| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary target of Melanin probe-1 is melanin, a biopolymer produced by melanocytes that is responsible for skin, hair, and eye pigmentation. Melanin is abundantly present in malignant melanoma cells, making it an excellent biomarker for imaging. The probe is based on an 18F-picolinamide structure that has a high affinity for the melanin polymer. The binding likely involves pi-pi stacking interactions between the aromatic rings of the probe and the stacked indole-5,6-quinone units of eumelanin, as well as hydrogen bonding with the carboxyl and hydroxyl groups. The 18F isotope is a positron emitter used for PET imaging, which provides high sensitivity and quantitative, three-dimensional imaging of the probe's distribution in the body. By binding to melanin, Melanin probe-1 allows for the non-invasive visualization of melanin-containing tumors. This probe is selective for melanin and does not significantly bind to other tissues, resulting in high tumor-to-background contrast ratios.
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| 体外研究 (In Vitro) |
黑色素探针-1的体外研究主要集中于验证其黑色素结合特异性以及在黑色素瘤细胞中的细胞摄取。可使用合成黑色素或从黑色素瘤细胞中分离的黑色素进行结合试验，评估19F（非放射性）或18F标记的探针与黑色素的结合亲和力。在典型的试验中，将不同浓度的探针与黑色素（例如，100 ug/mL）在PBS缓冲液中于37℃孵育30-60分钟。通过离心分离未结合的探针，并通过测量放射性（对于18F）或高效液相色谱法（对于19F）测定与黑色素结合的探针量。计算结合亲和力（Kd）和结合容量（Bmax）。在细胞摄取研究中，将人黑色素瘤细胞系（例如，B16F10 小鼠黑色素瘤细胞、A375 人黑色素瘤细胞、SK-MEL-28 细胞）与 [18F]黑色素探针-1（例如，3.7 MBq/mL）在 37℃ 下孵育 15-120 分钟。洗涤细胞以去除未结合的探针，并在 γ 计数器中测量细胞相关的放射性。摄取量以每百万个细胞中添加剂量的百分比表示。通过使用过量的非放射性探针（例如，10-100 uM）或黑色素结合化合物（例如，氯喹）进行竞争性抑制来验证其特异性。黑色素探针-1 在产生黑色素的黑色素瘤细胞中显示出高摄取，但在非黑色素瘤细胞（例如，HEK293、HeLa）或无黑色素黑色素瘤细胞中摄取较低。细胞内定位可通过放射自显影或使用探针荧光类似物的共聚焦显微镜进行可视化。体外稳定性评估方法为：将[18F]黑色素探针-1在小鼠或人血清中于37℃孵育1-4小时，然后进行放射性高效液相色谱（radio-HPLC）检测降解情况。该探针表现出良好的体外稳定性，2小时后仍有>90%保持完整。
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| 体内研究 (In Vivo) |
黑色素探针-1（3.7 MBq；尾静脉注射）具有很高的肿瘤靶向效率[1]。黑色素探针-1展现出良好的体内稳定性以及优异的药代动力学特性，例如快速从泌尿系统排泄，并在两小时内所有主要器官的吸收水平接近背景水平。黑色素探针-1 PET具有很高的选择性和特异性，肿瘤与非肿瘤区域的显像比也很高[1]，因此在改善黑色素瘤诊断方面具有巨大的潜力。
