Phorbol   中文名称: 伏波醇

Phorbol targets protein kinase C (PKC), a key enzyme in cell signal transduction and regulation. Phorbol esters activate PKC isoforms by associating with their C1 domains. The toxicity of phorbol is attributed to its ability to interfere with normal cellular processes. Phorbol's activity as a tumor promoter is mediated through the activation of protein kinase C, which leads to the phosphorylation of various downstream targets involved in cell proliferation, differentiation, and apoptosis. Activation of PKC by phorbol esters triggers a cascade of signaling events, including the activation of cytosolic phospholipase A2alpha and other kinases.

体外实验表明，佛波醇可抑制60种人类癌细胞系的生长，其Log1/GI50值为4.3。它对多种病毒具有广谱抗病毒活性。佛波醇（4β-佛波醇）是一种肿瘤促进剂，其作用机制是通过激活蛋白激酶C（PKC）。在基于细胞的实验中，佛波醇酯被广泛用于研究PKC介导的信号通路，包括激活胞质磷脂酶A2α、增强胞吐作用以及调节ATPase活性。研究表明，佛波醇可激活芳烷基胺N-乙酰转移酶，并抑制色甘酸钠诱导的蛋白质磷酸化。该化合物对细胞信号传导的影响是通过其与PKC亚型的相互作用实现的。

在体内，佛波醇是一种肿瘤促进剂，它能激活蛋白激酶C (PKC) 并诱导炎症反应。它被用作研究PKC介导的信号通路和肿瘤促进作用的工具。佛波醇酯已被证明能在皮肤癌动物模型中诱导肿瘤形成。该化合物激活PKC并调节多种信号通路的能力使其成为研究PKC在生理和病理过程中作用的重要工具。然而，由于其高毒性和肿瘤促进活性，佛波醇不用于治疗。

佛波醇的体外酶活性测定包括使用纯化的PKC亚型和肽底物进行激酶活性测定，以测量PKC的激活情况。该测定通常包括将PKC与不同浓度的佛波醇在ATP和合适的肽底物存在下孵育。使用闪烁计数或基于ELISA的方法测量底物的磷酸化水平。计算PKC激活的EC50值，并评估其对不同PKC亚型的选择性。使用表面等离子共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）进一步表征结合亲和力，以测量佛波醇-PKC相互作用的热力学参数。

体外细胞实验评估佛波醇对多种癌细胞系增殖、分化和凋亡的影响。将细胞培养于适宜的培养基中，并用系列稀释的佛波醇处理。采用 MTT、CCK-8 或 [³H]-胸苷掺入法评估细胞增殖。使用针对 PKC 底物的磷酸化特异性抗体，通过蛋白质印迹分析评估 PKC 的激活。采用流式细胞术，分别使用碘化丙啶染色和 Annexin V-FITC 染色评估细胞周期分布和凋亡诱导情况。使用 qPCR 或基因芯片分析研究该化合物对基因表达的影响。

在体内，佛波醇在小鼠皮肤肿瘤促进模型中得到评估。在这些模型中，小鼠先接受亚致癌剂量的诱变剂（例如DMBA）处理，随后反复在皮肤上涂抹佛波醇。在数周内监测皮肤肿瘤的数量和大小。通过测量耳廓水肿或皮肤组织中的细胞因子水平来评估该化合物对炎症的影响。进行药代动力学研究以确定该化合物在动物体内的吸收、分布、代谢和排泄情况。这些动物研究对于理解该化合物的促肿瘤活性及其对蛋白激酶C（PKC）信号通路的影响至关重要。

代谢物/代谢产物 通过对巴豆（Croton tiglium）中的佛波醇（1）进行厌氧培养，并利用人肠道细菌，获得了五种代谢物：异佛波醇（2）、脱氧佛波醇（3）、4β,9α,20-三羟基-13,15-开环-1,6,15-tigliatriene-3,13-二酮（4）、4β,9α,20-三羟基-15,16,17-三去甲-1,6-tigliadiene-3,13-二酮（5）和4β,9α,20-三羟基-14(13→12)-abeo-12αH-1,6-tigliadiene-3,13-二酮（6）。所有这些代谢物（2-6）均通过光谱学方法（包括二维核磁共振）进行了鉴定和表征。从人类肠道分离出的九种特定菌株均能将化合物 1 转化为这些代谢物。
佛波醇是一种用于研究蛋白激酶 C (PKC) 信号通路和肿瘤促进作用的研究工具。由于其高毒性和促肿瘤活性，它没有临床应用价值。该化合物在肝脏代谢，主要经尿液和粪便排泄。佛波醇在体内的半衰期相对较短，其药代动力学特征是分布和消除迅速。该化合物水溶性差，限制了其生物利用度。

