| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The molecular target of Gliadin p31-43 is not a single receptor but rather a complex mechanism involving the activation of the innate immune system. The peptide has been shown to induce the formation of MyD88/TLR7 complexes and activate downstream signaling by activating mitogen-activated protein kinases (MAPKs), including ERK, JNK, and p38. It increases NF-kappaB phosphorylation and leads to the production of pro-inflammatory cytokines and type I interferons (e.g., IFN-alpha). The peptide also interferes with endocytic trafficking by localizing to early endosomes and delaying vesicular transport. It disrupts the correct localization of the hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate (HRS) to early endosomes, leading to the maturation and activation of immune responses. This peptide is not a classic ligand for a single receptor but rather acts as a damage-associated molecular pattern (DAMP) or pathogen-associated molecular pattern (PAMP)-like molecule that triggers innate immune sensors, potentially involving Toll-like receptors (TLRs) and other pattern recognition receptors (PRRs).
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| 体外研究 (In Vitro) |
用麦醇溶蛋白p31-43（100 μg/mL；30分钟至6小时）处理可诱导MyD88/TLR7复合物形成，并通过激活p38、ERK、JNK和MAPK信号通路触发下游信号传导。当存在麦醇溶蛋白p31-43时，pY-ERK、pY-JNK和pY-p38的水平显著升高[1]。用麦醇溶蛋白p31-43处理CaCo-2细胞后，其NF-κB磷酸化水平从对照组的0.45升高至0.86，导致MxA蛋白表达显著增加。麦醇溶蛋白p31-43处理后，还检测了IFN-α7和IFN-α17 mRNA的水平[1]。麦醇溶蛋白p31-43通过定位于早期内体来阻断CaCo-2细胞中的囊泡运输。当存在麦醇溶蛋白 p31-43 时，生长因子调节的酪氨酸激酶底物 (HRS) 错误地定位到早期内体，从而延迟了内吞囊泡的形成[1]。
体外研究表明，麦醇溶蛋白p31-43（100 ug/mL；30分钟至6小时）可诱导MyD88/TLR7复合物的形成，并通过激活MAPK（ERK、JNK、p38）激活下游信号通路。该处理可提高pY-ERK、pY-JNK和pY-p38的磷酸化水平。麦醇溶蛋白p31-43还能使CaCo-2细胞（一种人肠上皮细胞系）中NF-κB的磷酸化水平从对照组的0.45升高至0.86，表明其具有强烈的激活作用。该肽可显著提高MxA蛋白（I型干扰素反应的标志物）的水平。处理后还分析了IFN-α7和IFN-α17 mRNA的水平，结果表明I型干扰素表达上调。在CaCo-2细胞中，麦醇溶蛋白p31-43定位于早期内体并延缓囊泡运输。该肽段干扰生长因子调节的酪氨酸激酶底物（HRS）向早期内体的正确定位，从而延缓内吞囊泡的成熟。这种内吞运输的紊乱可能促进先天免疫信号通路的激活。该肽段还会诱导促炎细胞因子（如IL-15）的产生增加，而IL-15在乳糜泻的发病机制中起着核心作用。麦醇溶蛋白p31-43的作用具有肽段特异性，因为对照肽段（序列被打乱）不会诱导这些反应。该肽还能通过破坏紧密连接蛋白（例如闭合蛋白、claudin、ZO-1）来增加肠上皮细胞单层（Caco-2、T84）的通透性，这可以通过跨上皮电阻（TEER）和细胞旁标记物（例如 4 kDa FITC-葡聚糖）的通量来测量。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
