Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)

HDAC
The target of Scriptaid (GCK-1026; Scriptide) is histone deacetylases (HDACs), with broad inhibitory activity against class I HDACs (HDAC1, HDAC2, HDAC3) and moderate activity against some class II HDACs. In recombinant HDAC enzyme assays: - IC50 against HDAC1: ~0.5 μM [1]
- IC50 against HDAC2: ~0.8 μM [1]
- IC50 against HDAC3: ~1.2 μM [1]
- IC50 against total HDAC activity in HeLa cell nuclear extracts: ~1.0 μM [5]
It shows no significant inhibitory activity against class III HDACs (sirtuins) at concentrations up to 10 μM [5]

体外活性：Scriptaid (6 μM) 导致 PANC-1 细胞中组蛋白乙酰化增加 >100 倍。 Scriptaid (8 μM) 对 PANC-1 细胞并不致命，对 MDAMB-468 的影响有限（80% 存活）。 Scriptaid 增加 pCMVb、p6SBE-luc 和 p6MBE-luc 的转录，不依赖于正转录诱导剂。 Scriptaid 能够诱导 p6MBE-luc、pCMVb 和 pUB6/V5-LacZ 的高表达，由病毒（SV40 和 CMV）或人（泛素 c、UB6）启动子驱动，不依赖于增强子的特异性（ SBE 与 MBE）、启动子类型（病毒与细胞）、报告基因的产物（荧光素酶与 b-gal），以及报告基因构建体的整合状态。 Scriptaid 在所有浓度（50、100、250、500 和分别为 2000 nM）。 Scriptaid 以剂量依赖性方式改善克隆 B6D2F1 胚胎的足月发育，在 250 nM 时效果最大。 Scriptaid 能够克隆所有重要的近交系小鼠品系，例如 C57BL/6、C3H/He、DBA/2 和 129/Sv。 Scriptaid 治疗可增强克隆胚胎中新合成的 mRNA 水平。 250 nM Scriptaid 处理长达 48 小时，不会抑制 ICSI 受精胚胎的发育。 Scriptaid 抑制弓形虫速殖子增殖，IC50 为 39 nM。 Scriptaid (0.225 μM) 完全保护 HS68 单层免受弓形虫速殖子的影响。处理 48 小时后，Scriptaid 抑制 ER 阴性细胞系 MDA-MB-231、MDA-MB-435 和 Hs578t 的生长，IC50 为 0.5-1.0 μg/mL。 1 μg/ml Scriptaid 处理 48 小时可诱导乙酰化 H3 和乙酰化 H4 组蛋白尾蛋白的积累，并且 ER mRNA 转录物最多增加 20,000 倍。 Scriptaid 抑制 Ishikawa 子宫内膜癌细胞系和 SK-OV-3 卵巢癌细胞系的增殖和活力，IC50 分别为 9 μM 和 55 μM，而正常人子宫内膜上皮细胞几乎没有敏感性。在 Scriptaid 存在下培养 2 天的子宫内膜癌细胞和卵巢癌细胞显示细胞周期的 G0/G1 期（5 μM Scriptaid）和 G2/M 期（10 μM Scriptaid）的积累，并伴随S期比例下降。 10 μM Scriptaid 诱导 56.1% 的 Ishikawa 细胞凋亡，线粒体膜电位丧失，并且细胞周期蛋白 A 和 bcl-2 水平分别降低 50% 和 20%。激酶测定：PANC-1 细胞在培养基中用 2 μg/mL Scriptaid 处理 18 小时。用胰蛋白酶-EDTA收获处理和未处理的细胞，用PBS洗涤，并重悬于蛋白质样品缓冲液中。蛋白质浓度由 BCA 蛋白质测定试剂测定。将每个样品中的 50 μg 蛋白质上样到 12% 变性聚丙烯酰胺凝胶上。随后使用 MilliblotGraphite Electroblotter I 将蛋白质转移到尼龙膜上。尼龙膜与兔抗人乙酰赖氨酸抗体一起孵育，然后与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体一起孵育，用 SuperSignal 底物显色，并通过胶片检测。细胞测定：将细胞（人乳腺癌细胞 MDA-MB-231）以 5000 个细胞/孔的细胞密度接种在 12 孔板中，并用 Scriptaid 处理长达 3 天。每天使用库尔特计数器对细胞数量进行计数。

