Praeruptorin B   中文名称: 白花前胡素B

Sterol regulatory element-binding proteins (SREBPs)

Praeruptorin B 抑制 SREBP 活性并降低细胞内脂质水平。研究表明 Praeruptorin B 可以显着抑制 SRE 荧光素酶活性，并且这种影响具有剂量依赖性。即使浓度较高，Praeruptorin B 的细胞毒性也很低。 Praeruptorin B 还大幅下调 SREBP-1c 和 SREBP-2 的表达 [1]。 Praeruptorin B 还表现出对 UGT1A9 活性的显着抑制作用 [2]。

---

前胡素A（PA）和B（前胡素B/PB）是从白花前胡中分离得到的两个重要化合物，已被报道具有多种生化和药理活性。本研究旨在确定PA和PB对重要II期药物代谢酶尿苷5'-二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UGTs）亚型活性的抑制作用。体外UGT孵育系统用于测定PA和PB对各种UGT亚型活性的抑制潜力。通过计算机模拟对接来解释PA和PB对UGT1A6活性的抑制差异。测定抑制行为，并使用体外抑制动力学参数（Ki）和PA体内暴露水平的组合进行体外-体内外推。前喷发素A（100μM）对UGT1A6和UGT2B7的活性抑制最强，100μM PA分别抑制了97.8%和90.1%的活性。计算机模拟对接研究表明，氢键相互作用对PA对UGT1A6的抑制作用比PB更强。前喷发素A非竞争性抑制UGT1A6的活性，竞争性抑制UGT2B7的活性。PA对UGT1A6和UGT2B7的抑制动力学参数（Ki）分别为1.2和3.3μM。PA对UGT1A6和UGT2B7的抑制[I]/Ki值分别为15.8和5.8，表明PA在体内对这两种UGT亚型具有很高的抑制潜力。因此，密切监测PA与主要经历UGT1A6或UGT2B7催化代谢的药物之间的相互作用是非常必要的。[2]

---

前喷发素A对UGT1A6和UGT2B7的活性抑制作用最强[2]
首先使用100微摩尔的PA和Praeruptorin B/PB来筛选对UGT亚型的抑制潜力（图1和图2）。在测试的UGT亚型中，PA和PB对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10的活性没有或可以忽略不计的抑制潜力。100微摩尔的PA抑制了97.8%的活性（p < 0.001),但100 μM的PB没有抑制UGT1A6的活性。对于UGT1A7，其活性被抑制了68.3%（p < 0.001). PA和PB均对UGT1A9的活性表现出显著的抑制作用（p < 0.001). 100微摩尔的PA抑制了90.1%的UGT2B7活性（p < 0.001),100 μM的PB对UGT2B7的活性抑制了52.8%（p < 0.05). 在测试的UGT亚型中，PA对UGT1A6和UGT2B7的活性抑制作用最强。

---

氢键和疏水相互作用有助于前胡素A对UGT1A6的强烈抑制[2]
通过MODELLER程序构建了UGT1A6的三维结构，并在能量最小化后获得了最精细的模型。此外，配体PA和Praeruptorin B/PB被对接到UGT1A6的空腔中，活性空腔中的氨基酸残基如图3所示。配体PA和PB与UGT1A6的结合口袋由残基Gln34、Asp35、His38、Thr106、Ala107、Thr110、Glu111、Tyr112、Asn114、Asn115、Ala152、Arg172、Ile274、Gly275、Gly276、Met309、Ser311和Phe393组成。在结合袋中，抑制剂PA与Gly276的N原子形成一个氢键（图4）。此外，一些残基与PA形成疏水接触，包括疏水残基Ala152、Met309和Phe393；极性非带电残基Gln34、Tyr112、Asn114和Asn115；以及带极性电荷的残基Asp35、His38和Glu111，如图5A所示。前喷发蛋白B与UGT1A6没有形成氢键相互作用。前喷发蛋白B通过以下氨基酸残基与UGT1A6发生疏水相互作用：疏水残基Ala107、Ile274、Met309和Phe393；极性非带电残基Gln34、Thr106、Tyr112、Asn114、Asn115和Gly275；以及带极性电荷的残基Asp35、His38和Glu111（图5B）。