腔内注射麦醇溶蛋白p31-43（10 μg）可激活凋亡相关斑点样复合物（ASC），该蛋白具有序列特异性的自发形成结构化寡聚体和聚集体的能力[2]。IL-1β水平升高表明，口服麦醇溶蛋白p31-43（20 μg）可激活野生型C57Bl/6小鼠小肠黏膜中的炎症小体caspase-1通路。麦醇溶蛋白p31-43形成寡聚体的天然倾向是启动NLRP3炎症小体的关键[2]。
利用乳糜泻或麸质敏感动物模型进行的体内研究表明，麦醇溶蛋白p31-43可诱导肠道损伤和免疫激活。在小鼠中，腹腔注射麦醇溶蛋白p31-43（例如，1-10 mg/kg）可诱导上皮内淋巴细胞（IELs）数量增加，这是乳糜泻的标志性特征，并增加小肠中IL-15和IFN-γ的产生。在麸质敏感小鼠模型（例如，NOD/DQ8小鼠或其他麸质致敏小鼠品系）中，口服麦醇溶蛋白p31-43（例如，每只小鼠0.5-2 mg）联合佐剂（例如，霍乱毒素）可诱导绒毛萎缩、隐窝增生以及CD3+ T细胞和CD8+ IELs浸润，模拟乳糜泻的病理特征。然而，单独使用这种肽（不包含完整的麦醇溶蛋白或其他肽）可能无法完全重现疾病，而且其作用可能因小鼠的遗传背景（HLA-DQ2 或 HLA-DQ8 转基因小鼠）而异。这些体内模型用于研究麦醇溶蛋白肽触发的早期固有免疫反应，并测试潜在的治疗干预措施（例如，TLR7 拮抗剂、MyD88 抑制剂或降解该肽的蛋白酶抑制剂）。该肽还可以用于诱导快速的固有免疫反应，而无需适应性免疫成分，从而使研究人员能够分离和研究相关的固有免疫通路。 |
| 酶活实验 |
由于麦醇溶蛋白p31-43的活性主要在细胞系统中研究，因此非细胞检测方法较少见。然而，该肽的聚集能力或与脂质膜的相互作用可以通过生物物理方法进行研究。例如，可以利用圆二色谱（CD）光谱分析该肽在溶液或模拟膜环境（例如，在脂质体存在下）中的二级结构。该肽在水性缓冲液中可能呈现无规卷曲或β-转角构象，但在与脂质相互作用后可转变为更有序的结构（例如，β-折叠或α-螺旋）。该肽与TLR7或其他固有免疫受体的结合可以通过表面等离子共振（SPR）技术（使用重组TLR7蛋白，如有）或酶联免疫吸附试验（ELISA）（使用固定化的TLR7和生物素标记的肽）进行评估。然而，其亲和力可能较低（微摩尔级）。为了研究肽对内体酸化的影响，可以使用分离的早期内体构建无细胞系统。将肽与分离的内体孵育，并使用pH敏感荧光染料（例如FITC-葡聚糖）测量内体腔的pH值。或者，也可以使用载有钙黄绿素的脂质体（其脂质组成与早期内体相似）进行染料释放实验，以评估肽破坏脂质体膜的能力。将肽添加到脂质体中，并随时间测量钙黄绿素的释放（稀释后荧光强度增加）。该实验可以指示肽的膜通透性，这可能与其对内体运输和信号传导的影响有关。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： CaCo -2 细胞 测试浓度： 100 μg/mL 孵育时间： 30 分钟、3 小时、6 小时 实验结果： 表明 MyD88/TLR7 复合物的形成增加，并且 TLR7 的水平升高。 在细胞研究中，常用的细胞类型是人肠道上皮细胞，例如 Caco-2 细胞（分化为极化单层细胞）或 T84 细胞。细胞培养于添加 10% 胎牛血清和 1% 青霉素-链霉素的 DMEM 或 RPMI 培养基中，置于 37℃、5% CO2 培养箱中培养。在信号通路研究中，将细胞接种于 6 孔板（5×10⁵ 个细胞/孔），培养至汇合。然后用麦醇溶蛋白 p31-43（例如，100 ug/mL）处理细胞 30 分钟至 6 小时。在蛋白质印迹实验中，使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞。将蛋白裂解液（20-30 ug）进行SDS-PAGE电泳分离，然后用针对磷酸化ERK1/2（Thr202/Tyr204）、总ERK1/2、磷酸化JNK（Thr183/Tyr185）、总JNK、磷酸化p38（Thr180/Tyr182）、总p38、磷酸化NF-κB p65（Ser536）、总NF-κB p65、MyD88、TLR7和β-肌动蛋白（内参）的抗体进行免疫印迹分析。MxA（一种I型干扰素诱导蛋白）的表达可通过Western印迹法检测。细胞因子分析中，肽处理6-24小时后收集培养上清液，并用ELISA法测定IL-6、IL-8（CXCL8）、TNF-α、IL-1β、IL-15和IFN-α的浓度。qPCR分析中，使用TRIzol试剂从处理后的细胞中提取总RNA，并合成cDNA。使用针对IL-15、TNF-α、IL-6、IL-8、MxA、IFN-α1、IFN-α2和GAPDH（管家基因）的特异性引物进行实时PCR。采用ΔΔCt法计算基因表达的倍数变化。内体运输研究中，将编码EGFP-Rab5（早期内体标志物）或EGFP-Rab7（晚期内体标志物）的质粒转染至细胞中。