PK11195   中文名称: 1-(2-氯苯基)-n-甲基-n-(1-甲基丙基)-3-异喹啉羧酰胺

Translocator protein (TSPO) [1]

对于PK 11195，其对亚马逊利什曼原虫（L. amazonensis）的IC50中位数为14.2 μM，对主要利什曼原虫（L. major）为8.2 μM，对巴西利什曼原虫（L. braziliensis）为3.5 μM。PK 11195对亚马逊利什曼原虫的选择性指数为13.7，表明PK 11195可安全用于即将进行的哺乳动物试验。观察到活细胞内寄生虫数量、每个感染巨噬细胞的寄生虫数量以及感染巨噬细胞的比例均呈时间和剂量依赖性下降。电镜观察到一些提示自噬的形态学改变。值得注意的是，PK 11195的MCP-1和超氧化物水平较低。用PK 11195处理感染亚马逊利什曼原虫的巨噬细胞[1]。

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PK11195在0.20至400 µM浓度范围内处理48小时后，可降低无菌亚马逊利什曼原虫前鞭毛体的存活率，中位IC50/48h值为14.22 µM（四分位距10.18-18.02）[1]
- 在相同条件下，PK11195可降低无菌巴西利什曼原虫前鞭毛体的存活率，中位IC50/48h值为3.51 µM（四分位距2.34-5.89）[1]
- PK11195可降低无菌大利什曼原虫前鞭毛体的存活率，中位IC50/48h值为8.23 µM（四分位距10.18-18.02） 6.17-9.83) 在相同条件下[1]
- PK11195 在感染早期阶段导致感染巨噬细胞百分比随时间和剂量而降低：100 µM 处理 24 小时后降低 97.75%（IQR 98.69-97.58）； 48 小时后，感染细胞百分比为 1.37%（IQR 0.68-2.05），而对照组为 86.88%（IQR 81.5-90.94）[1]
- PK11195 降低了每个感染巨噬细胞中的寄生虫数量：75 µM 浓度下的中位数为 1.41（IQR 1.28-2.77），100 µM 浓度下的中位数为 1.16（IQR 1.00-2.22），而对照组为 6.37（IQR 5.95-6.65）[1]
- PK11195 对细胞内无鞭毛体的 IC50/48h 值为 46.55 ± 11.88 µM（浓度范围为 6.25 至 175 µM）[1]
- 在感染早期，100 µM PK11195 处理 24 小时后，活的细胞内寄生虫减少了 91.08%；75 µM 和 100 µM PK11195 处理 48 小时后，活的细胞内寄生虫分别减少了 99.09% 和 100% [1]
- 在感染后期（感染后 96 小时，所有寄生虫均转化为无鞭毛体），75 µM PK11195 处理 48 小时可使活的细胞内寄生虫减少 100%；50 或 75 µM PK11195 处理 72 小时也可使活的细胞内寄生虫减少 100% [1]
- PK11195 (75 µM) 对寄生虫活力的影响是不可逆的：处理 24 小时后，在无药培养 48 小时，寄生虫活力不可逆地减少了 97.15%； 48 小时处理后 100% 不可逆减少 [1]
- 与未处理的对照组相比，PK11195（75 µM 预处理 24 小时）使吞噬过程中质膜 NADPH 依赖性氧化酶产生的超氧化物 (O2•−) 减少 3.5 至 5.0 倍；在 LPS 预处理的巨噬细胞 (500 ng/mL) 中，PK11195 使 O2•− 的产生减少 5.0 倍 [1]
- PK11195（50 µM 处理 24 或 48 小时）显著降低了感染巨噬细胞中 MCP-1 的产生：24 小时降低 55.69% (p<0.0001)，48 小时降低 39.39% (p<0.0001)；在经 IFN-γ 预处理的感染巨噬细胞中，24 小时和 48 小时分别降低了 59.69% 和 56.82% (p<0.0001) [1]
- 在用 PK11195 处理 24 或 48 小时的感染巨噬细胞中，未检测到 NO 生成或 IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12 和 IFN-γ 水平的变化 [1]
- 经 PK11195 处理（75 µM，24 或 48 小时）后，通过电镜观察到细胞内亚马逊利什曼原虫的超微结构改变：双层膜囊泡（提示自噬）、线粒体体积增大、胞质明显紊乱、多囊泡体、胞质内高电密度以及寄生虫空泡内死亡寄生虫的碎片 [1]

