Pinostrobin   中文名称: 球松素

IC50: PCSK9
In HepG2 cells, Pinostrobin targets the gene expression of Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) through the modulation of Forkhead box O3a (FoxO3a) protein. It increases nuclear FoxO3a protein levels and enhances FoxO3a/PCSK9 promoter complexes formation. [1]
In RAW 264.7 and J774A.1 cells, Pinostrobin targets the production of pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 1 beta (IL-1β). The IC50 for TNF-α inhibition was 17.28 ± 1.01 μM (RAW 264.7) and 19.63 ± 3.54 μM (J774A.1). The IC50 for IL-1β inhibition was 23.51 ± 1.06 μM (RAW 264.7) and 37.46 ± 3.42 μM (J774A.1). [3]
In B16F10 cells, Pinostrobin targets the melanogenesis pathway by upregulating the expression of microphthalmia-associated transcription factor (MITF), tyrosinase, and tyrosinase-related protein 1 (TRP-1). It acts via the cAMP/PKA signaling pathway (increasing phosphorylation of CREB, GSK-3β, and β-catenin) and the p38 MAPK signaling pathway. [5]
In acute leukemia NB4 and MOLT-4 cells, Pinostrobin targets the expression of miR-410-5p and subsequently upregulates secreted frizzled related protein 5 (SFRP5), a negative regulator of the Wnt/β-catenin signaling pathway. [6]
In HeLa cervical cancer cells, Pinostrobin targets multiple pathways involved in apoptosis, including the intrinsic (mitochondrial) and extrinsic (death receptor) pathways. It increases ROS production, decreases mitochondrial membrane potential, and modulates the expression of Bcl-2 family proteins (Bad, Bax) and caspases. [7]

在HepG2细胞中，松属素（20和40 μM）显著抑制了PCSK9启动子的活性，抑制倍数分别为1.00 ± 0.16倍至0.85 ± 0.06倍和0.54 ± 0.05倍。它还抑制了PCSK9 mRNA的表达，抑制倍数分别为1.00 ± 0.11倍至0.81 ± 0.07倍和0.58 ± 0.07倍。松属素显著降低了成熟PCSK9蛋白的水平，抑制了PCSK9的催化活性，增加了LDLR的蛋白水平（在20和40 μM浓度下分别增加了约2.0倍和3.3倍），并提高了HepG2细胞的LDL摄取活性（在40 μM浓度下达到213.5 ± 10.1%）。它显著提高了核内FoxO3a蛋白的水平（在20 μM和40 μM浓度下分别提高约1.4倍和2.1倍），并增强了FoxO3a/PCSK9启动子复合物的形成，同时减弱了核内HNF-1α与启动子的结合能力。siRNA介导的FoxO3a敲低消除了松属素介导的PCSK9表达降低。松属素还能减弱辛伐他汀诱导的HepG2细胞中PCSK9的过表达。 [1] 在 RAW 264.7 和 J774A.1 细胞中，松属植物素对抑制 TNF-α（IC50 分别为 17.28 ± 1.01 μM 和 19.63 ± 3.54 μM）和 IL-1β（IC50 分别为 23.51 ± 1.06 μM 和 37.46 ± 3.42 μM）的产生活性最强。浓度为 100 μM 时，细胞存活率 >80%。[3] 在 B16F10 细胞中，松属植物素（25-100 μM）未表现出任何细胞毒性。它显著增加了黑色素含量（在 100 μM 时超过 2.3 倍）和酪氨酸酶活性。它刺激了酪氨酸酶、TRP-1 和 MITF 的表达。松属素促进了 CREB、GSK-3β（在 50 和 100 μM 浓度下增加 2 倍以上）和 β-catenin 的磷酸化。PKA 抑制剂 (H89) 显著降低了松属素诱导的黑色素合成、酪氨酸酶活性以及酪氨酸酶、TRP-1 和 MITF 的表达，以及 CREB、GSK-3β 和 β-catenin 的磷酸化。松属素还增强了 p38 的磷酸化水平，同时降低了 ERK 的磷酸化水平。p38 抑制剂 (SB203580) 降低了松属素诱导的黑色素含量、酪氨酸酶活性以及 MITF 和酪氨酸酶的表达。 [5] 在NB4和MOLT-4急性白血病细胞中，用IC50浓度（NB4为130 μM，MOLT-4为150 μM）的松属素处理48小时后，细胞凋亡率分别达到34.37 ± 5.84%和49.40 ± 4.76%，caspase-3表达增加，促凋亡蛋白BAK表达上调，抗凋亡蛋白BCL-W和MCL-1表达下调。LC-MS/MS分析鉴定出SFRP5为靶蛋白，RT-qPCR结果显示松属素可增加SFRP5 mRNA水平，降低β-catenin mRNA和蛋白水平。此外，松属素显著抑制miR-410-5p的表达水平。用 miR-410-5p 模拟物转染可增加 β-catenin 的表达并减少细胞凋亡，而与松属素共同处理则可逆转这种效应。[6] 在 HeLa 宫颈癌细胞中，松属素（50 和 100 μM）可降低细胞活力（48 小时时 CT50 为 50 μM），降低 GSH 和亚硝酸盐水平，并诱导细胞核浓缩和染色质断裂。它可增加 ROS 的产生（50 μM 时 MFI 增加至 32.27 ± 6.67，100 μM 时增加至 54.20 ± 6.73），并显著降低线粒体膜电位（100 μM 时 JC-1 单体增加 20.67 ± 4.6%）。松属素处理导致细胞周期停滞于 G1/S 期（100 μM 处理组细胞比例为 54.69%，对照组为 40.77%）。蛋白质组分析显示，参与外源性凋亡途径（TRAIL R1/D4、TRAIL R2/D5、Fas、FADD）和内源性凋亡途径（Bad、Bax、细胞色素 C、cleaved caspase-3）的蛋白质表达均增加。[7]