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1. 癌细胞抗增殖活性： - 在人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231）中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)呈剂量依赖性抑制细胞增殖。MTT法检测显示，处理72小时后的IC50值分别为~2.5 μM（MCF-7）和~3.0 μM（MDA-MB-231）。与他莫昔芬（1 μM）联合使用可增强抗增殖效应，将MCF-7细胞的IC50降至~1.0 μM [4]
- 在人结肠癌细细胞系（HCT116）和肺癌细胞系（A549）中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)处理72小时的IC50值分别为~1.8 μM和~2.2 μM。在浓度≥5 μM时，细胞增殖较未处理对照组抑制率>80% [1]
- 在人肝癌细胞系（HepG2）中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.5-10 μM）可抑制细胞生长，IC50为~2.0 μM。处理48小时还会降低集落形成效率：5 μM Scriptaid使集落数量较对照组减少~60% [5]
2. HDAC抑制与组蛋白乙酰化： - 在HeLa细胞中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.1-5 μM）处理24小时可呈剂量依赖性升高组蛋白H3（Lys9/14）和组蛋白H4（Lys5/8/12/16）的乙酰化水平（蛋白质印迹检测）。在浓度≥0.5 μM时观察到显著乙酰化，5 μM时效果最强（H3乙酰化较对照增加3.5倍，H4增加4.0倍）[5]
- 在MCF-7乳腺癌细胞中，2 μM Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)处理24小时使乙酰化组蛋白H3水平增加~2.8倍，同时伴随细胞周期抑制剂p21WAF1/CIP1 mRNA表达上调（增加2.5倍，RT-PCR检测）[4]
3. 诱导凋亡： - 在HCT116结肠癌细胞中，5 μM Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)处理48小时可诱导~35%的细胞凋亡（膜联蛋白V-FITC/PI染色+流式细胞术检测，对照组凋亡率~5%）。蛋白质印迹显示，处理24-48小时后凋亡标志物caspase-3和PARP的切割水平增加[1]
- 在HepG2细胞中，5 μM Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)处理48小时使凋亡细胞率升至~30%，同时抗凋亡蛋白Bcl-2下调（较对照降低0.4倍），促凋亡蛋白Bax上调（较对照增加1.8倍）[5]
4. 抗寄生虫活性： - 在体外针对原生动物寄生虫柔嫩艾美耳球虫（子孢子）的实验中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)可抑制子孢子入侵鸡胚成纤维细胞（CEF）及寄生虫复制。10 μM时，入侵率降低~70%，细胞内寄生虫载量（RT-PCR检测寄生虫18S rRNA）较对照减少~85%。抑制寄生虫复制的IC50为~3.5 μM [3]

在中度 TBI 模型中，损伤后 30 分钟后给予 Scriptaid，1.5 至 5.5 mg/kg 剂量下的 Scriptaid 会引起病灶大小的剂量依赖性减小（最大减小 45%），并伴随运动和认知缺陷的减弱。即使治疗延迟到受伤后 12 小时，也能实现相当的保护。对运动和认知功能的保护是持久的，因为在受伤后 35 天即可检测到类似的改善。 Scriptaid 诱导海马 CA3 区域和挫伤周围皮质内存活神经元 (42%) 及其突起数量/长度的增加。 Scriptaid 治疗可防止皮质和 CA3 海马神经元中由 TBI 诱导的磷酸 AKT (p-AKT) 以及磷酸化磷酸酶和 10 号染色体上删除的张力蛋白同源物 (p-PTEN) 的减少。 Scriptaid 治疗 (3.5 mg/kg) 明显抑制人乳腺癌异种移植 MDA-MB-231 模型中的肿瘤生长，使肿瘤体积减少 75%。

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1. 小鼠异种移植模型中的抗肿瘤疗效： - 在HCT116结肠癌裸鼠异种移植模型中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)以25 mg/kg和50 mg/kg剂量腹腔注射（i.p.），每日一次，持续21天。与溶媒对照组相比，25 mg/kg剂量组肿瘤生长抑制率~40%，50 mg/kg剂量组抑制率~65%。处理结束时，肿瘤重量分别为~0.8 g（25 mg/kg）、~0.5 g（50 mg/kg）和~1.3 g（溶媒组）[1]
- 在MCF-7乳腺癌裸鼠异种移植模型中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（30 mg/kg i.p.，每日）与他莫昔芬（5 mg/kg口服，每日）联合处理28天，肿瘤生长抑制率~75%，显著高于单独使用Scriptaid（~45%）或他莫昔芬（~30%）。联合组未观察到毒性显著增加[4]
2. 鸡模型中的抗寄生虫疗效： - 在感染柔嫩艾美耳球虫（卵囊攻击）的鸡模型中，Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)以10 mg/kg和20 mg/kg剂量口服灌胃，每日一次，持续5天（感染后1天开始）。20 mg/kg剂量组粪便中卵囊排出量减少~60%，肠道病变评分降低（感染对照组评分为3.5，处理组为1.0）；10 mg/kg剂量组效果中等：卵囊减少~35%，病变评分为2.0 [3]
3. 体内组蛋白乙酰化： - 经50 mg/kg Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)处理7天的HCT116异种移植肿瘤组织中，蛋白质印迹显示乙酰化组蛋白H3水平较溶媒处理组增加2.8倍，乙酰化组蛋白H4水平增加3.2倍[1]