在黑色素瘤小鼠模型中进行的体内研究表明，Melanin probe-1 具有优异的肿瘤靶向能力。在皮下接种 B16F10 小鼠黑色素瘤（色素模型）的 C57BL/6 小鼠中，尾静脉注射 [18F]Melanin probe-1（3.7 MBq）可导致肿瘤快速摄取，并产生较高的肿瘤/背景对比度。注射后 0.5、1 和 2 小时，肿瘤摄取值分别为 12.74 +/- 1.70、16.61 +/- 2.60 和 16.87 +/- 1.23 %ID/g（每克组织中注射剂量的百分比）。肿瘤/肌肉比值较高（例如，2 小时时 >10），表明成像对比度极佳。该探针展现出优异的体内稳定性及良好的药代动力学特性，例如可快速从泌尿系统清除，且在注射后2小时内所有主要器官的摄取量几乎达到背景水平。该探针具有高选择性和特异性，肿瘤与非肿瘤组织摄取比值高，凸显了黑色素探针-1 PET在提高黑色素瘤检测率方面的潜力。该探针在肺部和肝脏的色素性黑色素瘤转移灶中也有摄取。在A375人黑色素瘤异种移植模型（色素较少或无色素）中，摄取量较低，但仍可检测到。该探针还被用于评估其他模型（例如原位或转移模型）中黑色素瘤的成像效果。通过在注射后不同时间点解剖主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肌肉、骨骼、脑、肿瘤），并使用伽马计数器测量放射性，来评估其生物分布。该探针主要通过肾脏途径快速清除，在肝脏和其他非靶组织中的滞留量极低。其优异的药代动力学特性和低背景值使其适用于临床转化。 |
| 酶活实验 |
用于检测黑色素探针-1的非细胞分析方法主要包括分析和结合研究。为了测定其与黑色素的结合，可进行放射性配体结合实验，该实验使用18F标记的黑色素探针-1和合成黑色素。在1.5 mL Eppendorf管中，将合成黑色素（0.1-5 mg）悬浮于0.5 mL PBS缓冲液（pH 7.4）中。加入一定量的[18F]黑色素探针-1（例如，100,000 cpm），涡旋混匀，并在37℃下振荡孵育30-60分钟。然后将试管以15,000 rpm离心10分钟。去除上清液，沉淀物用0.5 mL PBS缓冲液洗涤两次。使用γ计数器测量沉淀物和合并的上清液中的放射性。结合探针的百分比计算方法为（沉淀物 cpm / 总 cpm × 100）。非特异性结合在过量非放射性黑色素探针-1（例如，10-100 uM）存在下测定。结合亲和力 (Kd) 可通过饱和结合实验测定，其中将恒定量的黑色素（例如，0.5 mg）与浓度递增的 18F 标记探针（0.1-100 nM）孵育。结合态和游离态按上述方法分离，并将结合等温线拟合到单一位点结合模型。Scatchard 分析中，绘制结合态/游离态与结合态的关系图。选择性研究中，将探针与其他生物聚合物（例如，纤维素、淀粉、蛋白质）孵育以评估非特异性结合。探针应与这些物质表现出较低的结合。可以测定非放射性前体的熔点、LogP 值和其他理化性质。辛醇/水分配系数 (LogP) 可通过摇瓶法测定。将少量 18F 标记的探针加入到 1-辛醇和 PBS 缓冲液（1:1，各 2 mL）的混合溶液中。涡旋振荡 1 分钟，然后以 2000 rpm 离心 5 分钟。分别取两相各 100 uL 样品，用 γ 计数器进行计数。LogP 的计算公式为 log10(辛醇中 cpm / 水中 cpm)。此类探针的 LogP 值通常在 1-2 左右，表明其具有中等亲脂性。为评估其血浆稳定性，将 18F 标记的探针在 37℃ 下于小鼠或人血浆 (0.5 mL) 中孵育至多 4 小时。在不同时间点（0、30、60、120、240 分钟），取出 50 uL 样品，并用 200 uL 乙腈沉淀蛋白质。离心后，取上清液进行放射性高效液相色谱分析（C18 色谱柱，流动相：含 0.1% 三氟乙酸的水/乙腈，梯度洗脱）。根据峰面积 (AUC) 计算完整探针的百分比。测定其在血浆中的半衰期。对于体外代谢研究，将探针与小鼠或人肝微粒体（0.5 mg/mL）和 NADPH 再生系统孵育 1 小时，并用放射性高效液相色谱分析代谢产物。
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| 细胞实验 |
用于检测黑色素探针-1的细胞实验包括黑色素瘤细胞的摄取和外排研究。人黑色素瘤细胞系（例如SK-MEL-28、A375、B16F10）在含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2培养箱中培养。在摄取实验中，将细胞接种于24孔板（2×10⁵个细胞/孔），并使其过夜贴壁。更换新鲜培养基（0.5 mL），其中含有[¹⁸F]黑色素探针-1（例如，37 kBq/mL）。在37℃孵育15、30、60和120分钟后，移除培养基，并用冰冷的PBS洗涤细胞三次。用0.5 mL 0.1 N NaOH裂解细胞，并将裂解液转移至试管中，用γ计数器进行计数。裂解液的蛋白质含量通过BCA法测定。摄取量以每毫克蛋白质的添加剂量百分比表示，或以每10^6个细胞的cpm值表示。为了研究黑色素含量对摄取的影响，可在摄取实验前48-72小时用黑色素生成增强剂（例如，α-MSH，100 nM）或抑制剂（例如，苯硫脲，PTU）处理细胞。为了研究摄取机制，实验在4℃下进行（以阻断主动转运），或在内吞抑制剂（例如，氯丙嗪、dynasore或细胞松弛素D）存在下进行。由于探针体积小且亲脂性适中，因此很可能是通过被动扩散而非内吞作用摄取的。在外排研究中，细胞先用探针孵育30分钟，洗涤后，再在不含探针的培养基中分别孵育0、15、30和60分钟。测量细胞内残留的放射性。为了评估非放射性前体的细胞毒性，将细胞用黑色素探针-1前体（0.1-1000 uM）处理24-72小时，并通过MTT或CellTiter-Glo法检测细胞活力。该前体预计毒性较低（IC50 > 100 uM）。