在Sprague Dawley (SD)大鼠中，口服20 mg/kg剂量的松属素可显著降低LPS诱导的TNF-α水平48.6%（至834 pg/ml）和IL-1β水平53.1%（至428 pg/ml），与LPS处理组（TNF-α为1623 pg/ml，IL-1β为912 pg/ml）相比。阳性对照药物地塞米松（5 mg/kg）使TNF-α水平降低了75.8%，IL-1β水平降低了63.0%。[3] 在昆明雌性大鼠中，采用单次灌胃给予0.5 mg/kg剂量的松属素进行药代动力学研究。[8]

使用与 PCSK9 裂解位点对应的荧光肽 (FAQSIPK) 测定 HepG2 细胞裂解液中 PCSK9 蛋白的催化活性，该荧光肽用 2,4-二硝基苯基和 7-氨基-4-甲基香豆素标记。将细胞蛋白裂解液 (80 μg) 加入反应缓冲液 (50 mM Tris pH 7.4、2.5 mM CaCl2 和 0.5% Triton X-100) 中。将荧光肽 (100 μM) 和细胞裂解液样品在 30°C 下孵育，并在激发波长 λ = 340 nm、发射波长 λ = 460 nm 处测量荧光强度。松属素 (20 和 40 μM) 在 t = 540 min 时使荧光强度分别降低了约 20% 和 45%，表明 PCSK9 的催化活性受到抑制。 [1]
采用分子对接、光谱学和拓扑异构酶I活性研究，进行了拓扑异构酶I活性的无细胞检测，结果表明松属素通过变构作用抑制拓扑异构酶I。[7]
评估了B16F10细胞中的酪氨酸酶活性。用松属素刺激细胞3天。将提取的蛋白质（1 μg/μL）加入含有10 mM L-DOPA和0.1 M磷酸钾缓冲液（pH 6.8）的96孔板中。反应混合物在37°C下孵育1小时，然后在490 nm处进行测量。松属素提高了酪氨酸酶活性。[5]