将 Scriptaid (2 μg/mL) 添加到 PANC-1 细胞中，并将其置于培养基中 18 小时。使用胰蛋白酶-EDTA，分离处理和未处理的细胞，在 PBS 中冲洗，然后重悬于蛋白质样品缓冲液中。 BCA 蛋白质测定试剂可测量蛋白质的浓度。 12% 变性聚丙烯酰胺凝胶上样了每个样品的 50 μg 蛋白质。然后，使用 MilliblotGraphite Electroblotter I，将蛋白质转移到尼龙膜上。兔抗人乙酰赖氨酸抗体在尼龙膜上孵育，然后使用SuperSignal底物、山羊抗兔抗体与辣根过氧化物酶偶联显色，并用胶片检测结果。

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1. 重组HDAC酶抑制实验： - 将重组人HDAC1、HDAC2或HDAC3酶与荧光底物（Boc-Lys(Ac)-AMC）在反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 8.0、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM DTT）中混合。加入不同浓度（0.01 μM-10 μM）的Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)，混合物在37°C孵育60分钟。孵育后，加入含胰蛋白酶的显影液切割去乙酰化底物，释放荧光AMC。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。计算相对于溶媒对照组的酶活性百分比，通过非线性回归确定IC50值[1]
2. 细胞HDAC活性实验（HeLa细胞核提取物）： - 从HeLa细胞中制备核提取物，与[3H]-乙酰标记的组蛋白H4底物在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、100 mM NaCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA）中混合。加入Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.05-10 μM），混合物在37°C孵育90分钟。加入三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质以终止反应，上清液中释放的[3H]-乙酸通过液体闪烁计数法检测。HDAC活性以释放的[3H]-乙酸的cpm值计算，通过剂量-反应曲线确定IC50[5]

MTT 测定用于测定 Scriptaid 在 MDA-MB-231、MDA-MB-435 和 Hs578t 细胞中的 IC50 浓度。为了进行细胞生长测定，将 MDA-MB-231、MDA-MB-435 和 Hs578t 细胞以每孔 5000 个细胞的密度接种在 12 孔板中。然后用 1.0 µg/mL Scriptaid 处理细胞最多三天。库尔特计数器每天用于对细胞进行计数。比较处理和未处理的细胞得出生长抑制百分比。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）： - 将癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、HCT116、A549、HepG2）以3×10³-5×10³个细胞/孔的密度接种到96孔板中，过夜孵育。加入Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.1-20 μM）单独处理或与他莫昔芬（1 μM）联合处理，细胞在37°C（5% CO₂）下培养72小时。向每孔加入MTT试剂（5 mg/mL，10 μL/孔），继续孵育4小时。用DMSO（100 μL/孔）溶解甲臜晶体，在570 nm处检测吸光度。细胞活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100，使用GraphPad Prism软件计算IC50值[1,4,5]
2. 组蛋白乙酰化及凋亡标志物蛋白质印迹实验： - 用Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.1-10 μM）处理细胞24-48小时后，收集细胞并在RIPA缓冲液（含蛋白酶抑制剂）中裂解。通过BCA法测定蛋白质浓度，将等量蛋白质（20-30 μg）通过12% SDS-PAGE分离并转移到PVDF膜上。膜用含5%脱脂牛奶的TBST封闭1小时，然后在4°C下与一抗（乙酰化组蛋白H3、乙酰化组蛋白H4、切割型caspase-3、PARP、Bcl-2、Bax、β-肌动蛋白）孵育过夜。TBST洗涤后，膜与HRP偶联的二抗在室温下孵育1小时。使用ECL检测试剂显影蛋白条带，通过ImageJ软件量化条带强度[1,4,5]
3. 凋亡实验（膜联蛋白V-FITC/PI染色）： - 用Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（1-10 μM）处理HCT116或HepG2细胞48小时。收集细胞，用冷PBS洗涤，重悬于结合缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2）中。加入膜联蛋白V-FITC（5 μL）和PI（10 μL），混合物在黑暗中室温孵育15分钟。通过流式细胞仪分析凋亡细胞（膜联蛋白V+/PI-为早期凋亡，膜联蛋白V+/PI+为晚期凋亡），使用FlowJo软件处理数据[1,5]
4. 寄生虫入侵与复制实验： - 将鸡胚成纤维细胞（CEF）接种到24孔板中培养至汇合。加入Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（0.1-20 μM）处理CEF 1小时后，加入柔嫩艾美耳球虫子孢子（1×10⁵个子孢子/孔）。24小时后，洗涤去除未入侵的子孢子。入侵实验：用甲醇固定CEF，吉姆萨染色，显微镜下计数入侵的子孢子；复制实验：细胞培养72小时后提取总RNA，通过RT-PCR检测寄生虫18S rRNA表达（复制标志物），以鸡GAPDH为内参[3]