计算了抑制剂PA和PB对UGT1A6的结合自由能。前喷发素A以-5.52的结合自由能结合到UGT1A6的结合口袋中 kcal/mol，PB的结合自由能为-5.27 kcal/mol。因此，结合自由能的等级为PA < PB，表明PA对UGT1A6的抑制活性比PB更强，这与实验结果相当。
选择UGT1A8作为代表性的UGT亚型，以了解为什么PA没有特异性抑制某些UGT亚基。前爆发素A和B与UGT1A8的同一结合袋对接，结合袋中的残留物如支持信息中的图S1所示。UGT1A8的结合口袋由残基Ser36、His37、Phe39、Trp98、Phe109、Phe150、Arg170、Leu304、Gly305、Ser306、Met307、Arg333、Gln354、His369、Gly371、Ser372、His373、Gly374、Phe391、Asp393和Gln394组成。在PA和PB对UGT1A8的结合口袋中，这两种抑制剂与残基Gly374形成了相同的氢键（图S2）。此外，这两种抑制剂与UGT1A8形成疏水接触。前喷发蛋白A与残基Phe39、Phe109、Arg170、Ser306、Gln354、His369、Gly371、His373、Phe391和Asp393形成疏水接触。前喷发蛋白B与残基Ser36、His37、Phe39、Phe109、Phe150、Arg170、Leu304、Gly305、Ser306、Met307、Gly371、His369、His373、Phe391和Asp393形成疏水接触（图S3）。

前喷发蛋白A与UGT1A8相互作用，结合自由能为-7.64 kcal/mol。前喷发素B与PA的结合自由能与UGT1A8相似，结合自由能为-7.63 此外，PA和PB在结合袋中对UGT1A8产生了相似的相互作用。前喷发素A和B结合到UGT1A8的同一结合口袋中，并在结合口袋中与Gly374的N原子形成一个氢键。PA和PB都与非极性残基Phe39和Phe109形成疏水接触。所有这些结果都解释了为什么与PB相比，PA对UGT1A8没有表现出特异性抑制作用。

尽管它们仍然比饮食喂养的小鼠重，但用 Praeruptorin B (50 mg/kg) 治疗的小鼠明显比用载体治疗的小鼠轻，表明 Praeruptorin B 可能能够减轻饮食诱导的肥胖 (DIO)。更值得注意的是，用相同量的 Praeruptorin B 治疗的小鼠的脂肪/瘦肉和脂肪/体重比均显着降低。此外，研究表明，与高脂肪饮食的小鼠相比，用 prateruptorin B 治疗的动物血清 TC 和 TG 水平要低得多。与洛伐他汀类似，preruptorin B 会升高 HDL-c 并降低 LDL-c。此外，与给予赋形剂的小鼠相比，praeruptorin B 与洛伐他汀相当，它显着降低了肝脏中 TC 和 TG 的水平。根据染色结果，与用媒介物治疗的小鼠相比，用普拉普托林 B 治疗的小鼠显示出脂质积聚减少。在喂食高脂肪饮食的大鼠中，葡萄球菌前蛋白 B 显着降低升高的空腹血糖和胰岛素水平 [1]。

前胡素A和B对UGTs活性抑制潜力的测定[2]
根据之前的文献（Tang等人，2016；Liu等人，2016）对PA和Praeruptorin B/PB对UGTs活性的抑制作用进行了评估。体外培养混合物由以下成分组成 mM Tris-HCl缓冲液（pH = 7.4):MgCl2（5 mM）、II相辅因子UDPGA（5 mM”）、探针底物4-MU和重组UGT。PA和PB的储备溶液（20mM）通过使用二甲亚砜制备，并通过使用二甲基亚砜稀释制备各种浓度的工作溶液。预孵化5 min后，将UDPGA加入孵育混合物中以启动4-MU的葡糖醛酸化反应。反应温度、反应时间和分析条件已在之前描述过（Tang等人，2016；Liu等人，2016，Zhang等人，2017）。