采用 MTT 法评估细胞活力。将 HepG2 细胞接种于 24 孔板中，用载体或松属素（10-40 μM）处理 24 小时，然后在 37°C 下与 MTT 试剂（1 mg/mL）孵育 3 小时。将生成的甲臜晶体溶解于 DMSO 中，并在 550 nm 处测定吸光度。松属素对 HepG2 细胞无细胞毒性。[1] 为了进行 PCSK9、LDLR、HMGCR 和 Mylip/Idol 的 RT-qPCR 分析，将 HepG2 细胞用载体或松属素（20 和 40 μM）处理 24 小时。提取总 RNA，进行逆转录，并使用人特异性引物和 SYBR Green Master Mix 进行定量实时 PCR。松属素降低了 PCSK9 mRNA 的表达，但对 LDLR、HMGCR 或 Mylip/Idol mRNA 的表达没有显著影响。[1]
进行蛋白质印迹分析时，将 HepG2 细胞用松属素（20 和 40 μM）处理 24 小时。提取总细胞蛋白或核蛋白，经 10% SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜。将膜与一抗（抗 PCSK9、抗 LDLR、抗 HNF1α、抗 FoxO3a 等）孵育，然后与 HRP 标记的二抗孵育。采用化学发光法测定蛋白表达水平。松属素降低了成熟 PCSK9 的表达，并增加了 LDLR 和核内 FoxO3a 的表达。 [1]
在白血病细胞凋亡检测中，将NB4和MOLT-4细胞用IC50浓度（分别为130 μM和150 μM）的松属素处理48小时。收集细胞，用Annexin V-FITC和PI染色，然后通过流式细胞术分析凋亡细胞的百分比。[6]
在B16F10细胞中黑色素含量测定中，将细胞暴露于松属素3天，洗涤并离心沉淀。将沉淀物在80℃的1N NaOH溶液中孵育2小时以溶解黑色素，然后用酶标仪在405 nm处测定黑色素含量。 [5]
为了对 HeLa 细胞的凋亡进行形态学评估，将细胞培养在盖玻片上，并用松属素（50 μM）处理。48 小时后，用 Wright-Giemsa 染色 5 分钟，并在光学显微镜下观察细胞形态变化，例如细胞收缩、细胞核浓缩和细胞膜起泡。[7]

在药代动力学研究中，雌性昆明大鼠（体重220-250 g）单次灌胃给予0.5 mg/kg剂量的松属素。分别于给药后0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12和24小时采集血样，置于肝素化试管中。血液立即以3000 × g离心15分钟，血浆保存于-70°C直至分析。[8] 在体内抗炎研究中，雌性Sprague Dawley (SD)大鼠（200-250 g）被分为若干组（n=6）。试验组以12小时为间隔，分别口服给予10和20 mg/kg剂量的松属素。在最后一次给药后 2 小时，给予脂多糖（LPS，5 mg/kg）。分别于 LPS 给药后 2 小时（用于检测 TNF-α）和 6 小时（用于检测 IL-1β）从尾静脉采集血样。将血样以 3000 rpm 离心 10 分钟分离血浆，并用 ELISA 法测定细胞因子浓度。[3]

在昆明雌性大鼠单次灌胃给予松属素（0.5 mg/kg）后，其最大浓度（Cmax）为 615.35 ± 32.89 ng/mL（约相当于 2.28 μM）。达峰时间（Tmax）为 4 ± 0.18 小时。末端半衰期（t1/2）为 4.34 ± 0.24 分钟。血浆浓度-时间曲线下面积（AUC0→∞）为 3817.80 ± 352.89 ng·min/mL。[8]
使用 SwissADME 进行的计算机药代动力学预测表明，松属素预计在胃肠道中的吸收率为 93.8%，并且能够透过皮肤（Log Kp = -2.8）。预计该化合物是CYP1A2和CYP2C19的抑制剂。[5]
在大鼠中，单次口服给药后，松属素主要分布于胃肠道。母体化合物经尿液、胆汁和粪便的排出量均低于1.6%，表明其主要在体内代谢。该化合物迅速代谢为葡萄糖醛酸苷。[1, 5]
计算得出，S-松属素和R-松属素在大鼠体内的口服生物利用度分别为1.83 ± 1.43%和13.8 ± 3.42%。雄性Sprague Dawley大鼠静脉注射（10 mg/kg）后，血清半衰期约为6小时。[1]