毒性概述
鉴别与用途：佛波醇为粉末状物质，用于生物化学和医学研究。人体暴露与毒性：佛波醇缺乏佛波醇酯类化合物所具有的淋巴细胞活化诱导特性。与佛波醇酯类化合物不同，佛波醇缺乏促肿瘤活性，且对抑制人黑色素瘤细胞生长和刺激其分化作用无效或反应较弱。动物研究：佛波醇（20 μg/mL）无生物活性，对小鼠脑膜蛋白的结合位点无影响。在器官培养中，佛波醇不刺激新生小鼠颅骨中前列腺素E2的合成和骨吸收。佛波醇在Friend病毒转化的原红细胞C1745中未显示红系分化活性。因此，佛波醇是佛波醇酯类化合物的非活性类似物。 “佛波醇”一词用于描述一类天然存在的化合物，这类化合物可被称为佛波醇二萜类化合物。佛波醇酯是四环二萜类化合物，因其促肿瘤活性而闻名。根皮苷酸模拟二酰甘油（DAG）的作用，DAG是蛋白激酶C的激活剂，可调节多种信号转导通路和其他细胞代谢活动。佛波醇酸的生物活性具有高度的结构特异性。即使在低浓度下，佛波醇酸也会对饲喂含佛波醇酸饲料的动物产生毒性。这种毒性限制了许多含佛波醇酸的营养植物和农业副产品作为动物饲料的用途。此外，除了其抗营养和毒性作用外，一些佛波醇酸衍生物还具有抗菌和抗肿瘤活性。佛波醇酯的杀软体动物和杀虫特性表明其具有成为高效生物农药和杀虫剂的潜力。根皮苷本身不诱发肿瘤，但暴露于亚致癌剂量的致癌物可促进肿瘤生长。据报道，TPA及其相关化合物佛波醇酯是纤溶酶原激活剂合成的强效刺激剂。生物测定表明，TPA、佛波醇12,13-二癸酸酯（PDD）和TPA β-氧化物（TPA的衍生物）诱导纤溶酶原激活剂生成并促进肿瘤生长之间存在很强的相关性。佛波醇的作用机制并非与细胞DNA共价结合，而是模拟转化效应，例如改变细胞膜形态、增加饱和密度、改变细胞表面岩藻糖基化肽以及提高纤溶酶原激活剂和鸟氨酸脱羧酶的水平。 （A15429）多种佛波醇酯具有重要的生物学特性，最显著的是它们能够通过激活蛋白激酶C发挥促肿瘤作用。它们与二酰甘油类似，二酰甘油是甘油衍生物，其中两个羟基与脂肪酸反应生成酯。最常见的佛波醇酯是12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA），也称为佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA），它被用作致癌模型中的生物医学研究工具。TPA与碘霉素的组合还可以刺激T细胞活化、增殖和细胞因子产生，并被用于这些细胞因子的细胞内染色方案中。 （维基百科）