许多代谢性疾病是由脂质稳态紊乱引起的。甾醇调节元件结合蛋白（SREBPs）是一类与脂质从头合成相关的核转录因子，因此被认为是治疗代谢性疾病的潜在靶点。本研究鉴定出一种新型的SREBPs抑制剂——普拉普托林B。我们使用HepG2细胞验证了普拉普托林B的降脂作用。结果显示，SREBPs及其靶基因的表达均显著受到抑制。此外，我们发现普拉普托林B通过调控PI3K/Akt/mTOR通路抑制SREBP蛋白的表达。在高脂饮食（HFD）喂养的肥胖小鼠模型中，普拉普托林B显著改善了HFD诱导的脂质沉积、高脂血症和胰岛素抵抗，并且肝脏中SREBPs及其相关基因的表达也下调。这些研究结果表明，普拉普托林B通过调节SREBP发挥降脂作用，可能成为改善高脂血症及其并发症的潜在治疗选择。[1]

既往文献已初步研究了PA和Praeruptorin B/PB的代谢消除途径。Song等人的实验表明，PA在人体内可快速代谢，氧化、水解、分子内酰基迁移和葡萄糖醛酸化是PA的主要代谢消除途径（Song等人，2014）。PB与人肝微粒体I相孵育混合物孵育后，生成了多种I相代谢物（Song等人，2011）。所有这些结果表明PA和PB可能与二甲氧基乙烷（DME）相互作用。本研究首次采用体外检测系统研究了PA和PB对各种UGT同工酶活性的抑制作用。结果显示，PA对UGT1A6和UGT2B7活性的抑制作用最强。采用计算机模拟分子对接方法解释了PA对代表性UGT同工酶UGT1A6活性的抑制作用强于PB的原因。PA和PB均可通过氢键和疏水相互作用对接至UGT1A6的活性腔。Praeruptorin A与UGT1A6形成一个氢键，而PB未与UGT1A6形成氢键。与PA相比，Praeruptorin B与UGT1A6形成更多的疏水相互作用。因此，氢键是PA对UGT1A6抑制作用较强的主要原因。
体内药物相互作用的强度可通过体外抑制动力学参数（Ki）和体内暴露浓度的结合进行预测。在肝硬化大鼠中，静脉注射5 mg/kg PA后，血浆浓度可达约7500 ng/mL（19 μM）。利用该值，计算得出PA对UGT1A6和UGT2B7抑制的[I]/Ki值分别为15.8和5.8。基于上述[I]/Ki标准，PA对UGT1A6和UGT2B7的体内抑制作用将非常强。
UGT1A6在异生物质和重要内源性物质的代谢中发挥着核心作用。例如，UGT1A6是催化神经递质血清素葡萄糖醛酸化代谢的关键酶（Sakakibara等，2015）。此外，UGT1A6还可以解毒致癌的芳胺和芳烃（Bock和Kohle，2005）。 UGT2B7 在催化多种临床药物（包括霉酚酸和 3′-叠氮-3′-脱氧胸苷（齐多夫定，AZT））的葡萄糖醛酸化代谢反应中发挥重要作用（Frymoyer 等，2013；Uchaipichat 等，2008）。UGT2B7 还可以结合一些内源性物质，包括胆汁酸、雄激素和雌激素（Gall 等，1999）。因此，PA 对这两种 UGT 同工酶的强抑制作用将显著干扰这些物质的代谢。
总之，本研究探讨了 PA 和Praeruptorin B/PB 对 UGT 同工酶的抑制作用，并证实了 PA 对 UGT1A6 和 UGT2B7 活性的强抑制作用。研究还预测了PA对UGT1A6和UGT2B7在体内可能具有高度抑制作用，这表明有必要监测PA与主要经UGT1A6或UGT2B7催化代谢的药物之间的相互作用。[1]

[1]. Praeruptorin B improves diet-induced hyperlipidemia and alleviates insulin resistance via regulating SREBP signaling pathway. RSC Adv., 2018, 8, 354–366.