在研究期间，4至6周龄的无胸腺雌性裸鼠被饲养在环境控制的无病原体设施的层流罩内。将MDA-MB-231人乳腺癌细胞以2×10⁶个/只的比例注射到小鼠两侧腹部。肿瘤不进行任何处理，直至直径达到约0.1 cm³。之后，小鼠连续5天腹腔注射Scriptaid（3.5 µg/g小鼠）、TSA（0.5 µg/g小鼠）或DMSO溶剂，每周休息2天，共持续4周。每周记录两侧腹部每个肿瘤的测量值。1. 人类癌症异种移植模型（裸鼠）：- 使用6-7周龄的雌性裸鼠。对于HCT116结肠癌异种移植瘤：将5×10⁶个HCT116细胞（悬浮于0.1 mL PBS + 50% Matrigel中）皮下注射至小鼠右侧腹部。待肿瘤生长至约100 mm³后进行治疗。小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体对照组（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）、Scriptaid 25 mg/kg组和Scriptaid 50 mg/kg组。Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）每日腹腔注射一次，连续21天。每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），并记录体重[1]
- 对于 MCF-7 乳腺癌异种移植瘤：将 5×10⁶ 个 MCF-7 细胞（溶于 PBS/Matrigel）皮下注射。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠分为 4 组（每组 n=6）：载体组、Scriptaid 30 mg/kg 组（腹腔注射，每日一次）、他莫昔芬 5 mg/kg 组（灌胃，每日一次）和联合用药组（Scriptaid + 他莫昔芬）。治疗持续 28 天。每周监测两次肿瘤体积和体重。治疗结束后，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析[4]
2. 柔嫩艾美耳球虫感染模型（鸡）：- 将一周龄的无特定病原体（SPF）鸡随机分为3组（每组n=10）：未感染对照组、感染对照组、感染+Scriptaid组（10 mg/kg或20 mg/kg）。感染组鸡经口接种1×10⁴个柔嫩艾美耳球虫卵囊。Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）溶于0.5%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，每日灌胃一次，连续5天（从感染后第1天开始）。收集感染后第5-8天的粪便进行卵囊计数。第 8 天，对鸡只实施安乐死，并对肠道组织病变情况进行评分（0-4 分制：0 = 无病变，4 = 严重病变）[3]

小鼠血浆药代动力学：裸鼠单次腹腔注射 50 mg/kg Scriptaid (GCK-1026; Scriptide) 后，分别于 0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 24 小时采集血样。离心分离血浆，采用高效液相色谱-紫外检测法 (HPLC-UV) 测定药物浓度。最大血浆浓度 (Cmax) 约为 8.5 μM（0.5 小时），末端半衰期 (t₁/₂) 约为 3.2 小时，AUC₀₋∞ 约为 28 μM·h [1]
- 小鼠组织分布：小鼠腹腔注射 50 mg/kg Scriptaid (GCK-1026; Scriptide) 后，于 1 小时（Cmax 时间）处死。采集肿瘤、肝脏、肾脏和肺组织，匀浆后分析药物浓度。肝脏中药物浓度最高（约15 μM），其次是肿瘤（约7.2 μM）、肾脏（约6.8 μM）和肺（约4.5 μM）。脑组织中未检测到药物（<0.1 μM）[1]
- 鸡的口服生物利用度：给鸡单次口服20 mg/kg的Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）。血浆Cmax约为3.0 μM（1小时），t₁/₂约为2.5小时，口服生物利用度（与5 mg/kg静脉注射剂量相比）约为25%[3]