在竞争性抑制研究中，将不同浓度（0.1-100 uM）的未标记黑色素探针-1前体与18F标记的探针一起加入到孵育培养基中，以确定其结合的IC50值。为了评估特异性，将探针在有色素细胞（B16F10、SK-MEL-28）和非色素细胞（A375、HEK293）中的摄取情况进行比较。有色素细胞中的摄取量应显著更高（例如，5-10倍）。如果存在荧光类似物（例如，FITC标记或Cy5标记），该探针也可用于基于荧光的检测。将活细胞与荧光类似物孵育后，可通过共聚焦显微镜观察探针的细胞内分布（预计探针与黑素体共定位）。由于酸性pH值（质子化）或高结合亲和力，荧光探针可能被捕获在黑素体中。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型： 携带 B16F10 鼠黑色素瘤的 C57BL/6 小鼠[1]
剂量： 3.7 MBq (100 μCi) 给药途径： 尾静脉 实验结果： 黑色素探针-1 的肿瘤摄取量在 0.5、1 和 2 小时分别为 12.74 ± 1.70、16.61 ± 2.60 和 16.87 ± 1.23 %ID /g。 黑色素探针-1的体内实验方案主要集中于PET成像研究。将B16F10鼠黑色素瘤细胞（1-5×10⁶个细胞，溶于100 μL PBS）皮下注射到6-8周龄雌性C57BL/6小鼠的侧腹部。当肿瘤体积达到200-500 mm³（接种后约10-14天）时，对小鼠进行PET成像。[¹⁸F]黑色素探针-1经尾静脉注射（3.7-7.4 MBq，溶于100-200 μL生理盐水）。小鼠用异氟烷（1-2%异氟烷/氧气）麻醉，并置于小动物PET扫描仪（例如，Inveon，西门子）中。静态PET扫描在注射后0.5、1和2小时进行，每次通常持续10-30分钟。动态PET成像则在注射后0-60分钟内连续采集数据。最后一次扫描后，将小鼠安乐死，切除肿瘤和主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肌肉、骨骼、脑），称重后用γ计数器计数，以测量%ID/g并验证PET信号。对PET图像进行感兴趣区域（ROI）分析，以获得肿瘤和正常组织的标准摄取值（SUV）。计算肿瘤/肌肉比值和肿瘤/血液比值。在阻断研究中，将过量的非放射性黑色素探针-1（例如10 mg/kg）与放射性示踪剂共同注射，以验证特异性（降低肿瘤摄取）。为了评估代谢稳定性，分别在注射后 5、15、30 和 60 分钟采集血样，并按上述方法通过放射性高效液相色谱法 (radio-HPLC) 分析血浆。对于放射自显影，将肿瘤切片（10 μm 厚）暴露于磷光成像板数小时，然后扫描成像板以观察探针在肿瘤内的分布。放射自显影信号应与富含黑色素的区域（通过 Fontana-Masson 染色或其他黑色素染色方法鉴定）共定位。对于转移性黑色素瘤模型的研究，将 B16F10 细胞（例如，1×10⁵ 个细胞溶于 100 μL PBS）静脉注射到小鼠体内以诱导肺转移。14 天后，注射探针并对小鼠进行成像。探针应在肺部转移灶中积聚，这可以通过离体成像和组织学检查来证实。在人黑色素瘤异种移植模型（例如A375、SK-MEL-28）的研究中，使用雌性无胸腺裸鼠代替C57BL/6小鼠。成像方案类似。为了评估探针检测小肿瘤的效用，使用肿瘤体积较小的（例如50-100 mm³）小鼠。由于靶标（黑色素）浓度高，预计该探针将具有高灵敏度。药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t1/2、CL）可从动态PET图像或血液样本研究中获得。血液样本采集时，在探针注射后不同时间点（2、5、10、15、30、45、60、90、120分钟）从尾静脉采集10 μL血液。使用γ计数器测量每个血液样本中的放射性，并以%ID/g表示。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
[18F]黑色素探针-1在小鼠体内的药代动力学数据显示，该探针从泌尿系统清除迅速，2小时后所有主要器官的摄取量几乎达到背景水平。静脉注射（3.7 MBq）后，探针迅速从血液中清除，血液半衰期约为5-15分钟。探针主要经肾脏排泄至尿液，在肝脏或其他器官的滞留量极少。生物分布显示，注射后2小时，非靶组织（例如肌肉、心脏、肺、脑）的摄取量较低。该探针在体内稳定，在血浆中代谢极少。优异的药代动力学特性使其具有较高的肿瘤与背景对比度，适用于临床转化。非放射性前体用作校准和放射性示踪剂制备的标准品。该前体可溶于DMSO，应在-20℃避光保存。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
18F标记的探针具有放射性，其在动物体内的给药涉及电离辐射，存在急性及长期毒性的风险。然而，小型动物的给药剂量（3.7-7.4 MBq）通常在急性辐射效应的安全范围内，未观察到明显的毒性反应（例如体重减轻、行为改变、死亡）。预计非放射性前体毒性较低。在细胞活力测定中，浓度高达100 μM的前体未显示出明显的细胞毒性。必须遵循放射性物质处理的标准安全预防措施（屏蔽、剂量测定、污染监测）。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。