[2]. The Inhibition of UDP-Glucuronosyltransferase (UGT) Isoforms by Praeruptorin A and B. Phytother Res. 2016 Nov;30(11):1872-1878.

白花千屈菜（Peucedanum praeruptorum Dunn，伞形科）的干燥根是一种著名的传统中药，已被正式收录于《中国药典》。据报道，它具有多种生化和药理活性，包括解热和镇咳作用（Song et al., 2015; Xiong et al., 2012）。白花千屈菜素A（PA）和B（PB）是从白花千屈菜中分离得到的两种重要化合物，据报道它们具有多种治疗作用，包括心脏保护作用（Wang et al., 2004; Song et al., 2015）和抗炎作用（Yu et al., 2011; Xiong et al., 2012）。越来越多的研究发现PA和PB/白花千屈菜素B具有抗肿瘤的潜力。例如，PA及其衍生物已被证实能够逆转癌细胞中P-糖蛋白介导的多药耐药性（Shen et al., 2006; Shen et al., 2012; Fong et al., 2008）。据报道，Praeruptorin A和B对胃癌具有治疗作用（Liang et al., 2010）。因此，PA和PB是具有很高研发潜力的潜在候选药物。
新药候选药物的研发上市需要考虑诸多因素，药代动力学因素是其中最重要的因素之一。代谢行为仍然是药代动力学特性中最重要的因素，代谢评价包括代谢途径的鉴定和代谢酶抑制潜力的测定。药物代谢酶（DME）分为I期和II期DME。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）是最重要的II期药物代谢酶，据报道参与多种外源性物质（例如药物、草药和污染物）（Atasilp等，2016）和内源性物质（例如雌激素、胆红素和胆汁酸）（Mu等，2016；Kallionpaa等，2015；Bock，2015）的代谢消除。UGTs活性的抑制会显著影响外源性物质和内源性物质的血浆暴露量。例如，茚地那韦和索拉非尼抑制UGT1A1催化的胆红素葡萄糖醛酸化，导致血浆胆红素浓度升高（Zucker等，2001；Peer等，2012）。双酚A和邻苯二甲酸酯对UGT同工酶活性的抑制作用已被用于解释双酚A和邻苯二甲酸酯的毒性机制（Jiang et al., 2013; Liu et al., 2016）。
本研究旨在确定PA和Praeruptorin B/PB对UGT同工酶活性的抑制作用。[2]

C24H26O7

426.4590

426.167

C, 67.59; H, 6.15; O, 26.26

73069-28-0

6450453

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

524.8±50.0 °C at 760 mmHg

175-176ºC

225.5±30.2 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.573

5.99

92.04

0

7

6

31

835

0

C/C=C(/C)\C(=O)OC1C(C(OC2=C1C3=C(C=C2)C=CC(=O)O3)(C)C)OC(=O)/C(=C\C)/C

PNTWXEIQXBRCPS-PVRNWPCDSA-N

InChI=1S/C24H26O7/c1-7-13(3)22(26)29-20-18-16(11-9-15-10-12-17(25)28-19(15)18)31-24(5,6)21(20)30-23(27)14(4)8-2/h7-12,20-21H,1-6H3/b13-7-,14-8-

[8,8-dimethyl-9-[(Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy-2-oxo-9,10-dihydropyrano[2,3-f]chromen-10-yl] (Z)-2-methylbut-2-enoate

Praeruptorin B; Praeruptorin D; 73069-28-0; 73069-26-8; (9S,10S)-8,8-Dimethyl-2-oxo-9,10-dihydro-2H,8H-pyrano[2,3-f]chromene-9,10-diyl (2Z,2'Z)-bis(2-methylbut-2-enoate); (+/-)-Praeruptorin B; 4970-26-7; (+)-Praeruptorin B;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~58.62 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.86 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。