在HepG2细胞中，MTT实验表明，浓度为10-40 μM的松属素未表现出细胞毒性。[1]
在B16F10细胞中，浓度为25-200 μM的松属素未表现出任何细胞毒性。[5]
在HEK293非癌细胞中，即使在较高浓度（4倍CT50）下，松属素也显示出可忽略不计的毒性。[7]
在Wistar大鼠中，连续7天给予1-100 mg/kg剂量的松属素，未显示致突变作用。 [5, 6]
松属素与人血清白蛋白 (HSA) 相互作用，这可能会影响其在人体内的生物利用度、药代动力学、药效学和半衰期。[1]

[1]. Pinostrobin Inhibits Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin-type 9 (PCSK9) Gene Expression through the Modulation of FoxO3a Protein in HepG2 Cells.J Agric Food Chem. 2018 Jun 20;66(24):6083-6093.

[2]. Activity investigation of pinostrobin towards herpes simplex virus-1 as determined by atomic force microscopy. Phytomedicine. 2011 Jan 15;18(2-3):110-8.

[3]. Pinostrobin and Cajanus lactone isolated from Cajanus cajan (L.) leaves inhibits TNF-α and IL-1β production: in vitro and in vivo experimentation. Phytomedicine. 2014 Jun 15;21(7):946-53.

[4]. Hepatoprotective effect of pinostrobin against thioacetamide-induced liver cirrhosis in rats. Saudi J Biol Sci. 2023 Jan;30(1):103506.

[5]. Discovery of Pinostrobin as a Melanogenic Agent in cAMP/PKA and p38 MAPK Signaling Pathway. Nutrients. 2022 Sep 9;14(18):3713.

[6]. Pinostrobin induces acute leukemia cell apoptosis via the regulation of miR-410-5p and SFRP5. Life Sci. 2023 Jul 15;325:121739.

[7]. Induction of apoptosis by pinostrobin in human cervical cancer cells: Possible mechanism of action. PLoS One. 2018 Feb 8;13(2):e0191523.

[8]. Determination of pinostrobin in rat plasma by LC-MS/MS: application to pharmacokinetics. J Pharm Biomed Anal. 2011 Dec 5;56(4):841-5.

据报道，蜜蜂、姜黄和其他具有相关数据的生物体中均检测到了松属素。
另见：松属素（注：已移至此处）。

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松属素是一种PCSK9抑制剂，它通过上调肝细胞中FoxO3a的水平来下调PCSK9基因的表达。它可能成为一种新型的胆固醇调节和血脂管理药物。松属素与他汀类药物联合治疗可能抵消他汀类药物诱导的PCSK9过度表达。[1]
松属素通过诱导酪氨酸酶、TRP-1和MITF的表达，在不产生细胞毒性的情况下，对酪氨酸酶活性和黑色素生成发挥刺激作用。它可作为一种新型、高效且安全的黑色素生成剂，用于预防和/或治疗白癜风。 [5] 松属素通过抑制 miR-410-5p 和刺激 SFRP5 诱导急性白血病细胞凋亡，从而抑制 Wnt/β-catenin 信号通路。它与柔红霉素 (DNR) 具有协同作用，可增强 DNR 的细胞毒性。[6] 松属素通过 ROS 介导的外源性和内源性信号通路以及 ROS 介导的线粒体损伤，有效诱导 HeLa 细胞凋亡。[7] 松属素是一种手性黄酮类化合物。天然来源如蜂蜜、蜂胶和指状根中仅产生 (-)-异构体，而化学合成通常得到外消旋混合物。[5]

C16H14O4

270.284

270.089

480-37-5

4101463

White to yellow solid

1.3±0.1 g/cm3

494.9±45.0 °C at 760 mmHg

100ºC

188.8±22.2 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.612

4.11

55.76

1

4

2

20

350

0

O1C2=C([H])C(=C([H])C(=C2C(C([H])([H])C1([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])=O)O[H])OC([H])([H])[H]

ORJDDOBAOGKRJV-AWEZNQCLSA-N

InChI=1S/C16H14O4/c1-19-11-7-12(17)16-13(18)9-14(20-15(16)8-11)10-5-3-2-4-6-10/h2-8,14,17H,9H2,1H3/t14-/m0/s1

(2S)-5-hydroxy-7-methoxy-2-phenyl-2,3-dihydrochromen-4-one

(±)-Pinostrobin; Pinostrobin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~369.99 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。