无菌利什曼原虫前鞭毛体的存活率：将处于静止期的亚马逊利什曼原虫（L. amazonensis）、巴西利什曼原虫（L. braziliensis）和大型利什曼原虫（L. major）前鞭毛体以 2 × 10⁶ 个细胞/mL 的浓度接种于 96 孔板中，并在 24°C 下用 Schneider 完全培养基进行培养。将寄生虫用 PK11195 的 12 个两倍系列稀释液（400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.20 µM）或稀释剂（乙醇）处理 48 小时。加入 AlamarBlue 细胞活力检测试剂至终浓度为 10% (v/v)，并在 24°C 下孵育 4 小时。在 570 和 600 nm 波长处测定吸光度 [1]
- 巨噬细胞活力（细胞毒性）：将来自 CBA 小鼠的未感染的硫代乙醇酸盐诱导的腹腔巨噬细胞以 2×10⁵ 个细胞/mL 的浓度接种于 96 孔板中，并在 37°C 下用完全 DMEM 培养基培养。然后用浓度分别为 400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39 和 0.20 µM 的 PK11195 处理 48 小时，同时设置稀释剂（乙醇）阴性对照。加入 10% (v/v) 的 AlamarBlue，在 37°C 下孵育 4 小时，并在 570 和 600 nm 波长处测定吸光度。 CC50/48h 值为 194.4 µM（95% CI 151.4-249.6）[1]
- 感染和治疗（早期）：将 CBA 小鼠巨噬细胞以 10:1 的比例与处于静止期的亚马逊利什曼原虫前鞭毛体感染 6 小时，洗涤以去除未内化的寄生虫，然后用 25、50、75 或 100 µM 的 PK11195 处理 6、24 或 48 小时。对照组细胞用乙醇稀释或不进行任何处理。细胞经固定后用苏木精-伊红染色，并在1000倍光镜下计数每种条件下至少400个细胞，以确定感染细胞的百分比和每个感染巨噬细胞内的寄生虫数量[1]
- 细胞内无鞭毛体IC50测定：感染6小时的巨噬细胞用浓度分别为6.25、12、25、50、75、100、125、150和175 µM的PK11195处理48小时，然后固定并用DAPI染色。通过荧光显微镜测定感染细胞的百分比[1]
- 细胞内寄生虫活力测定（早期和晚期）：处理后，洗涤巨噬细胞，并将培养基更换为Schneider完全培养基以释放无鞭毛体。如果无鞭毛体存活，则会转化为前鞭毛体。细胞在 24°C 下培养 5 天，并在 Neubauer 计数室中计数活的前鞭毛体。对于晚期感染，细胞感染 6 小时后洗涤，在新鲜的 DMEM 培养基中培养 96 小时（使其完全转化为无鞭毛体），然后用 50 或 75 µM PK11195 或 2.1 µM 两性霉素 B 处理 24、48 或 72 小时 [1]
- 可逆性试验：感染的巨噬细胞用 75 µM PK11195 处理 6、12、24 或 48 小时，然后洗涤并在不含 PK11195 的完全 DMEM 培养基中继续培养 48 小时。活寄生虫的计数方法同上 [1]
- 超氧化物生成试验：采用鲁米诺增强化学发光法。将未经处理的炎症性腹膜CBA巨噬细胞或预先用75 µM PK11195、500 ng/mL LPS或二者在37°C下处理24小时的细胞置于发光仪中。在加入亚马逊利什曼原虫前鞭毛体之前，测量2分钟的基线O2•−释放量，然后测量20分钟的光子发射量，随后加入2.5 U/mL超氧化物歧化酶[1]。
- 细胞因子和NO生成测定：用硫代乙醇酸盐诱导的腹膜巨噬细胞（10⁶个细胞）用50 U/mL IFN-γ预处理24小时，感染后，用50 µM PK11195处理24或48小时（有或无IFN-γ）。收集培养上清液。采用流式细胞术多重微珠免疫分析法定量细胞因子（IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12、IFN-γ、MCP-1）水平。NO生成量通过Griess反应测定亚硝酸盐积累量来评估[1]

对未感染巨噬细胞的细胞毒性：CC50/48h = 194.4 µM（95% CI 151.4-249.6）[1]
- 对亚马逊利什曼原虫的选择性指数（CC50:IC50）= 13.7 [1]

[1]. Guedes CES, et al. In vitro evaluation of the anti-leishmanial activity and toxicity of PK-11195. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2018 Feb 5;113(4):e170345.

PK-11195 是一种单羧酸酰胺，由 1-(2-氯苯基)异喹啉-3-羧酸的羧基与仲丁基甲胺的氨基缩合而成。它是一种抗肿瘤药物。 PK-11195 属于异喹啉类、单羧酸酰胺类、芳香酰胺类和单氯苯类化合物。

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PK11195 是转位蛋白 (TSPO) 的配体，TSPO 以前被称为外周苯二氮卓受体 (PBR) [1]
- 与感染利什曼原虫的细胞相比，感染亚马逊利什曼原虫的 CBA 小鼠巨噬细胞中 TSPO 水平降低，这表明 TSPO 是利什曼病潜在的化疗靶点 [1]
- PK11195 已被用作 PET 成像中神经炎症的标志物，并表现出抗癌和免疫调节活性；研究表明，PK11195还能抑制恶性疟原虫和弓形虫的增殖[1]
- PK11195的抗利什曼原虫作用可能与TSPO相互作用无关，因为在利什曼原虫基因组中未发现TSPO同源物；PK11195可能通过改变脂质双层流动性发挥作用[1]
- PK11195具有疏水性，能以高亲和力与α-1-酸性糖蛋白结合，以低亲和力与白蛋白结合，这或许可以解释为何需要微摩尔浓度才能达到治疗效果[1]
- 观察到的超微结构改变（双层膜囊泡、线粒体肿胀、多囊泡体）提示细胞死亡可能通过多种机制发生，包括自噬[1]

C21H21CLN2O

352.862

352.134

85532-75-8

1345

Off-white to light brown solid powder

1.2±0.1 g/cm3

511.7±45.0 °C at 760 mmHg

74-75

263.3±28.7 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.611

4.58

33.2

0

2

4

25

457

0

O=C(N(C(CC)C)C)C1C=C2C(C=CC=C2)=C(C2C(Cl)=CC=CC=2)N=1

RAVIZVQZGXBOQO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H21ClN2O/c1-4-14(2)24(3)21(25)19-13-15-9-5-6-10-16(15)20(23-19)17-11-7-8-12-18(17)22/h5-14H,4H2,1-3H3

N-(sec-butyl)-1-(2-chlorophenyl)-N-methylisoquinoline-3-carboxamide

PK-11195 PK 11195PK11195

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~70.85 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。