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| 参考文献 |
[1]. Liu H, et al. Development of 18F-labeled picolinamide probes for PET imaging of malignant melanoma. J Med Chem. 2013;56(3):895‐901.
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| 其他信息 |
PET成像剂
黑色素探针-1是一种用于检测恶性黑色素瘤的18F标记的PET显像剂。其前体的化学名称为N-(2-(二乙氨基)乙基)-5-氟吡啶甲酰胺。它是一种小分子（分子量239.29），能够以高亲和力和选择性靶向黑色素。放射性标记通常是通过18F-氟化物对合适的离去基团（例如硝基或三甲基铵）进行亲核取代反应来实现的，必要时进行脱保护。该放射性示踪剂已在临床前模型中进行了评估，并显示出临床转化的潜力。截至检索日期，该探针可能尚未获得FDA批准用于临床，但可用于研究用途。非放射性探针以固体（或油状物）形式储存在-20℃下，并避光保存。由于18F的半衰期很短（110分钟），放射性探针必须在合成后数小时内使用。该探针是研究黑色素瘤生物学、评估黑色素瘤疗法疗效以及早期检测黑色素瘤及其转移的宝贵工具。 |
| 分子式 |
C12H18FN3O
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|---|---|
| 分子量 |
239.289226055145
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| 精确质量 |
239.143
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| CAS号 |
1420844-62-7
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| PubChem CID |
71562765
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow oil
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| LogP |
1.3
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| tPSA |
45.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
17
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| 分子复杂度/Complexity |
234
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN(CC)CCNC(=O)C1=NC=C(C=C1)F
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| InChi Key |
TWRNBUQZDSVURX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H18FN3O/c1-3-16(4-2)8-7-14-12(17)11-6-5-10(13)9-15-11/h5-6,9H,3-4,7-8H2,1-2H3,(H,14,17)
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| 化学名 |
N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-fluoropyridine-2-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 250 mg/mL (1044.76 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (26.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 62.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (26.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 62.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.1790 mL | 20.8951 mL | 41.7903 mL | |
| 5 mM | 0.8358 mL | 4.1790 mL | 8.3581 mL | |
| 10 mM | 0.4179 mL | 2.0895 mL | 4.1790 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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