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相互作用
12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (I) 和佛波醇 (II) 可提高经 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍和甲基偶氮乙醇乙酸酯处理的 V79 中国仓鼠细胞培养物中乌本苷抗性突变体的恢复率。在这两种情况下，I 促进突变体恢复的效果均优于 II。
皮肤肿瘤促进机制研究。在雌性小鼠中，用 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA) 诱导后同时给予佛波醇和 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯，对促进作用没有影响。对妊娠BALB/c小鼠皮下注射200 μCi的((3)H)-胸苷，随后每周两次腹腔注射佛波醇，持续25周，结果显示雄性子代小鼠的肺和肝肿瘤发生率高于未处理的同窝小鼠，雌性子代小鼠的发生率也略高。肿瘤发生率的总体差异具有统计学意义，但每种类型肿瘤发生率的增加仅具有临界显著性。在未处理的母鼠和子代中，单独使用((3)H)-胸苷也观察到轻微的致癌活性。((3)H)-胸苷可用作经胎盘两阶段致癌性研究中的广谱致癌物，以确定不同致癌物的器官特异性。在雌性Wistar大鼠中，单次腹腔注射6 mg二甲基苯并蒽（DMBA）后，每周两次腹腔注射4 mg佛波醇，持续10周，与单独注射6 mg DMBA相比，显著增加了乳腺腺癌和淋巴细胞白血病的发生率。在雌性Sprague-Dawley大鼠中，使用相同剂量的DMBA和佛波醇，以及相同的注射方案，在DMBA给药后注射佛波醇并未增加乳腺腺癌或淋巴细胞白血病的发生率，与单独注射DMBA相比。在Wistar和Sprague-Dawley大鼠中，佛波醇的促癌活性具有品系依赖性，尤其是在接受DMBA治疗后再接受佛波醇治疗的大鼠中。本研究探讨了佛波醇对乳腺腺癌和淋巴细胞白血病发生率的影响。佛波醇并未促进DMBA处理大鼠乳腺纤维腺瘤、丙卡巴肼处理大鼠乳腺腺癌或X射线处理大鼠乳腺腺癌或纤维腺瘤的发生。DMBA和丙卡巴肼（无论是否联合佛波醇）倾向于诱导更多前部（胸部）乳腺肿瘤而非后部（腹部）乳腺肿瘤。X射线照射倾向于诱导数量大致相等的前部和后部乳腺肿瘤。化学诱导乳腺癌的区域差异是由于化学致癌物向不同区域的运输和递送差异造成的，而非各区域乳腺组织量的差异。对DMBA、丙卡巴肼和X射线照射下Sprague-Dawley大鼠乳腺肿瘤数量的分析表明，乳腺腺癌和乳腺纤维腺瘤的发生是独立的过程。有关佛波醇相互作用的更完整数据（共7种），请访问HSDB记录页面。
佛波醇的毒性已得到充分证实。它是一种强效的肿瘤促进剂，可诱发炎症和皮肤刺激。该化合物激活蛋白激酶C (PKC) 并破坏正常细胞信号通路的能力是其毒性作用的成因之一。动物研究表明，佛波醇与诱变剂联合外用可诱发皮肤肿瘤。该化合物在体外对多种细胞类型也具有毒性，在微摩尔浓度下即可观察到细胞毒性。由于其高毒性，佛波醇在实验室中应极其谨慎地处理。

Isakov N. Protein kinase C (PKC) isoforms in cancer, tumor promotion and tumor suppression. Semin Cancer Biol. 2017 May 29. pii: S1044-579X(17)30108-6. doi: 10.1016/j.semcancer.2017.04.012. [Epub ahead of print] Review. PubMed PMID: 28571764.

佛波醇是一种白色固体。(NTP, 1992)
卟啉是一种二萜类化合物，其结构为硫代卡巴腙在C-4、-9、-12(β)、-13和-20位被羟基化，C-3位有一个羰基，1位和6位有不饱和键。它是一种四环二萜类化合物，同时也是一种烯酮、环酮、叔醇和叔α-羟基酮。它来源于硫代卡巴腙的氢化物。
据报道，地黄、巴豆和大戟中含有卟啉，并已有相关数据。
卟啉是一种天然植物来源的有机化合物，属于硫代卡巴腙二萜类化合物家族。佛波醇于1934年首次从巴豆油中分离出来，巴豆油是从泻药巴豆（Croton tiglium）的种子中提取的。卟啉的结构于1967年被确定。它极易溶于大多数极性有机溶剂和水。佛波醇（4β-佛波醇）是一种植物来源的二萜类化合物，可通过激活蛋白激酶C（PKC）促进肿瘤生长。它是重要的母体二萜醇骨架，在实验中作为关键的阴性对照，因为它不激活PKC，也不会诱导肌动蛋白组装或抑制Ca²⁺内流，这与PMA/PDBu不同。佛波醇可抑制60种人类癌细胞系的生长。它还具有广泛的抗病毒活性。佛波醇以固体形式供应，用于实验室研究，应作为危险化学品处理。

C20H28O6

364.4327

364.189

17673-25-5

17673-25-5;

442070

Off-white to light yellow solid powder

1.415 g/cm3

572ºC at 760 mmHg

250-251ºC DECOMP

313.8ºC

1.83E-15mmHg at 25°C

1.648

-0.8

118.22

5

6

1

26

753

8

C[C@@H]1[C@H]([C@@]2([C@@H](C2(C)C)[C@H]3[C@]1([C@@H]4C=C(C(=O)[C@]4(CC(=C3)CO)O)C)O)O)O

QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N

InChI=1S/C20H28O6/c1-9-5-13-18(24,15(9)22)7-11(8-21)6-12-14-17(3,4)20(14,26)16(23)10(2)19(12,13)25/h5-6,10,12-14,16,21,23-26H,7-8H2,1-4H3/t10-,12+,13-,14-,16-,18-,19-,20-/m1/s1

(1S,2S,6R,10S,11R,13S,14R,15R)-1,6,13,14-tetrahydroxy-8-(hydroxymethyl)-4,12,12,15-tetramethyltetracyclo[8.5.0.02,6.011,13]pentadeca-3,8-dien-5-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~137.20 mM)
H2O : ≥ 20 mg/mL (~54.88 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5 mg/mL (13.72 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。