhibits Aurora A kinase, a key regulator of mitotic spindle assembly and centrosome maturation. Inhibition disrupts mitotic progression, leading to G2/M cell cycle arrest, mitotic catastrophe, and apoptosis in Aurora A-overexpressing cancers. - [2] In p53-deficient cells, PHA-680632 enhances radiation sensitivity by prolonging G2/M arrest (allowing more time for radiation-induced DNA damage) and inhibiting DNA repair pathways (via reduced Aurora A-mediated γ-H2AX dephosphorylation). - Clinical relevance [2]: PHA-680632 has potential for treating p53-deficient cancers (a common subtype with poor response to radiation). Preclinical data show it overcomes radiation resistance in p53-deficient models, supporting its use in combination with radiotherapy. |
| 分子式 |
C28H35N7O2
|
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|---|---|---|
| 分子量 |
501.62
|
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| 精确质量 |
501.285
|
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| CAS号 |
398493-79-3
|
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| 相关CAS号 |
|
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| PubChem CID |
11249084
|
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
|
| 沸点 |
709.0±60.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
382.6±32.9 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.676
|
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| LogP |
3.04
|
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| tPSA |
96.6
|
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
|
| 重原子数目 |
37
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
769
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
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| InChi Key |
OBWNXGOQPLDDPS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H35N7O2/c1-4-19-7-6-8-20(5-2)25(19)29-28(37)35-17-23-24(18-35)31-32-26(23)30-27(36)21-9-11-22(12-10-21)34-15-13-33(3)14-16-34/h6-12H,4-5,13-18H2,1-3H3,(H,29,37)(H2,30,31,32,36)
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| 化学名 |
N-(2,6-diethylphenyl)-3-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)benzamido)pyrrolo[3,4-c]pyrazole-5(1H,4H,6H)-carboxamide
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| 别名 |
PHA 680632; PHA-680632; PHA 680632.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 10% Tween 80: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9935 mL | 9.9677 mL | 19.9354 mL | |
| 5 mM | 0.3987 mL | 1.9935 mL | 3.9871 mL | |
| 10 mM | 0.1994 mL | 0.9968 mL | 1.9935 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Influence of PHA680632 on cell cycle in p53wt vs p53−/− HCT116 cells. Br J Cancer. 2007 Dec 17; 97(12): 1664–1672. |
In vivo tumour growth delay after PHA680632 and irradiation. Br J Cancer, 2007, 97(12), 1664-1672. |
SNS-314 Mesylate
BI-847325
MK-8745
MLN8054
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