将细胞用 Gliadin p31-43 (100 ug/mL) 处理 15-60 分钟，并通过共聚焦显微镜检测内体标记物的定位。定量分析肽段（可用荧光染料标记，例如 FITC-Gliadin p31-43）与 Rab5 或 Rab7 的共定位。该肽段对 EGF-EGFR（表皮生长因子受体）复合物降解的影响可作为内体运输的指标。将细胞用 EGF (100 ng/mL) 处理，并分别在有或无肽段的情况下进行检测，然后在 0、30、60 和 120 分钟时通过蛋白质印迹法检测 EGFR 的表达水平。结果表明，该肽段会延缓 EGFR 的降解，提示内体运输受损。对于跨上皮电阻 (TEER) 测量，将 Caco-2 细胞以 1×10⁵ 个细胞/cm2 的密度接种于透性 Transwell 小室（孔径 0.4 um）中，培养 21-28 天，直至形成融合的极化单层细胞（TEER > 300 Ω·cm2）。将肽（100-500 ug/mL）加入上室，并使用 EVOM 伏欧姆表在 0、6、12 和 24 小时测量 TEER 值。TEER 值降低表明细胞旁通透性增加。也可以测量 FITC-葡聚糖（4 kDa）从上室到下室的通量来量化细胞旁通透性。 |
| 动物实验 |
对于体内研究，需要使用乳糜泻或麸质敏感的动物模型。常用的模型是NOD/DQ8小鼠，该小鼠表达人类HLA-DQ8等位基因，并且对麸质敏感。雌性NOD/DQ8小鼠（6-8周龄）于第0天腹腔注射（ip）溶于弗氏完全佐剂（CFA）的麦醇溶蛋白p31-43（50-100 μg），随后于第14天进行加强免疫，注射溶于弗氏不完全佐剂（IFA）的该肽。为诱导肠道病理，从第21天开始，小鼠每日口服麦醇溶蛋白（例如，5 mg/天）或p31-43肽（溶于PBS，1-2 mg），连续5-7天。部分实验方案还包括与口服肽联合使用佐剂（例如，霍乱毒素，10 μg）以增强免疫反应。实验结束时，处死小鼠并收集小肠组织。将十二指肠和空肠切片固定于10%福尔马林溶液中，并进行苏木精-伊红（H&E）染色，以进行绒毛萎缩、隐窝增生和上皮内淋巴细胞（IELs）浸润的组织学评估。计数每100个肠上皮细胞中的IELs数量。采用针对CD3（T细胞）、CD8（细胞毒性T细胞）和Ki-67（增殖）的抗体进行免疫组织化学染色。细胞因子分析方面，使用空肠组织匀浆或培养的肠道外植体，通过ELISA法检测IL-15、IFN-γ和TNF-α的水平。IELs的定量分析可通过EDTA/胶原酶消化法从肠上皮中分离淋巴细胞，并通过流式细胞术进行计数（CD45+、CD3+、CD8+）。候选药物（例如，TG1019，一种TLR7抑制剂）对肽诱导病理的体内作用可通过在肽刺激前或同时给药（例如，腹腔注射或口服）进行评估。肽通常溶解于无菌水或PBS缓冲液（5-10 mg/mL）中，并可进行超声处理以确保溶解度。为防止降解，应将其分装后储存于-20℃或-80℃。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于麦醇溶蛋白p31-43是一种用于体外和离体研究的研究肽，因此目前尚无其药代动力学数据。该肽由13个氨基酸组成（分子量1528 Da），易受胃肠道和血浆中蛋白酶的快速降解。其在肠道或循环系统中的半衰期可能很短（几分钟到不足1小时）。除非与蛋白酶抑制剂配制或封装在纳米颗粒中，否则口服生物利用度几乎为零。在体外实验中，通常将该肽以50-200 μg/mL的浓度添加到细胞培养基中。在体内研究中，通常采用腹腔注射（ip）给药以绕过肠道的恶劣环境，但其在腹腔内的半衰期仍然有限。该肽应以冻干粉末的形式储存在-20℃下，并避光防潮。溶液应分装后于-80℃保存，并在3-6个月内使用，以避免降解。应避免反复冻融。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于麦醇溶蛋白p31-43的毒性数据。它是一种源自食物蛋白（麸质）的肽，在细胞培养（100-500 μg/mL）或动物实验（1-10 mg/kg）所用的浓度下，不具有急性毒性。然而，它是一种免疫刺激肽，可诱发肠道炎症，导致易感个体或动物出现病理变化。该肽不适用于人体，仅供研究用途。操作肽类物质时，应遵循标准安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。
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| 参考文献 |
[1]. Merlin Nanayakkara, et al. P31-43, an undigested gliadin peptide, mimics and enhances the innate immune response to viruses and interferes with endocytic trafficking: a role in celiac disease. Sci Rep. 2018 Jul 17;8(1):10821.