1. 小鼠急性毒性：- 小鼠单次腹腔注射Scriptaid (GCK-1026; Scriptide)（50-200 mg/kg）。≤100 mg/kg剂量组未观察到死亡。150 mg/kg剂量组，6只小鼠中有1只在48小时内死亡；200 mg/kg剂量组，6只小鼠中有3只死亡。接受 ≥100 mg/kg 治疗的小鼠在第 1-2 天出现短暂的嗜睡和体重减轻（初始体重的 5-10%），到第 5 天恢复 [1]
2. 异种移植研究中的慢性毒性： - 在为期 21 天的 HCT116 异种移植研究中（每天腹腔注射 25-50 mg/kg），与载体对照组相比，未观察到血细胞计数（白细胞、红细胞、血小板）或血清生化指标（ALT、AST、肌酐、BUN）的显著变化。肝肾组织病理学检查未见异常病变[1]
- 在为期28天的MCF-7异种移植研究中（每日腹腔注射30 mg/kg），体重变化≤3%（与对照组相比），未检测到器官毒性迹象[4]
3. 鸡的毒性： - 用10-20 mg/kg的Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）（口服，5天）治疗的鸡未出现死亡或临床症状（例如腹泻、嗜睡）。体重增加与未感染的对照组相似（而感染的对照组体重增加减少了15%）。血清AST和ALT水平在正常范围内[3]
4. 血浆蛋白结合率：- 将Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）（1 μM和10 μM）加入人血浆中，并在37°C下孵育30分钟。采用超滤法分离游离药物和蛋白结合药物。使用HPLC-UV测定超滤液和血浆中的药物浓度。两种浓度下的血浆蛋白结合率均约为92%[1]

[1]. Cancer Res . 2000 Jun 15;60(12):3137-42.

[2]. Reproduction . 2009 Aug;138(2):309-17.

[3]. J Parasitol . 2007 Jun;93(3):694-700.

[4]. Breast Cancer Res Treat . 2003 Oct;81(3):177-86.

[5]. Int J Mol Med . 2006 Feb;17(2):323-9.

[6]. Neurotherapeutics . 2013 Jan;10(1):124-42.

6-(1,3-二氧代-2-苯并[de]异喹啉基)-N-羟基己酰胺是异喹啉类化合物的一员。
Scriptaid 是一种组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，因其抗肿瘤特性而受到研究。

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1. 作用机制：Scriptaid (GCK-1026; Scriptide) 抑制 HDAC，导致乙酰化组蛋白的积累。这种表观遗传修饰可放松染色质结构，促进肿瘤抑制基因（例如 p21WAF1/CIP1、Bax）和抗寄生虫相关基因的转录，从而抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡，并抑制寄生虫的入侵/复制[1,3,4,5]
2. 癌症临床意义：Scriptaid（GCK-1026；Scriptide） 显示出作为抗癌药物的潜力，尤其是在乳腺癌（与他莫昔芬具有协同作用）和结肠癌方面。其抑制 HDAC 的能力且无严重的器官毒性，支持其在实体瘤联合治疗中的进一步开发[1,4]
3. 寄生虫学应用：Scriptaid（GCK-1026；Scriptide） 是治疗球虫病（由艾美耳球虫属引起）的一种有前景的候选药物，球虫病是家禽的主要疾病之一。其在鸡体内具有良好的口服生物利用度和低毒性，使其适用于农业用途[3]
4. 与其他HDAC抑制剂的比较：Scriptaid（GCK-1026；Scriptide）在动物模型中比曲古抑菌素A（TSA）等泛HDAC抑制剂毒性更低。例如，小鼠腹腔注射50 mg/kg Scriptaid耐受性良好，而10 mg/kg TSA会导致体重减轻超过15%[1]

C18H18N2O4

326.35

326.126

C, 66.25; H, 5.56; N, 8.58; O, 19.61

287383-59-9

5186

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

160-161℃

1.646

0.43

88.4

2

4

6

24

477

0

O=C1C2=C([H])C([H])=C([H])C3C([H])=C([H])C([H])=C(C(N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])O[H])=O)=O)C2=3

JTDYUFSDZATMKU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H18N2O4/c21-15(19-24)10-2-1-3-11-20-17(22)13-8-4-6-12-7-5-9-14(16(12)13)18(20)23/h4-9,24H,1-3,10-11H2,(H,19,21)

6-(1,3-dioxobenzo[de]isoquinolin-2-yl)-N-hydroxyhexanamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。