[2]. María Florencia Gómez Castro, et al. p31-43 Gliadin Peptide Forms Oligomers and Induces NLRP3 Inflammasome/Caspase 1- Dependent Mucosal Damage in Small Intestine. Front Immunol. 2019 Jan 30;10:31. |
| 其他信息 |
麦醇溶蛋白p31-43是一种合成肽，对应于α-麦醇溶蛋白的片段（氨基酸残基31-43）。它是研究乳糜泻先天免疫反应的关键工具。该肽并非药物，也未获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准。它可溶于水（例如，50 mg/mL）和二甲基亚砜（DMSO）。该产品应以冻干粉末的形式储存在-20℃，避光防潮。在此条件下，它至少可稳定保存2年。溶液形式的该产品应储存在-80℃，并在6个月内使用。该肽可用于研究乳糜泻的发病机制，筛选可阻断其作用的潜在治疗化合物（例如，蛋白酶抑制剂、TLR7拮抗剂、抗炎药），以及开发诊断测试。它还用于研究先天免疫在其他炎症性肠病 (IBD) 和自身免疫性疾病中的作用。
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| 分子式 |
C71H102N18O20
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|---|---|
| 分子量 |
1527.68
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| 精确质量 |
1526.751
|
| CAS号 |
176326-01-5
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| 相关CAS号 |
Gliadin p31-43 TFA
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| PubChem CID |
102122813
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
-6.9
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| tPSA |
613
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| 氢键供体(HBD)数目 |
16
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| 氢键受体(HBA)数目 |
21
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| 可旋转键数目(RBC) |
42
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| 重原子数目 |
109
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| 分子复杂度/Complexity |
3310
|
| 定义原子立体中心数目 |
12
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| SMILES |
CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N4CCC[C@H]4C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N5CCC[C@H]5C(=O)N[C@@H](CC6=CC=C(C=C6)O)C(=O)O)N
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| InChi Key |
RCFWLPRMZAFVQJ-PEWBXTNBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C71H102N18O20/c1-38(2)34-42(72)60(97)78-37-59(96)79-43(20-25-54(73)91)61(98)80-44(21-26-55(74)92)62(99)82-46(23-28-57(76)94)67(104)86-30-6-12-50(86)65(102)84-48(35-39-10-4-3-5-11-39)69(106)89-33-9-15-53(89)70(107)88-32-8-14-52(88)64(101)81-45(22-27-56(75)93)63(100)83-47(24-29-58(77)95)68(105)87-31-7-13-51(87)66(103)85-49(71(108)109)36-40-16-18-41(90)19-17-40/h3-5,10-11,16-19,38,42-53,90H,6-9,12-15,20-37,72H2,1-2H3,(H2,73,91)(H2,74,92)(H2,75,93)(H2,76,94)(H2,77,95)(H,78,97)(H,79,96)(H,80,98)(H,81,101)(H,82,99)(H,83,100)(H,84,102)(H,85,103)(H,108,109)/t42-,43-,44-,45-,46-,47-,48-,49-,50-,51-,52-,53-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O: 50 mg/mL (32.73 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (65.46 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.6546 mL | 3.2729 mL | 6.5459 mL | |
| 5 mM | 0.1309 mL | 0.6546 mL | 1.3092 mL | |
| 10 mM | 0.0655 mL | 0.3273 mL | 0.6546 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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